張磊，郭普宇，劉迪，薛春梅,2*

(1.佳木斯大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007；2.佳木斯大學(xué)應(yīng)用微生物研究所，黑龍江 佳木斯 154007)

平菇(Pleurotusostreatus)屬于擔(dān)子菌門(Basidiomycota)、傘菌綱(Agaricomycetes)、傘菌目(Agaricales)、側(cè)耳屬(Pleurotus)的食用菌[1]。平菇是日常生活中一種常見的藥食兩用真菌，其菌絲分解有機(jī)物質(zhì)的能力很強(qiáng)[2-3]，具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、藥用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，在消費(fèi)者中深受喜愛(ài)[4]。平菇中含有豐富的蛋白質(zhì)、多糖、氨基酸以及硫、銅、磷、鈣、鎂、鐵、鋅和硒等礦質(zhì)元素[5-6]，平菇屬于味甘、性溫的食物，能夠驅(qū)散風(fēng)寒、舒暢經(jīng)絡(luò)。平菇可以吸收其中的多糖和硒元素，多糖具有抗腫瘤等藥用效果。

試驗(yàn)對(duì)不同濃度組氨酸-PDA培養(yǎng)基中平菇菌絲的生長(zhǎng)狀況進(jìn)行對(duì)比，從而篩選出最適合平菇菌絲生長(zhǎng)的組氨酸濃度。我國(guó)擁有豐富的食用菌和藥用菌資源，食用菌的生產(chǎn)使我們國(guó)家的農(nóng)業(yè)資源利用率有了顯著的提升。探究組氨酸對(duì)平菇菌絲生長(zhǎng)的影響，為平菇菌絲生長(zhǎng)提供一個(gè)簡(jiǎn)單有效的方法，促進(jìn)氨基酸在平菇栽培上的應(yīng)用。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

供試平菇現(xiàn)保存于佳木斯大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室。為了進(jìn)行本次篩選試驗(yàn)，于2019年3月中旬對(duì)平菇母種進(jìn)行活化培養(yǎng)，母種培養(yǎng)基采用PDA培養(yǎng)基，無(wú)菌操作接種后，經(jīng)過(guò)7 d的活化培養(yǎng)后篩選出最適合平菇菌絲生長(zhǎng)的組氨酸濃度。

1.2 供試培養(yǎng)基及制備

馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)：馬鈴薯200 g、瓊脂10 g、葡萄糖10 g、加水定容至1000 mL，pH自然。

將馬鈴薯洗凈去皮，切成小塊，稱取200 g。加水煮爛，用8層紗布過(guò)濾。取濾液，加入10 g瓊脂，不斷地加熱攪拌混勻，使瓊脂溶解完全后過(guò)濾到1000 mL燒杯中。再加入10 g葡萄糖，攪拌均勻至葡萄糖完全溶解，定容至1000 mL。分別裝入7個(gè)錐形瓶中，每個(gè)錐形瓶裝100 mL，用封口膜和牛皮紙包扎完畢。將上述盛有培養(yǎng)基的錐形瓶放于高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)。在120 ℃恒溫高壓[0.098～0.118 MPa(1.0～1.2 kg/cm2)] 滅菌30min，備用。

組氨酸-PDA培養(yǎng)基：組氨酸固體0.4 g、無(wú)菌水40 mL。

用電子天平稱取0.4 g組氨酸固體加入40 mL無(wú)菌水中，搖勻至無(wú)沉淀出現(xiàn)，制備成濃度為10 mg/mL組氨酸母液，用注射器吸取組氨酸母液，將注射器的針頭取下并換上細(xì)菌過(guò)濾器，勻速按壓注射器，過(guò)濾出無(wú)菌的組氨酸溶液滴入提前備好的空錐形瓶中，放入4 ℃冰箱中備用。

分別吸取已經(jīng)配置好的組氨酸母液0、150、300、450、600、750、900 μL加入到100 mL的PDA培養(yǎng)基中，搖晃使培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)混合均勻，分別制成濃度為0、30、60、90、120、150、180 μg/mL的組氨酸-PDA培養(yǎng)基。

1.3 培養(yǎng)方法

1.3.1 接種。用解剖刀切取平菇生長(zhǎng)旺盛的組織塊，約1 cm左右，放入不同濃度的組氨酸-PDA培養(yǎng)基中，封口膜封好，并用記號(hào)筆做好標(biāo)注(日期、濃度等)。每個(gè)變量設(shè)置3個(gè)重復(fù)，放于恒溫、恒濕相同條件下進(jìn)行培養(yǎng)觀察。記錄菌絲生長(zhǎng)過(guò)程及狀態(tài)。以上均以未加入組氨酸母液的PDA培養(yǎng)基作為空白對(duì)照。

1.3.2 培養(yǎng)條件。放入25 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.3.3 觀測(cè)方法。48 h后每天定時(shí)、定點(diǎn)標(biāo)記并測(cè)量1次菌絲生長(zhǎng)量、菌絲生長(zhǎng)勢(shì)及密度。分別記錄上述培養(yǎng)基中菌絲生長(zhǎng)情況并進(jìn)行對(duì)比觀察。

2 結(jié)果與分析

經(jīng)過(guò)7 d的培養(yǎng)觀測(cè)，在不同濃度培養(yǎng)基中平菇菌絲的生長(zhǎng)狀況各不相同(表1)。

表1 不同濃度組氨酸-PDA培養(yǎng)基中菌絲生長(zhǎng)狀態(tài)對(duì)比

2.1 不同濃度組氨酸培養(yǎng)基中平菇菌絲生長(zhǎng)速度

如圖1，平菇菌絲在不同濃度的組氨酸培養(yǎng)基中每天的生長(zhǎng)速度是不同的。組氨酸濃度為120 μg/mL的培養(yǎng)基中平菇菌絲生長(zhǎng)速度最快，7 d平均長(zhǎng)度值最大。組氨酸濃度為0 μg/mL的培養(yǎng)基中平菇菌絲生長(zhǎng)速度最慢。

圖1 不同濃度組氨酸培養(yǎng)基平菇菌絲日生長(zhǎng)速率對(duì)比

2.2 不同濃度組氨酸培養(yǎng)基中平菇菌絲的生長(zhǎng)狀況

通過(guò)對(duì)平菇菌絲整齊程度、濃密度、生長(zhǎng)速度等生理指標(biāo)對(duì)比(如圖2、圖3)，平菇菌絲在組氨酸濃度為120 μg/mL的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)速度最快、菌絲顏色為白色、菌絲最濃密、菌絲較粗壯、菌絲的長(zhǎng)勢(shì)最好。未加入組氨酸的培養(yǎng)基生長(zhǎng)速度緩慢，菌絲稀疏散亂。

圖2 組氨酸濃度為120 μg/mL的培養(yǎng)基中平菇菌絲生長(zhǎng)狀況

圖3 組氨酸濃度為0 μg/mL的培養(yǎng)基中平菇菌絲生長(zhǎng)狀況

3 結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果表明，最適合平菇菌絲生長(zhǎng)的組氨酸濃度為120 μg/mL，菌絲長(zhǎng)勢(shì)最好、菌絲最濃密、菌絲粗壯、菌絲邊緣最整齊。

通過(guò)試驗(yàn)對(duì)于平菇母種的培養(yǎng)和菌種的保存具有重要的意義，同時(shí)對(duì)平菇母種培養(yǎng)基優(yōu)化和栽培提供參考。