常劍鋒 黃志偉 劉文晴

廣東省肇慶市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東肇慶 526060

遺傳代謝?。╥nborn errors of metabolism，IEM）為基因突變?cè)斐傻拿负褪荏w活性降低，繼而引起中間或旁路代謝產(chǎn)物蓄積和終末代謝產(chǎn)物的缺乏，最終引發(fā)機(jī)體的生化代謝紊亂[1-3]。我國(guó)每年新增苯丙酮尿癥（phenylketonuria，PKU）病例可達(dá)1200～1500例，IEM是造成出生缺陷、胎兒和新生兒死亡的不可忽視的重要原因[4]。由于產(chǎn)前診斷例如基因、細(xì)胞遺傳學(xué)、生化和醫(yī)學(xué)影像學(xué)診斷等取材技術(shù)和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)的局限，導(dǎo)致IEM缺乏特異性診斷[5-7]。目前，臨床應(yīng)用具有高靈敏度和特異性的串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)（tandem mass spectrometry，TMS），對(duì)提高新生兒IEM的篩查效率作用顯著[8]。本研究旨在研究新生兒遺傳代謝病串聯(lián)質(zhì)譜篩查中氨基酸、有機(jī)酸和脂肪酸的診斷臨界值，為新生兒遺傳代謝病的串聯(lián)質(zhì)譜篩查提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年1～9月我市收治的確診為患遺傳代謝病活產(chǎn)兒98例，依據(jù)《新生兒疾病篩查技術(shù)規(guī)范》納入患兒。其中漢族97例，回族1例，體重均＞2500g，出生Apgra評(píng)分均＞9分。新生兒出生7d內(nèi)充分哺乳，7d時(shí)針刺足跟并采集微量血滴于Scheicher and Schuell 903濾紙上，室溫晾干，形成濾紙干血片標(biāo)本，送新生兒篩查實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

1.2 檢測(cè)方法

代謝指標(biāo)檢測(cè)項(xiàng)目包括12個(gè)氨基酸、22個(gè)酰基肉堿及其相對(duì)應(yīng)的比值。檢測(cè)前優(yōu)化串聯(lián)質(zhì)譜參數(shù)儀，平衡系統(tǒng)壓力。使用打孔器取直徑為3 mm的圓形濾紙片置于96孔聚丙烯板內(nèi)。氨基酸、酰基肉堿內(nèi)標(biāo)原液和萃取液（1∶108）配置，每孔加入100μL。密封微孔板，恒溫孵育并萃取氨基酸和?；鈮A。使用非衍生化法在Wasters-QT Detector串聯(lián)質(zhì)譜儀中進(jìn)行檢測(cè)；試劑盒購(gòu)自PE公司。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS19.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。檢驗(yàn)正態(tài)分布后，采用百分位數(shù)法制定各指標(biāo)cut-off值；采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)對(duì)本研究串聯(lián)質(zhì)譜cut-off值和上海新華醫(yī)院進(jìn)行比較，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。采用ROC曲線分析評(píng)價(jià)各指標(biāo)的臨床應(yīng)用價(jià)值。

2 結(jié)果

2.1 新生兒遺傳代謝病診斷結(jié)果

本研究的98例患兒中氨基酸代謝異常55例、有機(jī)酸代謝異常26例及脂肪酸代謝異常17例。分別為苯丙酮尿癥55例、甲基丙二酸血癥20例、異戊酸血癥3例、原發(fā)性肉堿缺乏癥2例、β-酮硫解酶缺乏癥1例、脂肪酸氧化代謝障礙9例、中鏈?；o酶7脫氫酶缺乏癥1例。

2.2 新生兒氨基酸和?；鈮ACut-off值

Wilcoxon秩和檢驗(yàn)與上海新華醫(yī)院的cut-off值比較發(fā)現(xiàn)，本研究新生兒串聯(lián)質(zhì)譜cut-off值與上海新華醫(yī)院有相近之處，但ARG（精氨酸）、GLY（甘氨酸）、TYR（酪氨酸）、ORN（鳥(niǎo)氨酸）、LEU（亮氨酸）、VAL（纈氨酸）、C5（異戊酰肉堿）、C12（十二碳酰肉堿）、C0/（C16+C18）[游離肉堿/（棕櫚酰肉堿+十八碳酰肉堿）]cut-off值的下限與上海新華醫(yī)院指標(biāo)間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 新生兒各氨基酸和?；鈮A指標(biāo)的Cut-off值（μmol/L）

2.3 新生兒氨基酸和?；鈮A臨床診斷臨界值

ROC 曲線分析顯示：ARG、GLY、TYR、ORN、LEU、VAL、C5、C12、C0/（C16+C18）的AUC均＞0.5均有診斷效能，其中GLY、TYR、ORN、VAL及C0/（C16+C18）的AUC均＞0.9，診斷效能顯著。根據(jù)約登指數(shù)計(jì)算方法得到各指標(biāo)的診斷臨界值分別為5.57、247.32、86.28、82.94、116.82、72.14、0.07、0.03、8.16μmol/L。見(jiàn)表2。

表2 新生兒氨基酸和?；鈮A臨床診斷臨界值及ROC曲線下面積比較

3 討論

IEM是因先天性基因缺陷導(dǎo)致蛋白質(zhì)功能異常，進(jìn)而致使體內(nèi)氨基酸、有機(jī)酸以及脂肪酸等眾多生化產(chǎn)物在合成、代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)等過(guò)程中出現(xiàn)紊亂[9-11]。TMS技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)在2min內(nèi)對(duì)一個(gè)血樣本進(jìn)行幾十種代謝物分析，并同時(shí)進(jìn)行幾十種IEM的檢測(cè)，其高度的靈敏度、特異性和選擇性，為擴(kuò)展代謝疾病篩查和提高檢測(cè)效率開(kāi)拓出新的途徑[12-13]。本研究顯示新生兒串聯(lián)質(zhì)譜cut-off值與上海新華醫(yī)院有相近之處，但部分檢測(cè)指標(biāo)仍差異顯著，其cut-off值的下限與上海新華醫(yī)院間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中ARG、GLY、TYR、ORN、LEU、VAL、C5、C12、C0/（C16+C18）的最佳臨床診斷臨界值分別 為5.57、247.32、86.28、82.94、116.82、72.14、0.07、0.03、8.16。但只有GLY、TYR、ORN、VAL及C0/（C16+C18）的診斷效能較高。雖然IEM篩查敏感性很高，但假陽(yáng)性預(yù)測(cè)值也較高。為進(jìn)一步優(yōu)化檢測(cè)指標(biāo)、提高篩查效率、控制IEM帶來(lái)的不可逆性損傷、減少召回人數(shù)、降低篩查費(fèi)用，只有擴(kuò)大新生兒疾病篩查覆蓋率、增加篩查的病種、增加篩查點(diǎn)、擴(kuò)大篩查面，才能得出能客觀反映遺傳代謝病篩查情況的資料[14]。因此本研究后續(xù)研究將繼續(xù)分析IEM篩查實(shí)驗(yàn)聯(lián)同不同性別、孕周、出生季節(jié)和出生地域的結(jié)果，以提高篩查效率。

綜上所述，本研究建立了適合人群的正常參考范圍，對(duì)提高陽(yáng)性預(yù)測(cè)值提供參考。隨著新生兒代謝疾病篩查量的不斷增加，串聯(lián)質(zhì)譜IEM篩查的各指標(biāo)cut-off值也將會(huì)隨著陽(yáng)性預(yù)測(cè)值范圍的變化而作出相應(yīng)的調(diào)整。