張戰(zhàn)軍

（河南省洛陽市婦女兒童醫(yī)療保健中心檢驗科，河南 洛陽471023）

喘息癥狀在學(xué)齡前兒童中較為常見,但多數(shù)患兒喘息癥狀持續(xù)時間較短，未發(fā)展成為哮喘，但仍有25%以上患兒的喘息癥狀會在緩解后復(fù)發(fā)或持續(xù)至成人期[1]。呼吸道感染是嬰幼兒時期喘息的重要危險因素之一,會對兒童的生長發(fā)育及健康造成嚴(yán)重的影響,是發(fā)展中國家兒童死亡的最常見因素，其以急性呼吸道感染最為常見，在兒科門診中約占60%以上[2]。與非過敏性體質(zhì)嬰幼兒相比，嬰幼兒期反復(fù)哮喘和特應(yīng)性體質(zhì)患兒發(fā)生哮喘的幾率更大。大量研究顯示，調(diào)節(jié)性T細胞（Treg）能維持外周免疫耐受,其包括外周誘導(dǎo)的實用性T細胞（iTreg）和胸腺產(chǎn)生的自然調(diào)節(jié)性T細胞（nTreg），兩者與炎癥的控制和過敏有關(guān)[3]。慢性過敏性哮喘的發(fā)生與不恰當(dāng)?shù)拿庖呦到y(tǒng)活化有關(guān),也可能與內(nèi)源性的免疫調(diào)節(jié)機制異常有關(guān)[4]。過敏性哮喘患兒伴有Treg功能或數(shù)量不足。IL-10能抑制T細胞的分泌與增殖，為重要的抑制性細胞因子，對自身抗原、過敏原、腫瘤抗原和移植物抗原的免疫耐受的建立均發(fā)揮重要的作用[5]。本研究通過分析嬰幼兒LRTI和健康兒外周血中的IL-10和CD4+CD25+FoxP3+Treg水平,探討嬰幼兒LRTI外周血炎癥細胞因子水平表達及臨床意義,旨在為臨床治療提供指導(dǎo)意見。報告如下。

1 資料與方法

1.1 入選標(biāo)準(zhǔn)

1.1.1 納入標(biāo)準(zhǔn) 入組前3周未接受口服或靜脈、吸入糖皮質(zhì)激素以及其他免疫抑制劑,入院后未接受心電監(jiān)護以及吸氧等相關(guān)治療；無長期服藥史；30d內(nèi)無急性感染史;無過敏性疾病和哮喘性疾病;受檢者家屬均對本研究知情，并簽署知情同意書。

1.1.2 排除標(biāo)準(zhǔn) 支氣管異物、肺結(jié)核、慢性呼吸道感染、反復(fù)呼吸道感染、中重度營養(yǎng)不良、先天性心臟病、心腎功能不全、先天性胃腸道畸形、免疫缺陷、手足口病者；父母存在吸煙史。

1.2 一般資料 選擇2015年2月至2017年8月期間在我院接受治療的80例LRTI患兒為觀察組。符合《諸福棠實用兒科學(xué)》[6]中關(guān)于LRTI的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)。其中男58例，女22例；年齡8～14個月，平均年齡（11.02±0.27）個月；按有無特應(yīng)性皮炎史分為無特應(yīng)性皮炎史組（n=38）、有特應(yīng)性皮炎史組（n=42）；按是否存在喘息分為喘息組（n=48）、非喘息患兒組（n=32）。另選擇同期在我院行健康體檢的80例嬰幼兒為對照組，其中男56例，女 24 例；年齡 8～14 個月,平均年齡（11.04±0.30）個月。本研究經(jīng)我院倫理委員會審核批準(zhǔn)。對照組和觀察組的性別、年齡經(jīng)統(tǒng)計學(xué)比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.122、t=0.853，P=0.727、0.396），具有可對比性。

1.3 方法 采集兩組受檢者兩份3ml外周靜脈血，將其置入EDTA抗凝管中,其中一份在室溫下2h內(nèi)以血細胞分析儀流式細胞技術(shù)半導(dǎo)體激光法測定嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞比例，儀器：全自動XE-2000i(日本SYSMEX公司)。另一份取出1 ml,1500r/min離心3min，取上清液，以酶聯(lián)免疫吸附試驗測定IL-10,儀器:美國Becton Dic-kinson（BD）公司的全自動血生儀（BACTEC9050）。 剩下2ml外周靜脈血用于檢測調(diào)節(jié)性T細胞，即CD4+CD25+FoxP3+Treg,儀器：BD-CALIBUR流式細胞分析儀（美國BD公司）。

1.4 評價指標(biāo) 比較各組受檢者嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞比例、IL-10以及CD4+CD25+FoxP3+Treg水平。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，計數(shù)資料以百分數(shù)和例數(shù)表示，組間比較采用 χ2檢驗；計量資料采用“x±s”表示，組間比較采用t檢驗；P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對照組與觀察組比較 與對照組相比，觀察組嗜堿性粒細胞、IL-10、CD4+CD25+FoxP3+Treg 水平較高，嗜酸性粒細胞比例較低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。 見表 1。

表1 對照組和觀察組各項檢查結(jié)果比較（x±s）

2.2 有、無特應(yīng)性皮炎史組比較 無特應(yīng)性皮炎史組嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞、IL-10水平與有特應(yīng)性皮炎史組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）;無特應(yīng)性皮炎史組CD4+CD25+FoxP3+Treg水平與有特應(yīng)性皮炎史組相比較高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。 見表 2。

表2 有、無特應(yīng)性皮炎史患兒各項檢查結(jié)果比較（x±s）

2.3 喘息與非喘息組比較 喘息組嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞、CD4+CD25+FoxP3+Treg水平與非喘息組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；喘息組IL-10水平與非喘息組相比較低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。 見表 3。

表3 喘息和非喘息患兒各項檢查結(jié)果比較（x±s）

3 討論

下呼吸道感染主要以病毒感染為主,氣道上皮細胞會受病毒的毒性作用而受損,使黏膜下的膽堿神經(jīng)纖維在化學(xué)或物理的刺激物下暴露和過敏源會導(dǎo)致抗原的通透性增加,使氣道上皮細胞分泌NO減少；病毒會損傷氣道上皮細胞，產(chǎn)生P物質(zhì)，誘導(dǎo)氣管收縮；P物質(zhì)還能增加血管通透性,趨化嗜酸性粒細胞和中性粒細胞等白細胞在炎癥部位定植[7-10]。本研究中，與對照組相比，觀察組嗜酸性粒細胞比例較低,分析原因可能是因外周血嗜酸性粒細胞參與宿主抗病毒防御有關(guān)。嗜酸性粒細胞能趨化靶器官，清除病原微生物，是機體對疾病防御的重要組成部分[11,12]。在循環(huán)外周血中嗜堿性粒細胞所占比例較小，能通過“脫顆粒”向外周釋放慢反應(yīng)物質(zhì)、組織胺、嗜酸性粒細胞趨化因子等活性因子，對嗜酸性粒細胞可起到促進作用，使其在局部聚集，在IgE介導(dǎo)的慢性過敏性疾病中起到起始作用[13,14]。本研究中，與對照組相比，觀察組嗜堿性粒細胞比例較高，可能是因LRTI患兒在感染炎癥反應(yīng)時，會使嗜堿性粒細胞增加，促使其進入靶部位，清除病原體功能。

Treg因起源不同分為iTreg和nTreg，前者在維持黏膜免疫耐受中發(fā)揮重要的作用,后者能提高所有免疫反應(yīng)的閥值和避免發(fā)生自身免疫性疾病[15]。 CD4+CD25+FoxP3+Treg包括 CD4+CD25+FoxP3+iTreg和CD4+CD25+FoxP3+nTreg,作用方式為以下幾點：⑴對抗原提呈細胞發(fā)揮抑制作用，間接發(fā)揮免疫抑制作用；⑵能經(jīng)分泌抑制性細胞因子發(fā)揮功能,包括 IL-25、β-轉(zhuǎn)化生長因子、IL-10 等;⑶可經(jīng)競爭生長因子(IL-7、IL-4、IL-2等)以及通過細胞-細胞間接觸分泌穿孔素/顆粒酶，誘導(dǎo)靶細胞凋亡而發(fā)揮作用[16,17]。本研究中,觀察組CD4+CD25+Fox P3+Treg水平均高于對照組。當(dāng)嬰幼兒感染后，微生物（病毒和細菌等）會侵入系呼吸道，樹突狀細胞會穿過氣道黏膜表皮細胞間的緊密連接攝取相應(yīng)抗原，隨后遷移，在此過程中會減弱攝取抗原的能力，并逐漸增強抗原提呈能力，增加其表面的MHCⅡ類分子、粘附分子、共刺激分子的表達，攝取抗原的樹突狀細胞到引流淋巴結(jié)后,會誘導(dǎo)CD4+CD2 5+FoxP3+iTreg和相應(yīng)效應(yīng)T細胞的產(chǎn)生[18]。IL-10為抑制性細胞因子，其產(chǎn)生與炎癥消失有關(guān),其具有以下幾點功能：⑴對肥大細胞的“脫顆?！逼鸬揭种谱饔?；⑵阻礙ICOS、CD28、CD2的信號通路；⑶對樹突狀細胞成熟起到抑制作用；⑷降低單核細胞表面的共刺激分子和MHCⅡ類分子以及樹突狀細胞的表達；⑸誘導(dǎo)IgA和IgG4的產(chǎn)生，抑制IgE產(chǎn)生等。本研究中，觀察組IL-10水平高于對照組,這可能與下呼吸道受病毒感染后會使機體對入侵微生物清除是的免疫炎癥反應(yīng)減輕，損傷機體有關(guān)。

本研究中,無特應(yīng)性皮炎史組和有特應(yīng)性皮炎史組嗜堿性粒細胞、IL-10、嗜酸性粒細胞水平無顯著差異;無特應(yīng)性皮炎史組CD4+CD25+FoxP3+Treg水平與有特應(yīng)性皮炎史組相比較高。過敏性疾?。ㄌ貞?yīng)性皮炎等）體質(zhì)與CD4+CD25+FoxP3+Treg生成缺陷可能存在相關(guān)性。喘息組嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞、CD4+CD25+FoxP3+Treg水平與非喘息組比較無明顯差異，而喘息組IL-10水平與非喘息組相比較低。分析原因可能與以下兩點有關(guān)：⑴下呼吸道感染時，會使體內(nèi)IL-10水平增加，使小氣道中抗病毒免疫能力降低。IL-10能抑制氣道中巨噬細胞抗原提呈功能,對上呼吸道感染病毒入侵下呼吸道可起到促進作用,易引起氣道高反應(yīng)性和喘息[19]。⑵IL-10能經(jīng)拮抗IL-12提高Th2細胞、抑制Th1細胞，引起過敏性氣道疾病[20]。

綜上所述，嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞、IL-10以及CD4+CD25+FoxP3+Treg均參與了嬰幼兒LRTI的發(fā)病機制;患兒外周血中CD4+CD25+FoxP3+Treg水平較高是機體免疫防御的重要表現(xiàn),而IL-10水平升高則表示患兒可能伴有喘息,可將兩者作為嬰幼兒LRTI治療的靶點。