嚴(yán)桂杰 藍(lán)夢(mèng)柳 丘建芳 李小艷 許文 吳水生

摘要：目的? 分析比較澤瀉飲片麩炒、鹽炙、土炒、酒炙炮制前后14種三萜類成分的含量，探討澤瀉及其不同炮制品的利尿作用。方法? 采用超高液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（UPLC-MS），色譜柱為Waters CORTECS UPLC C18（2.1 mm×100 mm，1.6 μm），以乙腈-水為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，單四級(jí)桿質(zhì)譜采用正離子SIR模式，測(cè)定澤瀉生品和炮制品飲片中16-羰基-23-乙酰澤瀉醇A、16-羰基-24-乙酰澤瀉醇A、澤瀉醇C、澤瀉醇F、23-乙酰澤瀉醇C、澤瀉醇L、24-乙酰澤瀉醇F、澤瀉醇A、23-乙酰澤瀉醇A、24-乙酰澤瀉醇A、澤瀉醇G、澤瀉醇B、23-乙酰澤瀉醇B、11-去氧澤瀉醇B共14種三萜類成分的含量，探討澤瀉炮制過程中化學(xué)成分含量變化;采用水負(fù)荷大鼠代謝籠法，比較澤瀉炮制前后的利尿作用。結(jié)果? 經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，所建立UPLC-MS同時(shí)測(cè)定澤瀉飲片中14種三萜類成分的方法符合分析要求。與生品比較，澤瀉炮制品化學(xué)成分最主要的變化是澤瀉三萜類24、25位環(huán)氧環(huán)發(fā)生開環(huán)轉(zhuǎn)化，23-乙酰澤瀉醇B、澤瀉醇B、11-去氧澤瀉醇B和23-乙酰澤瀉醇C含量下降，而澤瀉醇A類化合物含量升高，且鹽炙澤瀉的化學(xué)成分轉(zhuǎn)化最為明顯。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：生品組和各炮制品組1 h尿量較空白對(duì)照組顯著增加，且利尿效應(yīng)酒炙品>土炒品>麩炒品>鹽炙品>生品;生品組和鹽炙品組2 h尿量與空白對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而酒炙品組、土炒品組、麩炒品組尿量較空白對(duì)照組顯著增加，且利尿效應(yīng)酒炙品>土炒品>麩炒品。結(jié)論? 本研究建立的UPLC-MS測(cè)定澤瀉生品及不同炮制品中化學(xué)成分含量方法準(zhǔn)確、快速。澤瀉炮制后化學(xué)成分發(fā)生明顯變化，澤瀉經(jīng)酒炙、土炒和麩炒后較生品利尿作用顯著增強(qiáng)。

關(guān)鍵詞：澤瀉;炮制;超高液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用;含量測(cè)定;利尿;大鼠

中圖分類號(hào)：R283.1? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? 文章編號(hào)：1005-5304（2020）04-0059-07

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.201906015

Study on Changes of Chemical Composition and Diuretic Effect in

Alismatis Rhizoma after Processing

YAN Guijie1，2， LAN Mengliu1， QIU Jianfang1， LI Xiaoyan1， XU Wen1，2， WU Shuisheng1，2

1. School of Pharmacy， Fujian University of Traditional Chinese Medicine， Fuzhou 350122， China; 2. Centre of Biomedical Research & Development， Fujian University of Traditional Chinese Medicine， Fuzhou 350122， China

Abstract： Objective To analyze the contents of 14 kinds of triterpenoids composition and diuretic effect of Alismatis Rhizoma before and after processing， including stir-frying with bran， stir-frying with salt-water， stir-frying with soil， and stir-frying with wine. Methods The UPLC-MS method was performed on a Waters CORTECS UPLC C18 column （2.1 mm × 100 mm， 1.6 μm） with a gradient elution using acetonitrile and water to quantitative analysis of the 14 triterpenoids （16-oxo-23-acetate-alisol A， 16-oxo-24-acetate-alisol A， alisol C， alisol F， alisol C 23-acetate， alisol L， alisol F 24-acetate， alisol A， alisol A 23-acetate， alisol A 24-acetate， alisol G， alisol B， alisol B 23-acetate， 11-deoxy-alisol B） of crude Alismatis Rhizoma and processed products. The method of metabolizable cage of rats was adopted to study the difference of diuretic effect of Alismatis Rhizoma before and after processing. Results Through methodological verification， the method of simultaneous determination of 14 triterpenoids in Alismatis Rhizoma by the established UPLC-MS met the analytical requirements. Compared with crude Alismatis Rhizoma， the most?important processing change in the 14 triterpenoids of Alismatis Rhizoma was the ring-opening at 24， 25 epoxy rings in the triterpenoids. The contents of alisol B 23-acetate， alisol B， 11-deoxy alisol B and alisol C 23-acetate decreased， and the content of alisol A increased. The conversion was most significant in stir-frying with salt-water. The results of the rats experiment showed that compared with the control group， the urine output of crude and processed products of Alismatis Rhizoma significantly increased within 1 h， and the diuretic effect of Alismatis Rhizoma processed products， stir-frying with wine > stir-frying with soil > stir-frying with bran > stir-frying with salt-water > crude Alismatis Rhizoma; there was no statistical significance in urine output of crude and stir-frying with salt-water within 2 h， Alismatis Rhizoma processed products of stir-frying with wine， soil， and bran significantly increased compared with the control group， and the diuretic effect of stir-frying with wine > stir-frying with soil > stir-frying with bran. Conclusion The established UPLC-MS method is accurate and rapid for the determination the chemical composition of different processed products of Alismatis Rhizoma. The chemical composition of Alismatis Rhizoma processed products changes after the processing， and the diuretic effect of the stir-frying with wine， soil and bran of Alismatis Rhizoma increases.

Keywords： Alismatis Rhizoma; processing; UPLC-MS; content determination; diuretic effect; rats

澤瀉為澤瀉科植物澤瀉Alisma orientale（Sam.）Juzep.的干燥塊莖[1]，味甘，性寒，歸腎、膀胱經(jīng)，用于治療水腫脹滿、泄瀉尿少、小便不利等。澤瀉炮制方法較多，始載于南北朝《雷公炮炙論》“凡使不計(jì)多少，細(xì)銼，酒浸一宿，漉出，暴干任用也”;除酒炙外，《得配本草》記載澤瀉“滋陰利水鹽水炒”“健脾生用或酒炒用”“麩炒可緩和藥性，長于滲濕和脾”，《本經(jīng)逢原》有“利小便生用，入補(bǔ)劑鹽、酒炒”等論述?？梢姡瑵蔀a炮制方法主要有酒炙、鹽炙、麩炒等，且不同炮制品的功效不同。

澤瀉有利水滲濕功效，其炮制品利尿效應(yīng)有所差異。如曾春暉等[2]采用代謝籠法和稱重法研究顯示，廣西澤瀉鹽炙前后對(duì)正常小鼠尿量、肺和腦含水量均無顯著影響，但能明顯增加水腫模型小鼠尿量，減輕肺水腫程度。澤瀉鹽炙后化學(xué)成分發(fā)生改變可能是其炮制前后利尿作用差異的主要原因[3]。目前關(guān)于澤瀉生品與多種炮制品利尿作用對(duì)比研究的報(bào)道較少。本研究以澤瀉不同炮制品炮制前后14種化學(xué)成分的含量變化結(jié)合利尿效應(yīng)評(píng)價(jià)，探討澤瀉炮制過程化學(xué)成分的轉(zhuǎn)化及其利尿作用的變化，為澤瀉的臨床應(yīng)用提供參考。

1? 儀器、試藥與動(dòng)物

Waters SQD Ⅱ MS system（美國沃特世公司），Waters超高液相色譜儀（美國沃特世公司），大鼠代謝籠（意大利Tecniplast公司），RE-2000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠），HH-S型水浴鍋（鄭州長城科工貿(mào)有限公司），YP202N分析天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）。

澤瀉購于福建省建甌市GAP產(chǎn)地，經(jīng)福建中醫(yī)藥大學(xué)藥用植物實(shí)驗(yàn)室范世明高級(jí)實(shí)驗(yàn)師鑒定為澤瀉科澤瀉屬植物澤瀉Alisma orientale（Sam.）Juzep.的干燥塊莖，于福州回春藥業(yè)GMP車間切片并制備不同炮制品。對(duì)照品16-羰基-24-乙酰澤瀉醇A、澤瀉醇C、澤瀉醇F、23-乙酰澤瀉醇C、澤瀉醇L、24-乙酰澤瀉醇F、澤瀉醇A、24-乙酰澤瀉醇A、澤瀉醇G、澤瀉醇B、23-乙酰澤瀉醇B、11-去氧澤瀉醇B，均為本實(shí)驗(yàn)室制備，經(jīng)峰面積歸一法測(cè)定純度均大于98%;16-羰基-23-乙酰澤瀉醇A、23-乙酰澤瀉醇A因自制對(duì)照品不穩(wěn)定，經(jīng)校正因子計(jì)算后定量使用[4]。內(nèi)標(biāo)物甘草次酸（批號(hào)14082210，成都曼思特生物科技有限公司，純度>99.10%），甲酸（色譜純，美國ROE Scientific Inc），乙腈（色譜純，德國默克公司），超純水，氫氯噻嗪片（批號(hào)A170804，山西云鵬制藥有限公司），吐溫-80（批號(hào)20170320，天津市福晨化學(xué)試劑廠）。

清潔級(jí)雄性SD大鼠80只，體質(zhì)量（200±20）g，上海斯萊克公司提供，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK（滬）2017-0005，飼養(yǎng)于SPF級(jí)環(huán)境，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，自由進(jìn)食飲水。

2? 方法與結(jié)果

2.1? 不同炮制品制備

鹽炙品：200 g澤瀉用26 mL鹽水（4.0 g鹽），悶潤透，100 ℃炒制8 min[5];麩炒品：每200 g澤瀉用30 g麥麩，200 ℃炒制3 min;酒炙品：每200 g澤瀉用20 mL黃酒，悶潤1 h，140 ℃炒制8 min;土炒品：每200 g澤瀉用60 g黃土，210 ℃炒制1.5 min[6]。

2.2? 大鼠灌胃液制備

取澤瀉生品及鹽炙品、麩炒品、酒炙品、土炒品各200 g，粉碎，過60目篩，加8倍量85%乙醇溶液，回流提取2次，每次2 h，冷卻，過濾，減壓濃縮至無醇味，用1%吐溫-80配制成相當(dāng)于原藥材1.25 g/kg的藥液，即得澤瀉生品及不同炮制品的大鼠灌胃液。取氫氯噻嗪片，研磨成細(xì)粉，用1%吐溫-80配制成0.005 g/kg的溶液，備用。

2.3? 對(duì)照品溶液制備

稱取14種對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)物甘草次酸，精密稱定，分別用乙腈制成16-羰基-23-乙酰澤瀉醇A、16-羰基- 24-乙酰澤瀉醇A、澤瀉醇C、澤瀉醇F、澤瀉醇L、澤瀉醇A、23-乙酰澤瀉醇A、24-乙酰澤瀉醇A、澤瀉醇G、23-乙酰澤瀉醇C、澤瀉醇B、23-乙酰澤瀉醇B、11-去氧澤瀉醇B、24-乙酰澤瀉醇F濃度分別為0.430、0.442、1.490、1.125、1.304、0.332、0.254、0.324、0.525、1.352、1.360、2.248、0.435、1.060 mg/mL對(duì)照品貯備液及甘草次酸濃度為1.0 mg/mL的內(nèi)標(biāo)貯備液。分別吸取對(duì)照品貯備液適量，用乙腈稀釋成混合對(duì)照品溶液及梯度濃度的對(duì)照品溶液，內(nèi)標(biāo)溶液濃度為500 ng/mL。

2.4? 供試品溶液制備

取澤瀉生品及不同炮制品各約1.0 g，精密稱定，加入25 mL色譜乙腈于50 mL具塞三角瓶中，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率250 W，頻率50 kHz）30 min，放冷后補(bǔ)足減失的質(zhì)量，10 000 r/min離心10 min，取上清液。取不同上清液各50 μL，分別加入950.0 μL內(nèi)標(biāo)溶液，渦旋1 min，0.22 μm微孔濾膜過濾后進(jìn)樣分析。

2.5? 檢測(cè)條件

色譜條件：色譜柱為Waters CORTECS UPLC C18（2.1 mm×100 mm，1.6 mm），流動(dòng)相為水（A）-乙腈（B），梯度洗脫（0～5 min，45%～85%B;5～6 min，85%～95%B;6～6.5 min，95%～95%B），流速0.30 mL/min，進(jìn)樣量1 μL，柱溫45 ℃。

質(zhì)譜條件：離子源為ESI源，檢測(cè)方式為正離子檢測(cè)（正離子模式響應(yīng)強(qiáng)度優(yōu)于負(fù)離子），掃描方式為SIR模式，對(duì)澤瀉三萜類成分進(jìn)行質(zhì)譜調(diào)諧，因澤瀉三萜單體均成加Na+分子離子峰，故選擇[M+Na]+分子離子峰作為定量離子峰。其他參數(shù)：萃取因子Ex 2.00 V，RF系數(shù)0.1 V，去溶劑氣流500 L/Hr，錐孔氣流50 L/Hr，源溫度150 ℃，去溶劑溫度200 ℃，錐孔電壓（cone）40 V。

數(shù)據(jù)采用Waters MassLynx 4.1軟件進(jìn)行分析。各待測(cè)物和內(nèi)標(biāo)物相關(guān)參數(shù)見表1，澤瀉中14種成分UPLC圖見圖1。

2.6? 方法學(xué)考察

2.6.1? 線性關(guān)系考察

精密吸取各梯度濃度混合對(duì)照品溶液50 μL，分別加入950.0 μL內(nèi)標(biāo)物溶液，渦旋1 min，0.22 μm微孔濾膜過濾后進(jìn)樣分析，考察分析物和內(nèi)標(biāo)物的峰面積之比（Ai/As）與分析物濃度的線性關(guān)系，計(jì)算回歸方程及相關(guān)系數(shù)。以信噪比（S/N）=3確定分析物的檢測(cè)限（LOD），以S/N=10確定定量限（LOQ），結(jié)果見表2。

2.6.2? 精密度試驗(yàn)

取“2.3”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，按“2.5”項(xiàng)下色譜條件、質(zhì)譜條件進(jìn)行分析，1 d內(nèi)平行進(jìn)樣6次，連續(xù)進(jìn)樣3 d，記錄16-羰基-23-乙酰澤瀉醇A、16-羰基-24-乙酰澤瀉醇A、澤瀉醇C、澤瀉醇F、23-乙酰澤瀉醇C、澤瀉醇L、24-乙酰澤瀉醇F、澤瀉醇A、23-乙酰澤瀉醇A、24-乙酰澤瀉醇A、澤瀉醇G、澤瀉醇B、23-乙酰澤瀉醇B和11-去氧澤瀉醇B的峰面積與內(nèi)標(biāo)的比值，計(jì)算日內(nèi)精密度和日間精密度，結(jié)果見表3，表明儀器精密度良好。

2.6.3? 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同批次澤瀉樣品6份，按“2.4”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，按“2.5”項(xiàng)下色譜、質(zhì)譜條件進(jìn)行分析，計(jì)算其含量及RSD，結(jié)果見表3，表明本試驗(yàn)建立的方法重復(fù)性良好。

2.6.4? 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，分別于0、4、8、12、24 h進(jìn)樣分析，結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性較好，見表3。

2.6.5? 加樣回收率試驗(yàn)

取同一批次澤瀉供試品溶液，精密量取0.5 g，置50 mL三角瓶中，平行6份，分別精密加入近似1∶1含量的16-羰基-23-乙酰澤瀉醇A、16-羰基-24-乙酰澤瀉醇A、澤瀉醇C、澤瀉醇F、23-乙酰澤瀉醇C、澤瀉醇L、澤瀉醇A、23-乙酰澤瀉醇A、24-乙酰澤瀉醇A、澤瀉醇G、澤瀉醇B、23-乙酰澤瀉醇B和11-去氧澤瀉醇B的對(duì)照品貯備液，N2吹干溶劑，按“2.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.5”項(xiàng)下色譜、質(zhì)譜條件進(jìn)行分析，根據(jù)回歸方程得含量，并計(jì)算平均回收率和RSD，結(jié)果見表4，表明本方法回收率良好。由于澤瀉生品及其不同炮制品均未檢出24-乙酰澤瀉醇F，所以未進(jìn)行該成分加樣回收率試驗(yàn)。

2.7? 樣品測(cè)定

按上述方法，測(cè)定澤瀉生品及炮制品中14種成分含量，結(jié)果見表5（其中24-乙酰澤瀉醇F均未檢出）。23-乙酰澤瀉醇B和23-乙酰澤瀉醇C的炮制化學(xué)轉(zhuǎn)化可能途徑見圖2。

2.8? 澤瀉及其炮制品對(duì)大鼠尿量的影響

大鼠禁食18 h后，按25 mL/kg灌胃超純水，收集2 h尿量，尿量達(dá)灌服量40%以上者為合格動(dòng)物。篩選出水負(fù)荷尿量合格的70只大鼠，按體質(zhì)量隨機(jī)分為空白對(duì)照組、氫氯噻嗪組、生品組、麩炒品組、鹽炙品組、土炒品組、酒炙品組，每組10只。大鼠禁食不禁水18 h，按25 mL/kg灌胃超純水，形成水負(fù)荷模型。30 min后擠壓膀胱排盡余尿，給藥組大鼠按20 mL/kg分別灌胃相應(yīng)藥液，空白對(duì)照組灌胃等量1%吐溫-80，將大鼠立即置于代謝籠內(nèi)，每隔1 h記錄1次累積尿量，共記錄2 h[7]。

與空白對(duì)照組比較，氫氯噻嗪組大鼠尿量明顯增加（P<0.01），生品組及各炮制品組1 h尿量不同程度增加（P<0.05，P<0.01），利尿效應(yīng)酒炙品>土炒品>麩炒品>鹽炙品>生品;生品組和鹽炙品組2 h尿量與空白對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），而酒炙品組、土炒品組、麩炒品組尿量較空白對(duì)照組顯著增加，利尿效應(yīng)酒炙品>土炒品>麩炒品（P<0.05，P<0.01）。結(jié)果見表6。

3? 討論

生澤瀉利水而不傷陰;鹽澤瀉能引藥下行，可增強(qiáng)滋陰、利水作用[8]。澤瀉炮制品的化學(xué)成分含量變化研究已有報(bào)道，曹柳等[9]采用HPLC研究清炒、麩炒、鹽炙對(duì)澤瀉中澤瀉醇A、24-乙酰澤瀉醇A、澤瀉醇B和23-乙酰澤瀉醇B含量的影響，與生澤瀉比較，清炒品中上述4種成分含量均降低，麩炒品均增加，鹽炙品除23-乙酰澤瀉醇B外均有所增加。韓偉健等[10]采用基于1H NMR的代謝組學(xué)方法分析了澤瀉鹽炙過程中的化學(xué)成分變化，并建立了追蹤、識(shí)別中藥復(fù)雜成分在炮制過程中變化的分析方法，結(jié)果表明澤瀉生品飲片與鹽炙品飲片成分差異較大，提示澤瀉鹽炙過程中原萜烷型澤瀉醇類成分可能發(fā)生脫水、脫乙?；脱趸磻?yīng)。鄭云楓等[11]發(fā)現(xiàn)，高溫炮制過程中，澤瀉藥材中三萜類主成分23-乙酰澤瀉醇B出現(xiàn)2條轉(zhuǎn)變途徑：一條是氧環(huán)開裂并重排生成24-乙酰澤瀉醇A，進(jìn)一步脫乙?；D(zhuǎn)化成澤瀉醇A;另一條是先脫乙?；蓾蔀a醇B，繼而氧環(huán)開裂轉(zhuǎn)化成澤瀉醇A。這些研究為深入了解澤瀉炮制過程中化學(xué)成分的轉(zhuǎn)化提供了重要依據(jù)，但多數(shù)實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)指標(biāo)有限，主要集中于23-乙酰澤瀉醇B和澤瀉醇A。

本研究表明，澤瀉不同炮制品中的總?cè)坪烤邢陆?，其中澤瀉醇L、澤瀉醇G、澤瀉醇B、23-乙酰澤瀉醇C、23-乙酰澤瀉醇B、11-去氧澤瀉醇B的含量與澤瀉生品比較均有不同程度下降，而炮制品中16-羰基-23-乙酰澤瀉醇A、16-羰基-24-乙酰澤瀉醇A、澤瀉醇C、澤瀉醇F、澤瀉醇A、23-乙酰澤瀉醇A、24-乙酰澤瀉醇A的含量與澤瀉生品比較均不同程度升高。結(jié)合14種三萜類成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)，含量下降的化合物多含有23、24環(huán)氧化結(jié)構(gòu)，而其開環(huán)后的澤瀉醇A類成分含量均升高，以2015年版《中華人民共和國藥典》（一部）澤瀉項(xiàng)下指標(biāo)性成分23-乙酰澤瀉醇B為例，無論生品還是炮制品中，該成分含量均最高，且炮制品中該成分含量均較生品有一定程度下降，可能產(chǎn)生了圖3所示的轉(zhuǎn)化，即23-乙酰澤瀉醇B的23、24位環(huán)氧環(huán)開環(huán)裂解產(chǎn)生23-乙酰澤瀉醇A和24-乙酰澤瀉醇A，導(dǎo)致多數(shù)炮制品中23-乙酰澤瀉醇A和24-乙酰澤瀉醇A含量升高，同時(shí)由于23-乙酰澤瀉醇A或24-乙酰澤瀉醇A進(jìn)一步脫乙?；螽a(chǎn)生澤瀉醇A，故澤瀉醇A也不同程度增加。

另外，23-乙酰澤瀉醇B在炮制過程中脫乙酰基也可轉(zhuǎn)化為澤瀉醇B，澤瀉醇B環(huán)氧開環(huán)則轉(zhuǎn)化為澤瀉醇A。從含量測(cè)定結(jié)果可以看出，鹽炙澤瀉23-乙酰澤瀉醇B含量與生品比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，同時(shí)轉(zhuǎn)化生成的澤瀉醇A、23-乙酰澤瀉醇A和24-乙酰澤瀉醇A含量也最高，澤瀉醇B也大量轉(zhuǎn)化為澤瀉醇A。雖然其他炮制品23-乙酰澤瀉醇B含量較生品無明顯差異，但由于23-乙酰澤瀉醇B含量非常高，其少量轉(zhuǎn)化就會(huì)引起炮制品中澤瀉醇A類成分含量增加，故炮制品中澤瀉醇A類成分含量均較生品顯著提高。

23-乙酰澤瀉醇C是23-乙酰澤瀉醇B母核16位加羰基的化合物，其與23-乙酰澤瀉醇具有相同的23、24位環(huán)氧環(huán)結(jié)構(gòu)。從含量測(cè)定結(jié)果來看，炮制品中16-羰基-23-乙酰澤瀉醇A和16-羰基-24-乙酰澤瀉醇A含量均明顯高于生品，同樣以鹽炙澤瀉最為明顯。與23-乙酰澤瀉醇B不同的是，23-乙酰澤瀉醇C的降解炮制品與生品有明顯差異，說明可能由于16位羰基的引入，使其炮制過程裂解開環(huán)或脫乙酰基轉(zhuǎn)化更為容易，同時(shí)產(chǎn)生大量澤瀉醇C，故不同炮制品中澤瀉醇C的含量均較生品顯著提高。另外，澤瀉醇C可能通過23、24位環(huán)氧環(huán)開環(huán)裂解及16羰基與23位羥基的環(huán)合生成澤瀉醇F，故澤瀉炮制品中澤瀉醇F含量均有顯著提高。

澤瀉中的澤瀉醇L、11-去氧澤瀉醇B可能同樣發(fā)生23、24位開環(huán)，導(dǎo)致炮制后含量不同程度下降。澤瀉醇G可能發(fā)生其他降解，從測(cè)定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，其在生品中有少量存在，但炮制后除鹽炙品外基本消失。本試驗(yàn)還同時(shí)測(cè)定了24-乙酰澤瀉醇F，但所有生品和炮制品中均未檢測(cè)到24-乙酰澤瀉醇F，說明炮制過程中發(fā)生的脫乙?；D(zhuǎn)化為單向轉(zhuǎn)化的不可逆反應(yīng)。另外，鹽炙澤瀉的14種三萜類成分總量與生品比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，另外幾種炮制品也不同程度減少，說明除上述成分轉(zhuǎn)化外，澤瀉三萜在炮制過程中還存在其他轉(zhuǎn)化途徑或降解破壞。

澤瀉生品及不同炮制品的利尿效應(yīng)研究表明，與空白對(duì)照組比較，澤瀉生品及炮制品在1 h內(nèi)均有一定利尿作用，且炮制前后的利尿作用沒有明顯差異，酒炙品組、麩炒品組和土炒品組在2 h內(nèi)的利尿作用均優(yōu)于生品組，尤其酒炙品組的1、2 h利尿效果均最好，而從化學(xué)成分變化角度，酒炙澤瀉與其他幾種炮制品各三萜成分含量或總?cè)坪坎o明顯差異，說明在酒炙過程中發(fā)生的成分轉(zhuǎn)化所達(dá)到的組分間的配伍比例（內(nèi)部構(gòu)成比）可能較其他炮制過程更佳，從而導(dǎo)致其利尿效果最佳。在中藥有效性研究中，除關(guān)注指標(biāo)性成分含量外，其構(gòu)成比也是藥效表征的重要依據(jù)，因而對(duì)臨床中藥飲片的質(zhì)量控制應(yīng)建立整體質(zhì)控模式。

參考文獻(xiàn)：

[1] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：一部[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：229.

[2] 曾春暉，楊柯，劉海燕，等.不同產(chǎn)地澤瀉鹽炙前后成分差異及利尿作用的研究[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18（2）：148-152.

[3] 曾春暉，楊柯，盧國安，等.廣西澤瀉鹽炙前后利尿作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].廣西中醫(yī)藥，2011，34（1）：55-56.

[4] 許文，徐明濤，趙萬里，等.澤瀉提取物三萜類成分含量測(cè)定研究[J].藥物分析雜志，2015，35（2）：210-217.

[5] 陳瑩，丘建芳，黃小強(qiáng)，等.建澤瀉鹽炙工藝優(yōu)化及其HPLC指紋圖譜的建立[J].中國藥房，2017，28（16）：2244-2248.

[6] 丘建芳.澤瀉不同炮制工藝及其物質(zhì)基礎(chǔ)變化研究[D].福州：福建中醫(yī)藥大學(xué)，2014.

[7] 李苗，曾夢(mèng)楠，張貝貝，等.麻黃水煎液及拆分組分對(duì)大鼠利尿作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2018，36（9）：2203-2206.

[8] 王尚科.對(duì)幾種鹽制中藥炮制工藝的改進(jìn)[J].中藥材，1992，15（7）：27.

[9] 曹柳，李青苗，方清茂，等.3種炮制方法對(duì)澤瀉4種三萜類成分的影響[J].中成藥，2016，38（9）：1994-1998.

[10] 韓偉健，林曉彤，郭娜，等.澤瀉鹽制前后成分轉(zhuǎn)化的1H NMR分析[J].波譜學(xué)雜志，2016，33（1）：117-124.

[11] 鄭云楓，朱玉嵐，彭國平.澤瀉炮制過程中23-乙酰澤瀉醇B的轉(zhuǎn)化[J].中草藥，2006，37（10）：1479-1482.

（收稿日期：2019-05-31）

（修回日期：2019-06-22;編輯：陳靜）

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金（81773956）

通訊作者：吳水生，E-mail：wushuishengwss@163.com