顏運秋，迂 斌，溫華鑫 劉繼根※

（1.湖南農業(yè)大學動物醫(yī)學院，湖南 長沙410128；2.長沙道勤生物科技有限公司，湖南 長沙 410126）

1 實驗器具

1.1 實驗材料

1.1.1 受試菌種

大腸桿菌、金黃色葡萄球菌分離株（湖南農業(yè)大學動物傳染病學實驗室保存）。

1.1.2 受試產品

液體酸化劑如意酸（長沙某公司生產），某品牌液體酸化劑A（市售，由某公司生產）。

1.2 實驗器材

超凈工作臺、生化培養(yǎng)箱、立式高壓滅菌器、恒溫鼓風干燥箱、錐形瓶、燒杯、潔凈棉簽、記號筆、培養(yǎng)皿、酒精燈、接種環(huán)等。

2 實驗方法

2.1 培養(yǎng)基的準備

大腸桿菌、金黃色葡萄球菌分別采用麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。將洗凈晾干的培養(yǎng)皿、錐形瓶、燒杯包好后放恒溫鼓風干燥烘箱內160 ℃干烤2 h 冷卻后備用；配好的麥康凱瓊脂培養(yǎng)基置于立式高壓滅菌器中115 ℃滅菌30 min，配好的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基置于立式高壓滅菌器中121 ℃滅菌30 min。超凈工作臺內無菌操作將滅菌后稍冷卻的培養(yǎng)基液分別按每皿10 ～15 ml 倒入無菌培養(yǎng)皿中，待冷卻凝固后備用。

2.2 菌種純化和培養(yǎng)

超凈工作臺內，無菌操作將大腸桿菌和金黃色葡萄球菌分別接種麥康凱瓊脂與營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平皿，生化培養(yǎng)箱37.5 ℃培養(yǎng)24 h。分別挑取培養(yǎng)基中玫瑰紅色與金黃色單個菌落（經革蘭染色鏡檢分別呈紅色中等大小短桿菌和紫色較大呈葡萄串狀的球菌），再次分別劃線接種麥康凱培養(yǎng)基與營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，生化培養(yǎng)箱37.5 ℃培養(yǎng)24 h備用。

2.3 受試品抑菌試驗

抑菌試驗均采用2 個平行組進行，每組分別取培養(yǎng)好的大腸桿菌與金黃色葡萄球菌，分別用無菌蒸餾水洗下菌苔，各自制成為0.5 麥氏單位（1.5×108個/ml）細菌懸濁液1000 ml,搖勻備用。每個平行試驗組用100 ml 無菌錐形瓶7 個，分別標記好受試品名稱及其稀釋倍數（如如意酸1∶500、A 1∶500 和空白等），將細菌懸濁液分別按每瓶100 ml 倒入7 個100 ml 錐形瓶中，其中1 錐形瓶為陽性（空白）對照瓶，受試如意酸與受試品A 各3 錐形瓶。按其標記的名稱及濃度分別加入200 ul、100 ul、50 ul 如意酸和產品A，最終菌液中受試如意酸與受試品A 的濃度分別為1∶500、1∶1 000、 1∶2 000；陽性（空白）對照不加任何受試品，充分均勻作用30 min 后分別接種對應培養(yǎng)基培養(yǎng)皿中；放入生化培養(yǎng)箱內37.5 ℃培養(yǎng)24 h，觀察抑菌結果。

3 結果與分析

3.1 如意酸與受試品A 對大腸桿菌的抑菌結果

如圖1：陽性（空白）對照皿長滿了大腸桿菌；1∶500、1∶1 000、1∶2 000 濃度稀釋下的如意酸組均無細菌生長，表明如意酸在1∶500、1∶1 000、1∶2 000 濃度稀釋條件下，對大腸桿菌均有很好抑菌效果；產品A 在1∶500、1∶1 000、1∶2 000濃度稀釋條件下均有細菌生長，且不同濃度稀釋條件下抑菌效果差距并與陽性（空白）對照無顯著差異，說明其在上述濃度稀釋條件下對大腸桿菌并無抑菌效果。

3.2 如意酸與受試品A 對金黃色葡萄球菌的抑菌結果

如圖2：陽性（空白）對照皿長滿了金黃色葡萄球菌；1∶500、1∶1 000、1∶2 000 濃度稀釋下的如意酸組均無細菌生長，表明如意酸在1∶500、1∶1 000、1∶2 000 濃度稀釋條件下，對金黃色葡萄球菌均有很好的抑菌效果；產品A 在1∶500、1∶1 000、1∶2 000 濃度稀釋條件下均有細菌生長，隨其濃度稀釋倍數增大金黃色葡萄球菌生長越多，在1∶2 000 濃度稀釋條件下與陽性（空白）對照基本無差別，說明其在1∶500 ～1∶1 000 濃度稀釋條件下對金黃色葡萄球菌生長有一定抑制作用，1∶2 000 濃度稀釋條件下對金黃色葡萄球菌無抑制效果。

4 小結與討論

圖1 不同稀釋倍數的如意酸和產品A 對大腸桿菌抑菌結果

圖2 不同稀釋濃度的如意酸和產品A 對金黃色葡萄球菌的抑菌結果

實驗表明，如意酸在抑制大腸桿菌及金黃色葡萄球菌的效果方面，其作用遠遠優(yōu)于產品A。眼下酸制劑種類繁多，通過抑菌試驗能快速直觀驗證酸化劑對水體中微生物的抑制效果。如意酸中有獨特的復合有機酸及緩沖體系，在對其進行較大倍數稀釋時仍能快速有效地電離出足量H+保持酸度并體現出強大的抑菌能力。該實驗也證明，如意酸1∶500、1∶1 000、 1∶2 000 濃 度 稀釋條件下，對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌有非常好的抑菌能力，因此動物飲水中添加適量如意酸，不僅能改善動物胃腸道的酸性環(huán)境，促進動物胃腸道健康和增加采食量，還能有效抑制飲水中的病原微生物。