李天縱，周 松，周 石

肝細胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是一種具有高發(fā)病率和高死亡率的惡性腫瘤，約占原發(fā)性肝癌的90 %[1]。經(jīng)導(dǎo)管動脈化療栓塞術(shù)(transcatheter arterial chemoembolization，TACE)是目前治療中晚期HCC患者首選非手術(shù)治療方法[2,3]。甲胎蛋白(alpha fetoprotein，AFP)是評估TACE術(shù)后療效的常用標(biāo)志物[4]，但以往研究表明，AFP存在部分假陰性現(xiàn)象[5,6]。研究表明，miR-145在HCC組織中水平下調(diào)，其能夠抑制肝癌細胞的增殖，可能作為診斷和評估療效的潛在生物標(biāo)志物[7]。本研究檢測了HCC患者TACE治療前后血清microRNA-145(miR-145)的變化，以探討其對預(yù)后的預(yù)測價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2013年1月～2015年12月我院收治的HCC患者72例，男45例，女27例；年齡35～70歲，平均年齡為(51.45±10.20)歲。符合2011年我國發(fā)布的原發(fā)性肝癌臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]，即具有病毒感染或肝硬化基礎(chǔ)，肝臟占位直徑≥2 cm，CT或MRI檢查提示占位部位呈“快進快出”表現(xiàn)。納入患者病灶數(shù)≤3個，腫瘤直徑≤10 cm，均為初診患者，入院前未接受任何化療、放療或分子靶向治療，肝功能Child-Pugh分級為A級或B級。排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在行TACE禁忌證；②肝內(nèi)外轉(zhuǎn)移；③腫瘤體積>全肝的70%；④有嚴(yán)重的腎臟功能障礙性疾病。另選取同期在本院體檢的60例正常人作為對照組，男36例，女24例；年齡35～70歲，平均年齡為(52.04±9.75)歲。兩組受試者性別和年齡比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)?；颊咭押炇鹬橥鈺?，本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)進行。

1.2 TACE治療方法 采用Seldinger技術(shù)，經(jīng)皮穿刺股動脈，將導(dǎo)管插至腹動脈或肝動脈后，造影確定腫瘤位置、大小、數(shù)目和供血動脈等，再用微導(dǎo)管選擇性插入腫瘤供血動脈，注入適量和適當(dāng)?shù)乃ㄈ麆镜庥突熑閯罕戆⒚顾?上海一基實業(yè)有限公司)60 mg，奧沙利鉑(上海恒斐生物科技有限公司)50 mg，與其他表柔比星類、絲裂霉素類等聯(lián)合治療，用量不超過30 mL】。手術(shù)結(jié)束前再次造影觀察血管栓塞情況，手術(shù)結(jié)束后給予止嘔、護肝、護胃等針對性治療。

1.3 血清AFP檢測 采用ELISA法檢測(上?；鈱崢I(yè)有限公司)。

1.4 血清miR-145水平檢測 采用RNA提取試劑盒提取血清總RNA，采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄成cDNA，采用miScript SYBR Green PCR Kit檢測血清miR-145水平，反應(yīng)體系為20 μL，qRT-PCR反應(yīng)條件：95℃：60 s；60℃：30 s，70℃：30 s，共40個循環(huán)。miR-145及內(nèi)參U6的引物序列見表1。采用2-ΔΔCT法對miR-145水平進行定量分析。

表1 qRT-PCR引物序列

1.5 療效評價方法 于治療前1 d和治療后1個月行CT(上海寰熙醫(yī)療器械有限公司)或MRI(上海寰熙醫(yī)療器械有限公司)掃描檢查，采用根據(jù)李虎子等[9]改良的Recist標(biāo)準(zhǔn)評估TACE治療效果，包括完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、疾病進展(PD)和疾病穩(wěn)定(SD)。

1.6 隨訪 隨訪自出院之日起至2018年12月30日，對所有患者進行門診復(fù)查或者電話隨訪，隨訪時間為3年，調(diào)查并記錄患者的生存情況，3年內(nèi)發(fā)生死亡即為不良預(yù)后。

2 結(jié)果

2.1 療效情況 在治療1個月末，16例(22.2 %)為PR，13例(18.1%)為SD，43例(59.7 %)為PD。

2.2 HCC患者與正常人血清miR-145水平比較 治療前，HCC患者血清miR-145水平顯著低于對照組(P<0.05)；術(shù)后1個月，HCC患者血清miR-145水平較治療前顯著升高(P<0.05，表2)。

表2 兩組受試者血清miR-145水平比較

與對照組比，①P<0.05；與術(shù)前比，②P<0.05

2.3 不同臨床和病理學(xué)特征HCC患者血清miR-145水平比較 以HCC患者術(shù)前血清miR-145水平的平均值為界限，將其分為高水平組和低水平組，發(fā)現(xiàn)不同性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤分化、癌栓和Child-Pugh分級患者血清miR-145水平無顯著性差異(P>0.05)，而不同TNM分級和術(shù)前AFP水平患者之間差異顯著(P<0.05，表3)。

2.4 不同近期療效HCC患者血清miR-145水平比較 PD組血清miR-145水平為(0.86±0.21)，顯著高于PR或SD組【(0.62±0.19)或(0.75±0.19)，P<0.05】，后兩組血清miR-145水平也相差顯著(P<0.05)。

2.5 血清miR-145水平與HCC患者預(yù)后的關(guān)系 隨訪3年，共有28例患者死亡，其中高miR-14水平患者3 a生存率為75.6 %，顯著高于低水平患者的41.94%(x2=8.765，P<0.05)。

2.6 血清miR-145和AFP預(yù)測HCC患者不良預(yù)后的ROC曲線分析 血清miR-145水平預(yù)測HCC患者不良預(yù)后的曲線下面積為0.871，診斷截斷點為0.87；血清AFP水平預(yù)測HCC患者不良預(yù)后的曲線下面積為0.851，診斷截斷點為404.64 ng/mL，而miR-145聯(lián)合AFP預(yù)測HCC患者不良預(yù)后的曲線下面積為0.942，聯(lián)合預(yù)測的敏感度為91.7%，準(zhǔn)確度為90.2%(圖1)。

圖1 血清miR-145和AFP預(yù)測HCC不良預(yù)后的ROC曲線

3 討論

據(jù)中國癌癥統(tǒng)計數(shù)據(jù)結(jié)果顯示，2015年我國肝癌的總發(fā)病人數(shù)為46.61萬人，死亡人數(shù)約為42.21萬人[10,11]。目前，HCC已成為全球第五大惡性腫瘤，居全球癌癥死因的第三位[12]。由于HCC具有早期無特異表現(xiàn)、易復(fù)發(fā)、預(yù)后較差等特點，因此HCC至今仍然是威脅人類健康的重大醫(yī)療問題[13]。臨床顯示，提高HCC患者的早期診斷，對改善HCC患者預(yù)后，提高生存率具有十分重要的意義[14]。

miRNA是一類內(nèi)源性、非編碼單鏈小RNA，在腫瘤細胞的增殖、分化、凋亡中具有重要的作用，與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程密切相關(guān)[15]。miR-145是miRNA中的一種。研究表明，miR-145通常起抑癌基因的作用，通過抑制原癌基因或調(diào)控腫瘤細胞的增殖和凋亡過程，抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展[16]。研究表明，miR-145在HCC細胞水平下調(diào)[17]。本研究結(jié)果顯示HCC患者血清miR-145水平顯著低于對照組，提示miR-145在HCC中水平下調(diào)，可能充當(dāng)腫瘤抑制因子的作用。miR-145在HCC組織細胞水平下調(diào)，其水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移階段、血管侵犯和肝內(nèi)轉(zhuǎn)移有關(guān)[18]。本研究結(jié)果顯示HCC患者血清miR-145水平與性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤分化、癌栓、Child-Pugh分級無關(guān)，而與TNM分級和術(shù)前AFP水平有關(guān)，提示血清miR-145可能與HCC疾病進展有關(guān)。

TACE主要通過栓塞腫瘤的供血動脈，使腫瘤缺血、缺氧，最終達到促進腫瘤壞死的目的，是目前用于治療HCC患者的重要方法[19]。本研究結(jié)果顯示，術(shù)后1個月HCC患者血清miR-145水平顯著高于術(shù)前，PD組血清miR-145水平顯著高于PR或SD組，顯示miR-145水平隨治療效果的改善而升高。本研究結(jié)果顯示，隨訪3年，共有28例患者死亡，其中miR-14高水平患者3 a生存率為75.6 %，顯著高于低水平患者的41.94%，提示miR-145水平可能與TACE術(shù)后患者的不良預(yù)后有關(guān)。AFP是目前對于HCC診斷、治療和復(fù)發(fā)檢測時常用的一種血清學(xué)標(biāo)志物，對HCC具有重要的診斷價值。肝癌患者血清AFP水平升高，且血清AFP水平與肝癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)率有關(guān)，血清AFP異常升高可增加肝癌患者術(shù)后1年復(fù)發(fā)風(fēng)險[20]。本研究進一步采用ROC曲線分析miR-145和AFP在HCC不良預(yù)后預(yù)測方面的價值，結(jié)果顯示，血清miR-145、AFP水平和miR-145聯(lián)合AFP預(yù)測HCC患者不良預(yù)后的曲線下面積分別為0.871、0.851和0.942，兩者聯(lián)合預(yù)測HCC不良預(yù)后的敏感度為91.7 %，準(zhǔn)確度為90.2 %，提示miR-145聯(lián)合AFP檢測可提高HCC患者不良預(yù)后的預(yù)測價值，可能具有一定的參考意義。