劉億軍，段舒馨，游春芳，龔 科

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)感染屬世界流行性疾病，近年來其發(fā)病率呈逐年增長趨勢，大約20%～30%患者經(jīng)過10～20年后可能進(jìn)展為肝硬化，而每年大約1%～4%肝硬化患者會進(jìn)展為肝細(xì)胞癌(HCC)[1]。目前，HCV感染后具體發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，可能與病毒和機(jī)體免疫功能狀態(tài)等因素交互作用所致[2]。HCV感染者機(jī)體鐵負(fù)荷劇增，尤其是肝組織內(nèi)鐵含量顯著上升，且與患者肝組織炎癥呈正相關(guān)[3]。遺傳性血色素沉著癥基因(hereditary hemochromatosis gene)HFE屬調(diào)控鐵吸收、代謝的關(guān)鍵基因之一。有資料顯示，HFE基因單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism，SNPs)與體內(nèi)鐵過量儲存密切相關(guān)，其遺傳變異可能干擾機(jī)體對鐵的攝取，最終影響丙型肝炎病程進(jìn)展，但目前關(guān)于這個方面的研究報道仍較少[4]。基于此，本文納入257例慢性丙型肝炎(CHC)患者，檢測了HFE基因多態(tài)性，旨在為該病臨床診治提供可參考的依據(jù)，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2016年11月～2018年11月我院收治的CHC患者257例，男174例，女83例；年齡18～84歲，平均年齡(52.7±5.9)歲。診斷符合《丙型肝炎防治指南(2015年更新版)》[5]的標(biāo)準(zhǔn)，入組前未接受過抗病毒治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)伴肝炎肝硬化或乙型肝炎病毒感染；(2)伴嚴(yán)重的心、腦、腎、肺和造血系統(tǒng)等原發(fā)性疾?。?3)精神疾患；(4)妊娠期或哺乳期婦女。包括無癥狀病毒攜帶者131例，血清抗HCV陽性，HCV RNA陰性，ALT正常，和CHC126例?；颊吆炇鹬橥鈺?，本研究獲得我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 檢測方法 使用日立7600型全自動生化分析儀檢測血生化指標(biāo)(中生北控生物科技股份有限公司)；采用酶結(jié)合免疫吸附法測定血清鐵蛋白(serum ferritin，SF)水平(上海生工生物技術(shù)有限公司)；使用ABIPrismsTM-7900實時熒光定量PCR儀和TaqMan-MGB熒光探針(英國NEB公司)，以實時定量PCR法檢測HFE基因rs2071303和rs9366637位點基因型，引物購自英國NEB公司。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較 兩組HCV基因Ⅰb型頻率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；CHC患者血清SF、ALT、AST顯著高于病毒感染者(P<0.05，表1)。

與CHC比，①P<0.05

2.2 兩組HFE基因rs2071303和rs9366637位點不同基因型患者血清SF水平比較 CHC患者rs2071303位點GG、GA、AA基因型和rs9366637位點TT、TC、CC基因型血清SF水平顯著高于病毒感染者(P<0.05，表2)。

rs2071303GGGAAArs9366637TTTCCC病毒感染13197.6±4.297.6±4.196.7±3.797.4±4.097.2±4.099.1±4.5CHC 126199.5±45.4①207.5±34.7①198.0±44.8①206.4±35.6①208.5±34.0①178.5±58.6①

與病毒感染者比，①P<0.05

2.3 兩組HFE基因兩個多態(tài)性位點分布情況比較 HFE基因多態(tài)性位點rs2071303和rs9366637在病毒感染者中實際頻數(shù)與理論頻數(shù)分布符合HWE平衡，結(jié)果顯示，病毒感染者rs2071303位點AA基因型頻率顯著低于CHC患者(P<0.05，表3)。

表3 兩組HFE基因兩個多態(tài)性位點分布情況(%)比較

與CHC比，①P<0.05

2.4 兩組單倍型頻率分布比較 采用PHASE 2.0重構(gòu)HFE基因rs2071303和rs9366637 SNP位點四種單倍型及頻率，結(jié)果顯示，病毒感染者AC單倍型頻率顯著低于CHC患者(P<0.05，表4)。

表4 兩組單倍型頻率分布(%)比較

與CHC比，①P<0.05

3 討論

HCV主要經(jīng)血液/體液傳播，屬輸血后病毒性肝炎重要的病原體之一。通常，感染HCV人群易導(dǎo)致感染慢性化，部分患者可進(jìn)展為肝硬化，甚至誘發(fā)原發(fā)性肝癌及肝衰竭。目前，大量資料表明，丙型肝炎的發(fā)生是病毒基因與環(huán)境因素共同作用的結(jié)果[6-8]。CHC患者血清SF和鐵濃度顯著增高，與正常人、自身免疫性肝炎或慢性乙型肝炎患者相比，肝組織鐵濃度也明顯增加[9]。本研究結(jié)果顯示，病毒感染者血清SF水平明顯低于CHC患者，這與上述研究結(jié)論相似。究其根源，肝臟屬人體處理、儲存、調(diào)節(jié)鐵代謝的重要器官，在機(jī)體鐵代謝平衡中起著重要作用，而HCV感染者機(jī)體鐵負(fù)荷會明顯增加，尤其是肝細(xì)胞內(nèi)鐵含量上升顯著，多因HCV感染本身會干擾機(jī)體鐵代謝平衡。機(jī)體鐵負(fù)荷增加會導(dǎo)致肝臟病變進(jìn)一步加重。有資料顯示，HCV感染者機(jī)體鐵負(fù)荷增加，尤其是肝組織內(nèi)鐵含量上升顯著，與其肝臟炎癥、纖維化程度呈正相關(guān)，與肝硬化、肝癌的發(fā)生也具有相關(guān)性[10]。鐵以鐵離子或非轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合形式在丙型肝炎發(fā)病過程中發(fā)揮著重要作用，鐵離子經(jīng)催化反應(yīng)將活性氧中間產(chǎn)物如超氧陰離子、過氧化氫等轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂休^大毒性的羥基自由基，攻擊碳水化合物、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)等生物大分子，引起肝細(xì)胞壞死、凋亡，而肝臟炎性狀態(tài)會進(jìn)一步加劇氧化應(yīng)激，影響丙型肝炎患者的臨床轉(zhuǎn)歸。HFE基因?qū)僬{(diào)控鐵吸收、代謝的關(guān)鍵基因，近幾年有研究表明，HFE基因多態(tài)性與丙型肝炎發(fā)病密切相關(guān)[11]。

本研究結(jié)果顯示， rs2071303位點GG、GA、AA基因型病毒感染者血清SF水平明顯低于CHC患者，rs9366637位點TT、TC、CC基因型血清SF水平明顯低于CHC患者，且病毒感染者rs2071303位點AA基因型頻率和AC單倍型頻率明顯低于CHC患者，提示攜帶HFE基因rs2071303位點突變基因型AA或AC單倍型會增加丙型肝炎病程進(jìn)展的風(fēng)險，與上述研究相似。HFE屬Ⅰ類組織相容性復(fù)合體相關(guān)蛋白，在肝組織中表達(dá)豐富，主要經(jīng)結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白受體，形成穩(wěn)定的復(fù)合物，引起轉(zhuǎn)鐵蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的親和力下降，從而調(diào)節(jié)機(jī)體鐵吸收。HFE基因處于第6號染色體短臂上，距HLA-A基因端粒端約4000 kb，其產(chǎn)物與HLA-Ⅰ類分子相似。近年來，大量報道證實HFE基因變異會引起體內(nèi)鐵過量儲存，在嚴(yán)重情況下會誘發(fā)原發(fā)性血色素沉著癥，與機(jī)體鐵沉積介導(dǎo)的損傷作用有關(guān)[12-14]?；谘獫{鐵水平較低的情況，HFE與轉(zhuǎn)鐵蛋白競爭性結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白受體1，最終誘導(dǎo)細(xì)胞鐵水平攝取下降；反之，轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度上升會降低HFE競爭性結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白受體1的能力，穩(wěn)定轉(zhuǎn)鐵蛋白受體2；轉(zhuǎn)鐵蛋白受體1結(jié)合血漿轉(zhuǎn)鐵蛋白，促進(jìn)鐵的攝取，同時轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白受體1釋放HFE，導(dǎo)致肝鐵調(diào)素轉(zhuǎn)錄增加[15]。分子生物學(xué)研究顯示，HFE基因遺傳變異會改變體內(nèi)鐵代謝通路，導(dǎo)致心臟、胰腺尤其是肝臟中鐵過多沉積，誘發(fā)內(nèi)分泌功能紊亂、心功能異常及肝臟疾病[16]。HFE基因突變會增加鐵過載發(fā)生的風(fēng)險[17]。我們推測，攜帶HFE基因rs2071303位點突變基因型AA和AC單倍型會增加鐵吸收，引起鐵過負(fù)荷，最終加重丙型肝炎的病情。

目前，國外關(guān)于HFE基因突變與HCV感染相關(guān)疾病的研究多集中于第282位上的半胱氨酸突變成酪氨酸(C282Y)及第63位上的組氨酸突變成天冬氨酸(H63D)兩個位點。研究發(fā)現(xiàn)，H63D位點突變會加重丙型肝炎病情[18]，而H63D位點突變對丙型肝炎進(jìn)展無顯著影響，可能與H63D對鐵吸收的調(diào)控作用有關(guān)[19]。考慮到漢族人群H63D和C282Y兩個位點頻率較低，故本研究未納入這兩個位點。此外，本研究還存在一些不足之處，如研究對象均來自醫(yī)院，可能存在選擇偏倚；運用SNPs位點篩選原則，無法排除丙型肝炎病程進(jìn)展與HFE基因其它SNPs的關(guān)聯(lián)；環(huán)境因素與丙型肝炎病程進(jìn)展密切相關(guān)，而環(huán)境因素是否會影響易感性基因位點生物學(xué)效應(yīng)的發(fā)揮尚不明確[20]；未涉及HFE多態(tài)性位點功能學(xué)研究，無法詳細(xì)闡述HFE基因多態(tài)性位點與丙型肝炎病程進(jìn)展的關(guān)系。因此，今后仍需深入研究這些問題。

綜上所述，血清鐵蛋白水平和HFE基因多態(tài)性與丙型肝炎病情活動具有明顯的相關(guān)性，臨床上應(yīng)引起足夠的重視。