張 靖， 陳廣文， 郭祥軍， 萬 文， 李 猛

(貴州黃平農(nóng)博翔有限責任公司，貴州 黃平 556100)

近年來隨著貴州省肉牛養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，標準化、規(guī)?；曫B(yǎng)肉牛已成為1種普遍模式。由于擴欄和引種的需要，各場從外地(包括省外和國外)引進牛日漸頻繁，同時也易引發(fā)很多傳染病的流行，增加各種疫情風險。其中布魯氏菌病(簡稱布病)是肉牛場需要重點防范的疫病之一，一旦感染可給人畜造成危害，不但使肉牛生產(chǎn)遭受嚴重損失，還可引起公共衛(wèi)生安全問題。

貴州黃平農(nóng)博翔有限責任公司現(xiàn)建有肉牛規(guī)模養(yǎng)殖場3個，其中1個是目前貴州省存欄規(guī)模最大的肉牛養(yǎng)殖場之一。為確保公司肉牛養(yǎng)殖安全，順利把肉牛養(yǎng)殖基地建成“貴州黃平草畜生態(tài)循環(huán)農(nóng)業(yè)科技示范園區(qū)”，切實做好肉牛布病的防控工作，降低疫病風險，提高養(yǎng)殖效益，促進畜牧業(yè)經(jīng)濟健康發(fā)展，有力維護社會公共衛(wèi)生安全，特制定了《規(guī)?；馀ｐB(yǎng)殖場布魯氏菌病凈化技術》，并認真組織實施，取得了較好的成效?，F(xiàn)介紹如下，供參考。

1 布病簡介

布病是由布魯氏菌引起的人畜共患傳染病，世界動物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為B類動物疫病，我國將其列為二類動物疫病和人的乙類傳染病。

1.1 病原特征布魯氏菌是1種微小、近似球狀的桿菌，形態(tài)不規(guī)則，不形成芽胞、無莢膜、革蘭氏染色陰性，為需氧兼性厭氧菌。該菌有很強的侵襲力，能從黏膜、皮膚侵入機體。對熱抵抗力不強，60 ℃ 30分鐘即可殺滅；對干燥抵抗力較強，在干燥土壤中可生存2個月以上，在毛、皮中可生存3～4個月，對日光照射以及一般消毒劑的抵抗力不強。

1.2 流行特點母牛較公牛更易感染，成年牛比幼牛易感。傳播途徑包括呼吸道、消化道、生殖道和皮膚等。病菌隨患病的母牛陰道分泌物和公牛精液排出，特別是流產(chǎn)的胎兒、胎盤和羊水內含有大量病菌。消化道傳染主要是采食了被病菌污染的飼料、飲水；直接接觸傳染主要是通過用具、交配、皮膚或黏膜。新發(fā)病牛群流產(chǎn)可發(fā)生于不同的胎次，常發(fā)病牛群流產(chǎn)多發(fā)生于初次妊娠牛。

1.3 臨床癥狀母牛除乳腺炎、流產(chǎn)外，其他癥狀常不明顯。流產(chǎn)多產(chǎn)出死胎或弱胎，可出現(xiàn)胎衣不下或子宮內膜炎，從陰道流出污穢不潔、惡臭的分泌物。公牛發(fā)生睪丸炎，并失去配種能力。有的病牛發(fā)生關節(jié)炎、滑液囊炎、淋巴結炎或膿腫。

1.4 病理變化剖檢可見胎盤呈淡黃色膠樣浸潤，表面附有糠麩樣絮狀物和膿汁。胎兒胃內有黏液性絮狀物，胸腔積液，淋巴結和脾臟腫大，有壞死灶。

1.5 診斷根據(jù)流行特點、臨床癥狀和剖檢病變不易確診，必須通過實驗室檢查才能確診。如果母牛發(fā)生群體性流產(chǎn)，可高度懷疑。

1.5.1 病原學檢查采集流產(chǎn)胎衣、水腫液、肝、脾、淋巴結、胎兒胃內容物等組織，制成抹片，用柯茲羅夫斯基染色法染色鏡檢，布魯氏菌為紅色球桿狀，而其他菌為藍色。鏡檢必須在二級生物安全實驗室進行，做好人員防護，

1.5.2 血清學檢查一般采用試管凝集試驗(SAT)、間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(IELISA)和競爭酶聯(lián)免疫吸附試驗(CELISA)進行。

1.6 治療(1)對無保種價值的一般病牛應撲殺，并無害化處理。(2)對價值較昂貴的種?？稍诟綦x條件下進行治療。流產(chǎn)伴有子宮內膜炎的母?？捎?.1%高錳酸鉀溶液沖洗陰道和子宮，每日早、晚各1次；另外，應用抗生素(如四環(huán)素、土霉素、鏈霉素等)按說明書用量和方法進行全身治療。

2 凈化方法

2.1 血樣采集對新購牛群在進場前全部采集血樣，其他場內個體按照隨機抽樣原則采集血樣，進行布魯氏菌抗體檢測。樣品的采集、保存按照《動物疫病實驗室檢驗采樣方法》(NY/T 541—2002)執(zhí)行。通常采用牛尾根靜脈采血法：采血者左手抓住牛尾上翹，與水平線保持45°角，在離尾根10 cm左右(第4、5尾椎骨交界處)中點凹陷處中心線位置，先用酒精棉球消毒，然后用動物用一次性連試管采血器采血。將針頭垂直刺入約1 cm深，針頭觸及尾骨后再退出1 mm進行抽血，一般采血5 mL即可。抽血完成后拔出針頭，用酒精棉球按壓針孔防止出血。血樣做好編號記錄，按常規(guī)方法分離血清。

2.2 檢測方法按照中華人民共和國國家標準《動物布魯氏菌病診斷技術》(GB/T 18646—2018)操作規(guī)程進行，初檢采用虎紅平板凝集試驗，復檢采用布病試管凝集試驗。

2.2.1 虎紅平板凝集試驗在帶孔玻璃板上各標記受檢血清編號，然后在孔上加相應血清0.03 mL，在受檢血清旁滴加虎紅抗原0.03 mL，用微型振蕩器振蕩混勻。每次檢測設陰性、陽性血清對照。判定：受檢血清在4 min內出現(xiàn)肉眼可見凝集現(xiàn)象者判為陽性(+)，無凝集現(xiàn)象、呈均勻粉紅色者判為陰性(-)。

2.2.2 布病試管凝集試驗受檢血清的釋釋：第1管標記檢驗編號后加稀釋液(0.5%石炭酸生理鹽水)1.2 mL，第2～4管各加入稀釋液0.5 mL，用1 mL吸管取被檢血清0.05 mL，加入第1管，并混合均勻，然后用吸管吸取0.25 mL棄去，取0.5 mL混合液加入第2管，用該管如前述方法混合，再吸第2管混合液0.5 mL至第3管，如此倍比稀釋至第4管，從第4管棄去混合液0.5 mL，將20倍稀釋的抗原0.5 mL加入已釋釋好的各血清管中，并振蕩均勻，置37～40 ℃溫箱24 h，取出檢查并記錄結果。每次試驗均應設陰性血清、陽性血清和抗原對照。判定：參照比濁管，按診斷技術標準判讀陽性、陰性和可疑。

2.3 檢出陽性牛的處置措施

2.3.1 上報、撲殺檢測出陽性牛首先要向縣級動物防疫機構報備，配合開展處置工作，并對陽性牛按照農(nóng)業(yè)農(nóng)村部頒布的《布魯氏菌病防治技術規(guī)范》要求進行撲殺，并做好無害化處理工作。開展流行病學調查和疫源追蹤；對陽性同群、同批次、同圈牛群進行檢測。

2.3.2 無害化處理按照《病害動物和病害動物產(chǎn)品生物安全處理規(guī)程》(GB 16548—2006)規(guī)定對病牛及污染的場所、用具、物品進行嚴格消毒和無害化處理。

2.3.3 做好消毒滅源工作將健康、染疫、疑似染疫牛分別隔離飼養(yǎng)，并立即對整個養(yǎng)牛場進行消毒?？刹捎脟婌F消毒法、浸泡消毒法、火焰消毒法、熏蒸消毒法等，要擴大消毒面，增加消毒次數(shù)，不留死角。被病牛分泌物、排泄物污染的場地用漂白粉、氯制劑等進行清洗消毒；焚燒或深埋(加生石灰)被污染的飼料、墊草、糞便及其他污物；每周1次用消毒藥噴霧消毒圈舍地面、墻群和護欄等。

2.4 凈化分區(qū)根據(jù)對牛場的布病檢測結果，按檢出陽性和各場的區(qū)域分布情況，把牛場分為未控制區(qū)、控制區(qū)、穩(wěn)定控制區(qū)和凈化區(qū)。

2.5 日常監(jiān)測

2.5.1 自繁牛群的監(jiān)測在每年的春季和秋季采用虎紅平板凝集試驗對全場肉牛進行普檢，如果發(fā)現(xiàn)陽性，再用布病試管凝集試驗進行復檢，雙陽性牛及時撲殺并進行無害化處理，做好防疫隔離，調整陰性牛群進入相應區(qū)域。一旦有陽性病例被檢出，要立即調整普檢方案，從1年2次轉為每月1次，連續(xù)檢測3個月，均為陰性后方可轉入常規(guī)檢測(1～2次/年)。

2.5.2 外購牛群的監(jiān)測需要從外地引進種母牛、架子牛及犢牛時，應符合國家《動物防疫法》《動物檢疫管理辦法》的有關規(guī)定，對于進口肉牛還必須具備海關檢疫局開具的檢疫合格證明。在引進牛場前30天用虎紅平板凝集試驗進行初篩，發(fā)現(xiàn)陽性再用布病試管凝集試驗進行檢測，如果檢測出現(xiàn)雙陽，要暫停對該批次牛的引進。已引進的牛群要先在隔離牛舍觀察，隔離期間獸醫(yī)技術人員要密切關注牛的精神、采食、體溫等各項指標并且做好記錄；45天后用虎紅平板凝集試驗進行初篩，結果全部為陰性才能進入養(yǎng)牛場(區(qū))。飼養(yǎng)滿1年后按自繁牛群的檢測方法進行檢測。

2.5.3 監(jiān)測-撲殺-凈化在監(jiān)測中發(fā)現(xiàn)布病陽性的場(群)要及時撲殺陽性牛，場(群)每隔3個月要全群檢測1次，直到連續(xù)2次檢不出布病陽性牛，則視為布病健康場(群)。健康場(群)每6個月全群檢測1次，連續(xù) 2次檢測布病陰性可視為布病凈化場(群)。凈化場群每年檢測1次，保證布病檢測陰性。

3 其他措施

養(yǎng)牛場要做好布病的凈化防控工作，還需要做好養(yǎng)牛場選址布局、設施設備配置、生產(chǎn)管理、生物安全管理和防疫管理等各方面的工作。

3.1 牛場布局與設施設備要求

3.1.1 牛場布局首先在建場時就應按照農(nóng)業(yè)農(nóng)村部《動物防疫條件審查辦法》中相關要求選址、規(guī)劃布局。養(yǎng)牛場位置要獨立安全，遠離交通干道、居民生活區(qū)、學校、動物屠宰廠、牲畜交貿市場及其他動物養(yǎng)殖場。場內辦公區(qū)、生活區(qū)、生產(chǎn)區(qū)要嚴格分開，辦公區(qū)和生活區(qū)要位于生產(chǎn)區(qū)和飼料加工區(qū)的上風向或側風向；隔離觀察區(qū)、糞污處理區(qū)和無害化處理區(qū)位于生產(chǎn)區(qū)的下風向或側風向，并保持50 m以上距離。場內凈道和污道要嚴格分開，凈道與污道如有部分交叉，須有嚴格的消毒制度。

3.1.2 防疫設施設置圍墻或利用地型設置生物圍欄，使養(yǎng)牛場與外界有效隔離；對入場道路要設置防護設施，防止外來人員、車輛、動物隨意進入場區(qū)；生產(chǎn)區(qū)門口應設置車輛消毒池和人員消毒通道；養(yǎng)殖場要配備消毒車、高壓噴槍等設備，能對全場進行定期消毒；對飼養(yǎng)員要配備更衣室、洗浴間等，確保進入生產(chǎn)區(qū)人員的消毒效果；每棟牛舍門口應設置消毒池和洗手設備。

3.1.3 獸醫(yī)室設置獸醫(yī)室并備齊常用臨床診療器械及消毒設備等，配備冷藏柜、藥品柜保證治療和消毒藥品的安全存放。獸醫(yī)室的工作平臺要能滿足采樣、血清分離、實驗室檢測等工作的需要。

3.1.4 無害化處理設施設備配備無害化處理設施，采用有效方式進行無害化處理，并有無害化處理記錄。此外，還應配備處理糞污的環(huán)保設施設備，有固定的牛糞儲存、堆放設施和場所，并有防雨、防滲漏、防溢流措施，最好做到糞污就地循環(huán)利用。

3.1.5 生產(chǎn)設施設備生產(chǎn)設施設備在滿足基本生產(chǎn)需要的同時，應有利于降低疫病傳播風險，做到設施設備不混用、不交叉，對于季節(jié)性使用或長期放置后使用的設施設備應進行有效的清洗消毒。

3.2 管理措施

3.2.1 生產(chǎn)管理(1)檔案管理：牛場檔案管理的主要內容有：牛群來源、特征、生產(chǎn)性能記錄；日常生產(chǎn)的配種、產(chǎn)犢、轉群、飼料消耗記錄；飼草飼料來源，獸藥、添加劑使用情況記錄；牛群出場銷售記錄；完整的防疫記錄(包括引種、隔離、檢測、獸醫(yī)診療與用藥、疫情報告、淘汰、病死牛無害化處理和消毒等)；階段性疫病流行情況檔案及疫病監(jiān)測記錄；關鍵設備使用和保養(yǎng)記錄。各種檔案和記錄應保存3年以上。(2)制度管理：建立飼料、獸藥、生物制品等投入品使用制度；建立免疫、引種、隔離、獸醫(yī)診療與用藥、疫情報告、無害化處理、消毒等防疫制度；建立日常生產(chǎn)管理制度、主要生產(chǎn)操作規(guī)程、員工培訓考核獎懲制度、動物發(fā)病或階段性疫病情況報告制度、車輛及人員出入管理制度，建立有布病監(jiān)測計劃、疫病凈化方案和陽性動物處置方案等。(3)飼養(yǎng)管理：根據(jù)牛群來源、體重、體況、性別等要素進行分群飼養(yǎng)。根據(jù)生產(chǎn)目標合理組建牛群，調節(jié)飼養(yǎng)密度，做到公母分開、大小分開、強弱分開，分別制定飼養(yǎng)標準和防疫程序。

3.2.2 生物安全管理(1)建立入場和進入生產(chǎn)區(qū)的人員登記記錄。進入生產(chǎn)區(qū)的人員必須經(jīng)嚴格消毒，由消毒通道進入，進出牛舍時應經(jīng)消毒池進行腳部消毒和洗手消毒。(2)外來人員禁止進入生產(chǎn)區(qū)，必要時按程序批準和嚴格消毒方可入內。(3)本場負責診療巡查、配種和免疫的技術人員，每次出入牛舍和完成工作后都應嚴格消毒。(4)養(yǎng)牛場技術人員不得開展對外診療、配種和免疫等工作。(5)牛場內禁止飼養(yǎng)羊、豬、貓、狗及其他動物。疑似染疫的畜產(chǎn)品或其他物品禁止入場。(6)外來車輛入場前應全面消毒后才可進入，非經(jīng)許可批準禁止進入生產(chǎn)區(qū)。出售肉牛時進場運牛的車輛要在指定的裝牛臺裝牛，車輛出場后場內行駛路線要嚴格消毒。外購牛群入場前要先在隔離牛舍隔離45天，并檢疫合格后才能調進生產(chǎn)區(qū)。