顏運(yùn)秋，迂 斌，溫華鑫 劉繼根※

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙410128；2.長(zhǎng)沙道勤生物科技有限公司，湖南 長(zhǎng)沙 410126）

1 實(shí)驗(yàn)器具

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 受試菌種

大腸桿菌、金黃色葡萄球菌分離株（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物傳染病學(xué)實(shí)驗(yàn)室保存）。

1.1.2 受試產(chǎn)品

液體酸化劑如意酸（長(zhǎng)沙某公司生產(chǎn)），某品牌液體酸化劑A（市售，由某公司生產(chǎn)）。

1.2 實(shí)驗(yàn)器材

超凈工作臺(tái)、生化培養(yǎng)箱、立式高壓滅菌器、恒溫鼓風(fēng)干燥箱、錐形瓶、燒杯、潔凈棉簽、記號(hào)筆、培養(yǎng)皿、酒精燈、接種環(huán)等。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 培養(yǎng)基的準(zhǔn)備

大腸桿菌、金黃色葡萄球菌分別采用麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。將洗凈晾干的培養(yǎng)皿、錐形瓶、燒杯包好后放恒溫鼓風(fēng)干燥烘箱內(nèi)160 ℃干烤2 h 冷卻后備用；配好的麥康凱瓊脂培養(yǎng)基置于立式高壓滅菌器中115 ℃滅菌30 min，配好的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基置于立式高壓滅菌器中121 ℃滅菌30 min。超凈工作臺(tái)內(nèi)無(wú)菌操作將滅菌后稍冷卻的培養(yǎng)基液分別按每皿10 ～15 ml 倒入無(wú)菌培養(yǎng)皿中，待冷卻凝固后備用。

2.2 菌種純化和培養(yǎng)

超凈工作臺(tái)內(nèi)，無(wú)菌操作將大腸桿菌和金黃色葡萄球菌分別接種麥康凱瓊脂與營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平皿，生化培養(yǎng)箱37.5 ℃培養(yǎng)24 h。分別挑取培養(yǎng)基中玫瑰紅色與金黃色單個(gè)菌落（經(jīng)革蘭染色鏡檢分別呈紅色中等大小短桿菌和紫色較大呈葡萄串狀的球菌），再次分別劃線接種麥康凱培養(yǎng)基與營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，生化培養(yǎng)箱37.5 ℃培養(yǎng)24 h備用。

2.3 受試品抑菌試驗(yàn)

抑菌試驗(yàn)均采用2 個(gè)平行組進(jìn)行，每組分別取培養(yǎng)好的大腸桿菌與金黃色葡萄球菌，分別用無(wú)菌蒸餾水洗下菌苔，各自制成為0.5 麥?zhǔn)蠁挝唬?.5×108個(gè)/ml）細(xì)菌懸濁液1000 ml,搖勻備用。每個(gè)平行試驗(yàn)組用100 ml 無(wú)菌錐形瓶7 個(gè)，分別標(biāo)記好受試品名稱及其稀釋倍數(shù)（如如意酸1∶500、A 1∶500 和空白等），將細(xì)菌懸濁液分別按每瓶100 ml 倒入7 個(gè)100 ml 錐形瓶中，其中1 錐形瓶為陽(yáng)性（空白）對(duì)照瓶，受試如意酸與受試品A 各3 錐形瓶。按其標(biāo)記的名稱及濃度分別加入200 ul、100 ul、50 ul 如意酸和產(chǎn)品A，最終菌液中受試如意酸與受試品A 的濃度分別為1∶500、1∶1 000、 1∶2 000；陽(yáng)性（空白）對(duì)照不加任何受試品，充分均勻作用30 min 后分別接種對(duì)應(yīng)培養(yǎng)基培養(yǎng)皿中；放入生化培養(yǎng)箱內(nèi)37.5 ℃培養(yǎng)24 h，觀察抑菌結(jié)果。

3 結(jié)果與分析

3.1 如意酸與受試品A 對(duì)大腸桿菌的抑菌結(jié)果

如圖1：陽(yáng)性（空白）對(duì)照皿長(zhǎng)滿了大腸桿菌；1∶500、1∶1 000、1∶2 000 濃度稀釋下的如意酸組均無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，表明如意酸在1∶500、1∶1 000、1∶2 000 濃度稀釋條件下，對(duì)大腸桿菌均有很好抑菌效果；產(chǎn)品A 在1∶500、1∶1 000、1∶2 000濃度稀釋條件下均有細(xì)菌生長(zhǎng)，且不同濃度稀釋條件下抑菌效果差距并與陽(yáng)性（空白）對(duì)照無(wú)顯著差異，說(shuō)明其在上述濃度稀釋條件下對(duì)大腸桿菌并無(wú)抑菌效果。

3.2 如意酸與受試品A 對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌結(jié)果

如圖2：陽(yáng)性（空白）對(duì)照皿長(zhǎng)滿了金黃色葡萄球菌；1∶500、1∶1 000、1∶2 000 濃度稀釋下的如意酸組均無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，表明如意酸在1∶500、1∶1 000、1∶2 000 濃度稀釋條件下，對(duì)金黃色葡萄球菌均有很好的抑菌效果；產(chǎn)品A 在1∶500、1∶1 000、1∶2 000 濃度稀釋條件下均有細(xì)菌生長(zhǎng)，隨其濃度稀釋倍數(shù)增大金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)越多，在1∶2 000 濃度稀釋條件下與陽(yáng)性（空白）對(duì)照基本無(wú)差別，說(shuō)明其在1∶500 ～1∶1 000 濃度稀釋條件下對(duì)金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)有一定抑制作用，1∶2 000 濃度稀釋條件下對(duì)金黃色葡萄球菌無(wú)抑制效果。

4 小結(jié)與討論

圖1 不同稀釋倍數(shù)的如意酸和產(chǎn)品A 對(duì)大腸桿菌抑菌結(jié)果

圖2 不同稀釋濃度的如意酸和產(chǎn)品A 對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌結(jié)果

實(shí)驗(yàn)表明，如意酸在抑制大腸桿菌及金黃色葡萄球菌的效果方面，其作用遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于產(chǎn)品A。眼下酸制劑種類繁多，通過(guò)抑菌試驗(yàn)?zāi)芸焖僦庇^驗(yàn)證酸化劑對(duì)水體中微生物的抑制效果。如意酸中有獨(dú)特的復(fù)合有機(jī)酸及緩沖體系，在對(duì)其進(jìn)行較大倍數(shù)稀釋時(shí)仍能快速有效地電離出足量H+保持酸度并體現(xiàn)出強(qiáng)大的抑菌能力。該實(shí)驗(yàn)也證明，如意酸1∶500、1∶1 000、 1∶2 000 濃 度 稀釋條件下，對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌有非常好的抑菌能力，因此動(dòng)物飲水中添加適量如意酸，不僅能改善動(dòng)物胃腸道的酸性環(huán)境，促進(jìn)動(dòng)物胃腸道健康和增加采食量，還能有效抑制飲水中的病原微生物。