林文弢，藺海旗，楊 玲，徐國琴，翁錫全

尿液是血液經(jīng)腎小球?yàn)V過、腎小管和集合管重吸收、排泄及分泌產(chǎn)生的終末代謝產(chǎn)物，較血液等其他體液具有采樣簡(jiǎn)便、無創(chuàng)傷、可重復(fù)取材的特點(diǎn)。自1878年VON.LEUBE[1]在士兵行軍時(shí)發(fā)現(xiàn)尿蛋白以來，國內(nèi)外在運(yùn)動(dòng)性蛋白尿方面進(jìn)行了諸多研究[2-3]。在運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練中，尿蛋白不僅有量的改變且存在組份的差異[4-5]。受傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)分離與鑒定技術(shù)所限，現(xiàn)研究多局限于尿總蛋白、Alb、β2-MG 等幾個(gè)已知蛋白，難以對(duì)尿蛋白組進(jìn)行高通量、快速的并行研究及全面、系統(tǒng)地闡釋運(yùn)動(dòng)對(duì)機(jī)體影響的分子機(jī)制和內(nèi)在規(guī)律。雙向凝膠電泳（2-DE）和質(zhì)譜（MS）技術(shù)的聯(lián)合使用與飛速發(fā)展給蛋白質(zhì)組學(xué)研究提供了很好的技術(shù)平臺(tái)。T.MARSHALL等[6]指出尿蛋白組學(xué)是采用蛋白組學(xué)技術(shù)與方法，系統(tǒng)的分析與鑒定尿液中蛋白質(zhì)分子，進(jìn)一步探究其生物學(xué)功能。目前尿蛋白組研究在正常人和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域已取得一定成果，研究[7]顯示，正常人尿液中已鑒定出3280種蛋白質(zhì)，豐富了人類尿蛋白組數(shù)據(jù)庫。在體育科學(xué)領(lǐng)域，有關(guān)尿液蛋白質(zhì)組學(xué)的研究報(bào)道甚少，M.KOHLER 等[8]利用雙向凝膠電泳+質(zhì)譜（2-DE+MS）技術(shù)，研究不同項(xiàng)目（團(tuán)體、耐力、力量）運(yùn)動(dòng)員運(yùn)動(dòng)后尿液蛋白質(zhì)組份，發(fā)現(xiàn)不同運(yùn)動(dòng)項(xiàng)目之間的尿蛋白組份和2-DE 圖譜表達(dá)存在差異。最近，研究團(tuán)隊(duì)[9-10]綜述了蛋白組學(xué)研究在體育科研領(lǐng)域的應(yīng)用進(jìn)展和未來前景。

鑒于此，本研究從蛋白質(zhì)組學(xué)整體的角度，探討30 km 跑對(duì)尿液蛋白質(zhì)組圖譜差異性表達(dá)的影響，篩選對(duì)評(píng)價(jià)運(yùn)動(dòng)負(fù)荷和身體機(jī)能具有意義的目標(biāo)尿蛋白，分析其功能及特點(diǎn)，為運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練監(jiān)控尋找一種無創(chuàng)、系統(tǒng)化的評(píng)價(jià)方法提供試驗(yàn)借鑒和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)器材

微量移液器購自法國Gilson 公司、高速冷凍離心機(jī)（Beckman）、等電聚焦儀（GE ETTAN IPGPHOR3）、垂直電泳槽（GE ETTAN DALTsix）、ImageMaster 2D platinum 5.0（GE）、MALDITOF-TOF 質(zhì)譜儀（Bruker Dalton）。蛋白酶抑制劑PMSF、丙烯酰胺（Acylamide）、二硫蘇糖醇（DTT）購自Amresco 公司；IPG Buffer pH 4～7（GE）、胎牛血清標(biāo)準(zhǔn)品BSA、NH4HCO3購自Sigma公司；N，N，N’，N’-四甲基乙二胺、碘乙酰胺IAA購自Amersham公司；考馬斯亮藍(lán)G250購自Bio Basic公司；乙腈和十二烷基磺酸鈉分別購自Fisher和Promega。

1.2 尿液采集

以參加30 km挑戰(zhàn)賽10名男子為研究對(duì)象，身體健康且無泌尿系統(tǒng)疾病，具有一定長跑經(jīng)驗(yàn)，基本情況見表1。研究對(duì)象以賽事規(guī)定線路繞星湖綠道跑2圈，15 km/圈。氣溫19 ℃，濕度約50%，微風(fēng)。

表1 受試者基本情況（n=10）Table1 the Basic Information of the Subjects（n=10）

尿樣采集：（1）晨尿的采集：睡前排空尿液，晨起前不再排尿。無菌瓶收集晨尿，并記錄尿液容積以及睡前和晨起的采尿時(shí)間。隨后根據(jù)各自尿液容積將30～50 mL 尿液分裝于50 mL無菌Corning管，為避免蛋白酶解，每100 mL尿液加入1 mL PMSF（1 mmol/L），-80 ℃保存；（2）運(yùn)動(dòng)后尿樣的采集：賽前排空，運(yùn)動(dòng)后15 min收集尿液，其他操作同（1）。

1.3 蛋白提取

樣本復(fù)融后于4 ℃，6000 r/min，離心20 min，吸出上清，用孔徑0.45 和0.22 μm 的濾膜分別過濾一次，丙酮沉淀過夜。然后沉淀蛋白4 ℃，離心20 min，12000 r/min，傾去上清并干燥后得蛋白團(tuán)塊，于-80 ℃保存。用600 μL Tris飽和酚將沉淀團(tuán)塊充分裂解后，加入600 μL提取液。然后4 ℃，12000 r/min，離心20 min，吸出上層酚相，移到EP 管內(nèi)，重復(fù)操作一次。然后于-20 ℃以酚5倍體積的沉淀液沉淀蛋白過夜。沉淀蛋白4 ℃，12000 r/min，離心20 min，去上清；加1 mL 甲醇后吹打洗滌蛋白，12000 r/min，離心20 min，去上清；重復(fù)一次操作。晾干后-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 雙向凝膠電泳

（1）固相等點(diǎn)聚焦：干燥后的蛋白質(zhì)經(jīng)再水化液（RB）溶解和Bradford 法定量后，加入上樣液（1% DTT、1% IPG Buffer、1×BPB、RB 至460 μL），上樣量120 μg。膠條經(jīng)泡脹過夜（10～12 h）后放入等電聚焦盤中。等電聚焦程序?yàn)椋?00 V 0.5 h、700 V 0.5 h、1500 V 1.5 h、9000 V 3 h、9000 V 5 h，總電壓為64 kVh。

（2）SDS-PAGE垂直電泳：將平衡后的膠條移至12.5%的凝膠上端，用0.8%低熔點(diǎn)瓊脂糖和1.5%的普通瓊脂糖封閉。雙向電泳：2 W/gel 45 min、17 W/gel 至溴酚藍(lán)到底，大約4.5 h。

1.5 凝膠染色與圖像分析

采用考馬斯亮藍(lán)G-250 染色法按照固定、漂洗、考染、漂洗的步驟進(jìn)行凝膠染色。采用UMAX Powerlook1100 凝聚圖像掃描儀對(duì)膠圖掃描，采用Image Master 2D platinum 5.0 對(duì)圖譜進(jìn)行背景消減、斑點(diǎn)檢測(cè)和蛋白匹配等分析，比較圖譜差異蛋白點(diǎn)。

1.6 質(zhì)譜分析

選取部分差異蛋白點(diǎn)進(jìn)行胰蛋白酶膠內(nèi)酶切。利用MALDI-TOF-TOF（Autoflex speed?）質(zhì)譜分析。通過NCBI數(shù)據(jù)庫，查詢匹配蛋白，條件如下：物種來源：human；肽質(zhì)量：800～4000 Da；一級(jí)質(zhì)譜質(zhì)量誤差范圍：50 ppm；二級(jí)質(zhì)譜質(zhì)量誤差范圍：0.5 Da；表觀pI 與表觀Mr 的誤差范圍：無限制；酶解片段不完全：1 個(gè)；電荷：+1；固定修飾：Carbamidomethy；同位素峰：monoisotopic；可變修飾：Oxsidation；鑒定分值（Score）＞66（P＜0.05）。

2 結(jié) 果

2.1 雙向凝膠電泳（2-DE）圖譜特征

30 km 跑前、后尿液2-DE 電泳表達(dá)圖譜見圖1。如圖所示，從左至右pH 值為4～7 逐漸增加，從下往上分子量遞增，在10～130 kD 之間。從圖中呈現(xiàn)的蛋白質(zhì)分子量分布范圍看，蛋白質(zhì)分子量主要集中在20～80 kD 之間，大于80 kD 和小于20 kD 的蛋白質(zhì)分子很少，各點(diǎn)染色深淺和面積有一定差異，表明蛋白質(zhì)含量不同；從蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)來看，蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)多集中在4.5～6 之間，同時(shí)可見，左側(cè)斑點(diǎn)較多，右側(cè)斑點(diǎn)偏少，極堿性蛋白很少，說明尿液中酸性蛋白質(zhì)（圖譜左側(cè)）多于堿性蛋白質(zhì)（圖譜右側(cè)）。對(duì)運(yùn)動(dòng)前、后2-DE 圖譜經(jīng)軟件分析和人工確認(rèn)比較，顯示運(yùn)動(dòng)前、后尿液蛋白質(zhì)存在差異，主要表現(xiàn)在2-DE 圖譜斑點(diǎn)的增減、面積大小及染色的深淺上。

圖130 km運(yùn)動(dòng)前（左）與運(yùn)動(dòng)后（右）尿液蛋白質(zhì)2-DE圖譜Figure1 Representative 2-DE gel Images After Staining with Silver Nitrate for the Urine Sample from Athletes Before（Left）and After（Right）30 km Long-distance Running

2.2 雙向凝膠電泳（2-DE）圖譜差異性表達(dá)分析結(jié)果

對(duì)運(yùn)動(dòng)前、后尿液蛋白質(zhì)2-DE 表達(dá)圖譜進(jìn)行分析，運(yùn)動(dòng)前、后平均檢測(cè)到蛋白質(zhì)點(diǎn)（1011±243）和（1737±15）個(gè)。運(yùn)動(dòng)前、后各重復(fù)電泳3 次，同時(shí)分別取一張膠為參考膠，其余膠與其匹配，匹配率分別為66.44%和73.02%，表明試驗(yàn)獲得了良好的重復(fù)性。

2-DE 圖譜經(jīng)軟件進(jìn)一步分析，30 km 運(yùn)動(dòng)后與運(yùn)動(dòng)前相比，共有110 個(gè)差異性表達(dá)蛋白點(diǎn)，其中運(yùn)動(dòng)后表達(dá)量下調(diào)的點(diǎn)（含消失點(diǎn)）和表達(dá)量上調(diào)的點(diǎn)（含新增點(diǎn)）均為55 個(gè)，分別見圖2、3。

圖230 km運(yùn)動(dòng)后表達(dá)下調(diào)點(diǎn)圖譜Figure2 Expression Downregulation Point 2-DE Maps of Urine Proteins from Athletes

圖330 km運(yùn)動(dòng)后表達(dá)上調(diào)點(diǎn)圖譜Figure3 Expression Upregulation Point 2-DE Maps of Urine Proteins from Athletes

在運(yùn)動(dòng)后差異表達(dá)量下調(diào)/上調(diào)的55 個(gè)點(diǎn)中，其具體數(shù)目及倍數(shù)分布情況見表2、3。

表230 km運(yùn)動(dòng)后差異表達(dá)量下調(diào)/上調(diào)蛋白點(diǎn)數(shù)目及倍數(shù)分布Table2 the Number and Change Folds of Differentially Expressed Proteins After Exercise

表330 km運(yùn)動(dòng)后差異表達(dá)≥5倍的蛋白點(diǎn)Table3 Information Related to the Proteins with Fold Change of ≥5

表430 km運(yùn)動(dòng)后差異表達(dá)蛋白點(diǎn)質(zhì)譜鑒定結(jié)果一覽表Table4 Protein Expression Levels in the Urine Samples from Athletes After Running Identified by MALDI-TOF-TOF

2.3 質(zhì)譜鑒定結(jié)果

選擇運(yùn)動(dòng)后差異表達(dá)量上調(diào)≥5 倍和新增的蛋白點(diǎn)10 個(gè)，利用MALDI-TOF-TOF-MS質(zhì)譜儀對(duì)這些差異性蛋白質(zhì)斑點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，通過NCBI 數(shù)據(jù)庫檢索，鑒定出6 個(gè)蛋白（見表4）。其中，B37、B18、B25、B26、B43 同為白蛋白；運(yùn)動(dòng)前后6 個(gè)蛋白質(zhì)的蛋白點(diǎn)視圖（Spots view）見圖4。

圖430 km運(yùn)動(dòng)前后6個(gè)差異表達(dá)蛋白點(diǎn)視圖Figure4 Differential 2-DE Analysis of Urine as Sampled Before and After the Race

3 討 論

機(jī)體運(yùn)動(dòng)可引起內(nèi)環(huán)境、代謝產(chǎn)物以及營養(yǎng)狀態(tài)等發(fā)生改變，進(jìn)一步會(huì)影響有關(guān)基因的表達(dá)與蛋白的合成[11]，使運(yùn)動(dòng)前、后蛋白組圖譜差異表達(dá)。本研究在對(duì)差異表達(dá)蛋白質(zhì)斑點(diǎn)鑒定的基礎(chǔ)上，分析其功能發(fā)現(xiàn)這些蛋白與機(jī)體能量代謝方式的轉(zhuǎn)變、物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)、應(yīng)激保護(hù)等有關(guān)。

3.130 km跑對(duì)尿液能量代謝相關(guān)蛋白的影響

鋅α2-糖蛋白（zinc α2-glycoprotein，ZAG）是血清中一種可溶性糖蛋白[12]。最近研究表明，其是一種新型脂質(zhì)動(dòng)員因子，能促進(jìn)脂肪分解，降低體重[13-14]；同時(shí)，也是診斷前列腺癌等疾患的一種生物標(biāo)志物[15]。

目前，關(guān)于ZAG 和運(yùn)動(dòng)之間的研究還比較少。研究發(fā)現(xiàn)[16-17]，運(yùn)動(dòng)可使脂肪組織ZAGmRNA的表達(dá)水平上調(diào)，進(jìn)而減脂，降低體重，提示ZAG可能是一調(diào)節(jié)脂代謝的候選基因。本研究中，ZAG運(yùn)動(dòng)后較運(yùn)動(dòng)前表達(dá)量增加5.2倍，其含量的增加很可能與機(jī)體為了滿足30 km長時(shí)間耐力運(yùn)動(dòng)時(shí)能量的需求，而引起ZAG 蛋白合成率增加，加強(qiáng)脂肪動(dòng)員和促進(jìn)脂肪分解有關(guān)。研究表明，鋅α2-糖蛋白可引起脂動(dòng)員，促進(jìn)BAT與肌肉組織表達(dá)解偶聯(lián)蛋白，增加機(jī)體能量消耗和脂質(zhì)利用[18]，這更進(jìn)一步支持該觀點(diǎn)。同時(shí)，M.KOHLER等[19]應(yīng)用2-DE+MS技術(shù)在馬拉松運(yùn)動(dòng)后尿液中也檢測(cè)出ZAG，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。目前，ZAG與運(yùn)動(dòng)尤其是脂肪細(xì)胞的功能相關(guān)研究文獻(xiàn)很少，有待深入研究。

3.230 km跑對(duì)尿液應(yīng)激保護(hù)相關(guān)蛋白的影響

維生素D 結(jié)合蛋白（vitamin D-binding protein，VDB）是一種多功能α-球蛋白，其包括白蛋白（ALB）、前白蛋白（PA）、甲胎蛋白（AFP）等，不僅具有攜帶維生素D 及血漿中的維生素D 的代謝物的功能[20]，同時(shí)還有促進(jìn)清除肌動(dòng)蛋白、增加補(bǔ)體C5 對(duì)中性粒細(xì)胞的趨化活性、調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞活性、運(yùn)輸脂肪酸和內(nèi)毒素的功能[21-23]。

目前有關(guān)VDB 與運(yùn)動(dòng)的研究甚少，本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，受試者在30 km 運(yùn)動(dòng)前，尿液中尚未發(fā)現(xiàn)VDB，而在運(yùn)動(dòng)后作為新增點(diǎn)出現(xiàn)，這可能與長時(shí)間耐力運(yùn)動(dòng)時(shí)，代謝產(chǎn)物大量堆積以及肌組織有一定程度的損傷和局部炎癥而致使肝臟細(xì)胞在這種運(yùn)動(dòng)應(yīng)激條件下分泌VDB 增多，加強(qiáng)機(jī)體對(duì)代謝物的清除等功能，起到保護(hù)機(jī)體的作用有關(guān)，提示耐力運(yùn)動(dòng)可能致使機(jī)體肌組織伴有一定程度的損傷及炎癥。目前，VDB 與運(yùn)動(dòng)的作用關(guān)系及機(jī)制知之甚少，有待于從定量的角度進(jìn)一步更深入的研究與解析。

3.330 km跑對(duì)尿液細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白的影響

肌動(dòng)蛋白（Actin）是真核細(xì)胞中含量最豐富的蛋白質(zhì)之一，它是細(xì)胞的一種重要的骨架蛋白。Actin分為3種類型，即α、β、γ-Actin[24]。β-Actin分布廣泛，其是肌纖維及細(xì)胞骨架中具有收縮功能的一種主要蛋白成分。Actin 是構(gòu)成骨骼肌肌原纖維細(xì)絲的主要蛋白，參與肌肉的收縮，協(xié)助完成機(jī)體機(jī)械活動(dòng)。

本研究顯示，30 km 長跑運(yùn)動(dòng)后，較運(yùn)動(dòng)前相比，運(yùn)動(dòng)后尿液中出現(xiàn)新增蛋白點(diǎn)β-Actin。β-Actin的表達(dá)量上調(diào)，分析原因可能是隨著運(yùn)動(dòng)時(shí)間的延長而引起骨骼肌細(xì)胞內(nèi)相關(guān)收縮蛋白的降解，這致使機(jī)體加強(qiáng)對(duì)收縮蛋白的合成來維持一定的運(yùn)動(dòng)能力及正常功能，進(jìn)一步導(dǎo)致β-Actin 的表達(dá)量在血液中上調(diào)，而最終從尿液排出增多。同時(shí)，從肌損傷的角度來闡釋，這與上述VDB表達(dá)量變化的原因十分相似，二者共同反映的結(jié)果顯示，受試者在30 km 運(yùn)動(dòng)后骨骼肌在很大程度上可能存在一定的細(xì)胞膜通透性增加或損傷，也許二者共同聯(lián)合探析運(yùn)動(dòng)對(duì)機(jī)體骨骼肌效應(yīng)的化學(xué)本質(zhì)具有重要意義?，F(xiàn)有文獻(xiàn)針對(duì)β-Actin與運(yùn)動(dòng)的報(bào)道目前國內(nèi)尚未發(fā)現(xiàn)，有待于深入研究。

3.430 km跑對(duì)尿液轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白相關(guān)蛋白的影響

白蛋白（albumin，Alb）是血漿中最豐富的蛋白，健康成年人24 h尿蛋白總量約為10～100 mg，定性結(jié)果為陰性。研究顯示，尿Alb 含量可用于判斷腎小球?yàn)V過膜通透性的改變。同時(shí)，尿Alb可作為診斷腎小球相關(guān)疾病[25]。

本研究發(fā)現(xiàn)，30 km長跑運(yùn)動(dòng)后，尿液中Alb 較運(yùn)動(dòng)前作為新增點(diǎn)出現(xiàn)，這和前期定量測(cè)試尿Alb結(jié)果趨勢(shì)一致[26]，表明運(yùn)動(dòng)Alb 顯著性增多，這可能與腎小球和（或）白蛋白膜的電荷改變有關(guān)。M.KOHLER 等[8，19]發(fā)現(xiàn)馬拉松運(yùn)動(dòng)組較對(duì)照組比較，尿液蛋白質(zhì)圖譜中檢測(cè)出Alb 以及其碎片，認(rèn)為是由于運(yùn)動(dòng)刺激機(jī)體所引起，但同時(shí)也不排除相應(yīng)機(jī)體患有腎小球腎炎疾病。在我們的研究中同樣也發(fā)現(xiàn)類似的結(jié)果，并且Alb的殘基、碎片較多。出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因，除M.KOHLER 的推測(cè)外，很大程度上應(yīng)該還與蛋白翻譯、修飾以及蛋白降解等多種情況致使同一個(gè)蛋白的不同修飾類型或者不同碎片出現(xiàn)在凝膠的不同位置，表現(xiàn)為多個(gè)蛋白點(diǎn)，鑒定結(jié)果類似有關(guān)。

3.530 km跑對(duì)尿液其它相關(guān)蛋白的影響

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，這里的其它蛋白是指與疾病有關(guān)的蛋白質(zhì)，包括2種：前列腺特異性抗原（prostate-specific antigen，PSA）、本斯-瓊斯蛋白（bence-Jones protein，BJP）。在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，這2 種蛋白分別與前列腺和骨髓瘤腎損傷等疾患有關(guān)，并有可能是各自對(duì)應(yīng)疾患的診斷標(biāo)志物。

PSA是由前列腺腺泡及前列腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞分泌的一種特異性糖蛋白。血清中PSA 的85%～90%與PMSF 結(jié)合，而10%～15%的PSA為游離狀態(tài)，游離的PSA在血清中的含量甚微且恒定[27]。PSA 因有靶器官的特性，目前被認(rèn)為是診斷前列腺癌的首選標(biāo)志物。研究報(bào)道，任何引起前列腺細(xì)胞破壞的病理過程（炎癥、尿潴留等）可致使血清PSA升高[28]。本研究顯示，尿液中PSA運(yùn)動(dòng)后較運(yùn)動(dòng)前作為新增蛋白點(diǎn)出現(xiàn)，表明運(yùn)動(dòng)后尿液中PSA的濃度上升。究其因緣，可能與上述報(bào)道的長時(shí)間耐力運(yùn)動(dòng)引起機(jī)體炎癥及尿潴留等因素破壞了前列腺細(xì)胞有關(guān)。上述因素可能進(jìn)一步破壞了前列腺腺泡，細(xì)胞外PSA被帶到血清中，使PAS含量升高，最終經(jīng)腎臟外排增多。

BJP是免疫球蛋白分子的輕鏈，Kappa或Lambda鏈[29]。BJP也可偶爾出現(xiàn)在正常人尿中，可表示腎功能損傷。骨髓瘤患者的腎小管細(xì)胞基膜或管腔內(nèi)均有蛋白沉淀，這意味著在生理?xiàng)l件下BJP 具不溶解性或分解代謝有缺陷。目前，BJP 在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域主要認(rèn)為其與骨髓瘤腎損傷有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，運(yùn)動(dòng)后尿液中出現(xiàn)SJP 的原因尚不明了，推測(cè)可能與長時(shí)間運(yùn)動(dòng)造成腎小球/管暫時(shí)性損傷有關(guān)。

上述2 種疾病標(biāo)志物蛋白在運(yùn)動(dòng)后出現(xiàn)，試驗(yàn)前，經(jīng)詢問，所有受試者均無相關(guān)疾病和病史，耐力運(yùn)動(dòng)后尿液中這2 種蛋白濃度增加的具體機(jī)制尚不明確，有待深入探討；同時(shí)也反映出蛋白質(zhì)組學(xué)這一技術(shù)檢測(cè)蛋白質(zhì)組份具有很高的靈敏性。

4 結(jié)論與展望

（1）30 km跑引起尿液蛋白質(zhì)組表達(dá)顯著差異，表達(dá)上調(diào)/下調(diào)蛋白點(diǎn)各55個(gè)，目標(biāo)蛋白ZAG、VDB、β-Actin、Alb、PSA、BJP表達(dá)上調(diào)。

（2）ZAG的差異表達(dá)提示其可能為運(yùn)動(dòng)營養(yǎng)補(bǔ)劑篩選的候選標(biāo)志；Alb可能與長時(shí)間耐力運(yùn)動(dòng)應(yīng)激有關(guān)，用于運(yùn)動(dòng)負(fù)荷評(píng)價(jià)；而VDB、β-Actin 的差異表達(dá)可能是肌組織損傷的標(biāo)志，PSA、BJP可能與腎小球/管暫時(shí)性損傷有關(guān)，4種差異蛋白可能作為診斷運(yùn)動(dòng)性疲勞及肌損傷的潛在目標(biāo)蛋白。

（3）本研究是為構(gòu)建運(yùn)動(dòng)員某一等級(jí)、運(yùn)動(dòng)負(fù)荷及個(gè)體尿液2-DE蛋白圖譜的開端。尿液蛋白圖譜差異表達(dá)可用于監(jiān)測(cè)運(yùn)動(dòng)性疲勞、預(yù)防肌損傷、運(yùn)動(dòng)選材及機(jī)體病理性變化；同時(shí)，可作為運(yùn)動(dòng)員血液生物護(hù)照的補(bǔ)充用于反興奮劑檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)監(jiān)測(cè)無創(chuàng)化。