索朗達(dá)，達(dá) 瓦，巴 貴，德 吉，次仁德吉，宋天增，丹 增，邊巴卓瑪，旦增扎巴，斯秋嘎桑，次德吉，吳玉江*

(1.西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院 畜牧獸醫(yī)研究所，西藏 拉薩 850009；2.西藏那曲地區(qū)尼瑪縣白絨山羊原種場，西藏 那曲 852000；3.西藏那曲地區(qū)尼瑪縣獸防站，西藏 那曲 852000)

絨山羊又稱克什米爾山羊，是經(jīng)過長期的自然選擇和人工選擇而形成的一個(gè)古老而優(yōu)良的地方品種，具有良好的產(chǎn)絨性能。西藏絨山羊是西藏地區(qū)特有的家畜品種，那曲地區(qū)尼瑪縣的白絨山羊是其中的典型代表，其突出特點(diǎn)是產(chǎn)絨性能好、品質(zhì)優(yōu)良，尤其是絨纖維細(xì)度能保持在14 μm左右，是山羊絨中的精品。近年來，隨著西藏地區(qū)逐步發(fā)展，國際國內(nèi)市場需求增加，農(nóng)牧民商品意識增強(qiáng)，目前絨山羊產(chǎn)業(yè)已成為西藏自治區(qū)畜牧產(chǎn)業(yè)的優(yōu)勢產(chǎn)業(yè)和重點(diǎn)發(fā)展產(chǎn)業(yè)[1]。

由于管理粗放和野交亂配，西藏絨山羊出現(xiàn)絨纖維直徑增粗等絨品質(zhì)下降的問題。近年來，本課題組的研究已開始對集中養(yǎng)殖的西藏絨山羊進(jìn)行良種選育，旨在篩選出純白、產(chǎn)絨量高、品質(zhì)好、體重高的優(yōu)質(zhì)絨山羊類群，目前已證實(shí)品種選育可改善西藏絨山羊的絨品質(zhì)且有望提高絨山羊的良種覆蓋率[2]。

山羊在繁殖季節(jié)內(nèi)卵泡的周期性變化等生殖器官的周期性活動與生殖激素的濃度水平的變化存在密切聯(lián)系[3]，睪酮(T)、促黃體素(LH)、促乳素(PRL)、雌二醇(E2)、孕酮(PP)、促性腺激素釋放激素(GnRH)、促卵泡素(FSH)這7種激素參與了哺乳動物整個(gè)的生殖生理過程，對多浪羊與和田羊初情期啟動過程中生殖激素的變化規(guī)律研究表明高水平的E2、FSH可能與初情期啟動早有關(guān)，初情期后高水平的FSH濃度可能與其多胎性狀有關(guān)[4]，這一研究結(jié)果與在福清山羊和戴云山羊中的研究結(jié)果一致[5]。對海南黑山羊的研究也表明繁殖周期中的激素分泌有一定規(guī)律，可作為擴(kuò)繁新技術(shù)應(yīng)用的理論依據(jù)[6]。本研究對放牧條件下藏西北白絨山羊全年的生殖相關(guān)激素變化規(guī)律進(jìn)行了測定和分析，以便更準(zhǔn)確掌握藏西北白絨山羊的發(fā)情繁殖規(guī)律，更好地指導(dǎo)今后的選育工作。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)動物 試驗(yàn)采用藏西北白絨山羊由尼瑪縣白絨山羊原種場提供，挑選健康、年齡3～5歲的成年經(jīng)產(chǎn)母羊20只用于試驗(yàn)。2017年5月至2018年5月，試驗(yàn)期間單獨(dú)組群，正常放牧，自由飲水。

1.1.2 配種方案 2017年5月至至2018年5月將20只試驗(yàn)?zāi)秆騿为?dú)組群飼喂，試驗(yàn)期間由于管理不善1只母羊死亡。2017年10月10日起將1只種公羊混入該圈飼養(yǎng)，使羊群自然本交，2017年11月10日結(jié)束配種，19只試驗(yàn)?zāi)秆蚓焉铩?/p>

1.1.3 季節(jié)特點(diǎn) 尼瑪縣平均海拔5 000 m以上，屬高原亞寒帶半干旱季風(fēng)性氣候和高原寒帶干旱氣候。主要?dú)夂蛱攸c(diǎn)：空氣稀薄，溫涼少雨，干濕分明；太陽輻射強(qiáng)，光照條件好，明潔度大；垂直變化大，立體氣候顯著；春遲，夏短，秋冬差異不大；寒冷期長，溫涼期短，四季不分明，晝夜溫差大；空氣干燥，冬春多大風(fēng)沙暴，無霜期短等。年平均日照時(shí)間近3 000 h，日照百分率高達(dá)66%以上；年平均氣溫-1.4 ℃左右，最熱月7月份平均氣溫14.8 ℃，大于10 ℃始終期10 d左右。全年沒有絕對無霜期，每年十月至次年五月為風(fēng)雪期和土壤凍結(jié)期，六月到八月為生長期。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品的采集 以2017年5月22日當(dāng)天記為試驗(yàn)的第1天，進(jìn)行第1次采血，之后每周采血1次，直到一年期滿，共采血52次。每次采血時(shí)使用一次性注射器采集試驗(yàn)羊頸靜脈血液3～5 mL，靜置0.5 h后3 000 r/min離心10 min，分離血清，并將血清分裝到EP管中，標(biāo)記后放置于-20 ℃冰箱中保存待測。血清樣品統(tǒng)一送至上海酶聯(lián)公司檢測促性腺激素釋放激素(GnRH)、促卵泡素(FSH)、促黃體素(LH)、促乳素(PRL)、睪酮(T)、雌二醇(E2)、孕酮(PP)7種激素水平。

1.2.2 數(shù)據(jù)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel進(jìn)行整理，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)后均以“平均值(X)±標(biāo)準(zhǔn)差(SD)”表示，用折線圖顯示每種激素全年的變化規(guī)律。

2 結(jié)果與分析

2.1 母羊血清中7種激素的全年變化規(guī)律

2.1.1 GnRH質(zhì)量濃度的全年變化規(guī)律 從圖1A知，一年內(nèi)試驗(yàn)羊的GnRH平均質(zhì)量濃度為(21.71±2.31)～(32.12±3.19)pg/mL。5月測量的GnRH平均質(zhì)量濃度達(dá)到最低值((21.71±2.31)pg/mL)，GnRH平均質(zhì)量水平逐步上升，至7月達(dá)到第一個(gè)峰值((33.09±2.13)pg/mL)，之后緩慢下降，9月后從(23.56±2.10)pg/mL逐步上升；10月份配種后測量時(shí)開始大幅上漲，GnRH平均質(zhì)量濃度保持較高水平，12月份時(shí)到達(dá)(32.12±3.19)pg/mL，直到3月份產(chǎn)羔后逐步下降至一般水平。

2.1.2 FSH質(zhì)量濃度的全年變化規(guī)律 從圖1B可知，試驗(yàn)羊的FSH平均質(zhì)量濃度為(1.31±0.21)～(2.23±0.23)mIU/mL。5月FSH平均質(zhì)量濃度從最低值((1.31±0.21) mIU/mL)逐步上升，至7月達(dá)到第一個(gè)峰值((2.11±0.25)mIU/mL)，之后緩慢下降，9月之后母羊逐漸受孕，F(xiàn)SH質(zhì)量濃度開始逐步上漲，12月時(shí)達(dá)到峰值((2.23±0.23)mIU/mL)，之后逐步回落。

2.1.3 LH質(zhì)量濃度的全年變化規(guī)律 從圖1C可知，試驗(yàn)羊的LH平均質(zhì)量濃度為(3.50±0.61)～(4.79±0.42)mIU/mL。6月至9月LH保持波動，波動范圍是(3.60±0.62)～(3.95±0.65)mIU/mL。10月開始逐步上漲，1月達(dá)到峰值((4.79±0.42)mIU/mL)，之后開始下降至一般水平。

2.1.4 E2質(zhì)量濃度的全年變化規(guī)律 從圖1D可知，一年內(nèi)試驗(yàn)羊的E2平均質(zhì)量濃度為((23.07±2.12)～(31.18±2.56)pg/mL)。5月E2平均質(zhì)量濃度處于最低值((23.07±2.12)pg/mL)，之后E2平均質(zhì)量水平逐步上升至7月達(dá)到峰值((30.38±2.19)pg/mL)，之后迅速下降。9月份之后逐步波動上升，12月達(dá)到峰值((31.18±2.56)pg/mL)之后緩慢下降，4月回到((23.72±2.70)pg/mL)。

2.1.5 T質(zhì)量濃度的全年變化規(guī)律 從圖1E可知，試驗(yàn)羊的T各月份平均質(zhì)量濃度為((36.71±15.07)～(65.51±11.56)pg/mL)。5月至6月T平均質(zhì)量濃度處于較低水平，之后逐步上升，至7月達(dá)到一個(gè)小的峰值((55.43±39.62)pg/mL)，該波峰直至9月降至最低點(diǎn)((36.71±15.07)pg/mL)，隨即繼續(xù)增高，來年1月份到達(dá)最高峰值((65.51±11.56)pg/mL)，然后呈現(xiàn)逐步回落的趨勢。

2.1.6 PP質(zhì)量濃度的全年變化規(guī)律 從圖1F可知，試驗(yàn)羊的PP平均質(zhì)量濃度為((5.10±0.84)～(8.91±0.59)ng/mL)。5月至7月PP平均質(zhì)量濃度緩慢上升至((7.91±1.47)ng/mL)，之后逐步回落，至9月降至最低點(diǎn)((6.40±1.24)ng/mL)，隨后持續(xù)增高，至第11月測量時(shí)到達(dá)((8.91±0.59)ng/mL)。

2.1.7 PRL質(zhì)量濃度的全年變化規(guī)律 從圖1G可知，試驗(yàn)羊的PRL平均質(zhì)量濃度為((122.07±16.67)～(223.98±18.87)mIU/mL)。5月PRL平均質(zhì)量濃度略降至測量最低點(diǎn)((122.07±16.67)mIU/mL)，隨后持續(xù)上升，7月到達(dá)第一個(gè)峰值((215.87±24.05)mIU/mL)，之后逐步波動下降，9月份降至)((159.71±19.75)mIU/mL)，之后開始逐步上漲，12月測量時(shí)PRL平均質(zhì)量濃度達(dá)到((213.94±24.54)mIU/mL)，PRL平均質(zhì)量濃度保持在較高水平，之后逐步下降。

3 討 論

3.1 藏西北白絨山羊GnRH質(zhì)量濃度的全年變化規(guī)律

GnRH是由下丘腦合成并釋放的一種多肽類激素，主要作用于垂體前葉，促進(jìn)LH和FSH的合成和釋放[7]，根據(jù)本研究的試驗(yàn)結(jié)果可以看到，6月開始藏西北白絨山羊的GnRH平均質(zhì)量濃度上升，7月份達(dá)到峰值后8月份降到基本水平。西藏那曲地區(qū)6月到8月是生長期，氣溫變化可能是導(dǎo)致GnRH質(zhì)量濃度增高的主要原因；同時(shí)，季節(jié)性繁殖的絨山羊品種的季節(jié)性繁殖活動受光照影響較大[8]，7、8月份光照時(shí)間的增長可能是造成此階段GnRH質(zhì)量濃度回落的原因之一。9月GnRH平均質(zhì)量降至最低。10月份GnRH平均質(zhì)量濃度逐步上漲，公羊入圈產(chǎn)生的“公畜效應(yīng)”可能促進(jìn)了這一過程，12月份到達(dá)最高值，之后母羊進(jìn)入妊娠期，GnRH質(zhì)量濃度逐步回落到正常水平。

3.2 藏西北白絨山羊FSH質(zhì)量濃度的全年變化規(guī)律

FSH啟動卵泡募集和卵泡生長。在早期卵泡發(fā)育中，F(xiàn)SH是拯救小卵泡免于細(xì)胞凋亡(卵泡卵母細(xì)胞和體細(xì)胞的程序性死亡)的主要生存因子。在黃體-卵泡期階段，孕酮和雌激素(主要是雌二醇)的血清水平降低并且不再抑制FSH的釋放，因此FSH逐漸達(dá)到峰值。隨著小腔卵泡的數(shù)量增多，其產(chǎn)生抑制素B的水平伴隨升高，降低FSH血清水平導(dǎo)致卵泡期后期FSH水平下降，這似乎是選擇優(yōu)勢卵泡排卵的關(guān)鍵[9]。在黃體期結(jié)束時(shí)，F(xiàn)SH略有升高，這對開始下一個(gè)排卵周期似乎很重要。試驗(yàn)結(jié)果顯示FSH平均質(zhì)量濃度的全年動態(tài)變化與GnRH的變化基本一致，5月開始FSH平均質(zhì)量濃度上升，7月份達(dá)到峰值，9月份降到基本水平，9月起FSH平均質(zhì)量濃度逐步上漲，這一變化過程均與GnRH的質(zhì)量濃度變化水平一致。

3.3 藏西北白絨山羊LH質(zhì)量濃度的全年變化規(guī)律

LH主要作用于卵巢卵泡膜細(xì)胞，提供雌激素合成的前體睪酮用于雌二醇的生產(chǎn)。發(fā)情周期中，F(xiàn)SH啟動卵泡生長，促進(jìn)顆粒細(xì)胞芳香化酶的產(chǎn)生和雌激素合成[10]，并會受到雌性激素反饋調(diào)節(jié)。試驗(yàn)結(jié)果顯示6月到8月間LH平均質(zhì)量濃度有一定程度的上漲，保持較高水平上下波動，但未出現(xiàn)明顯峰值，據(jù)報(bào)道LH脈沖頻率達(dá)到1次/h時(shí)才能有效刺激卵巢，本研究中的采樣頻率無法監(jiān)測LH的脈沖次數(shù)，故高水平的LH濃度不一定代表LH分泌更活躍。9月份LH濃度呈周期性波動，10月份起LH平均質(zhì)量濃度上漲至峰值然后逐步回落，LH與FSH的同步波動提示羊群可能進(jìn)入發(fā)情排卵期，選擇在此季節(jié)配種妊娠幾率較大。

3.4 藏西北白絨山羊T質(zhì)量濃度的全年變化規(guī)律

睪酮(T)是雌激素合成的前體，由芳香化酶催化產(chǎn)生雌激素，卵泡芳香化酶受FSH調(diào)控。LH作用于卵泡內(nèi)膜細(xì)胞，從而使睪酮(T)合成增加，從而在6到8月形成了T的分泌峰；睪酮進(jìn)入顆粒細(xì)胞，在少量FSH作用下轉(zhuǎn)化為雌二醇，從而引起了雌二醇在發(fā)情前的增高；9月起睪酮濃度增高，1月份達(dá)到最高值，隨著母羊進(jìn)入妊娠期逐步下降。

3.5 藏西北白絨山羊E2質(zhì)量濃度的全年變化規(guī)律

試驗(yàn)結(jié)果顯示，與5月份相比較，6、7月份E2平均質(zhì)量濃度上升至峰值后降至一般水平，高濃度的E2負(fù)反饋?zhàn)饔每赡軐?dǎo)致垂體釋放的FSH濃度降低[11]。9月份出現(xiàn)周期性波動，10月份后E2平均質(zhì)量濃度持續(xù)上升。雌激素的主要生殖生理作用是促進(jìn)雌性生殖器官的發(fā)育、卵泡成熟及排卵激素的釋放等[12-13]。

3.6 藏西北白絨山羊PP質(zhì)量濃度的全年變化規(guī)律

試驗(yàn)結(jié)果顯示5月至9月PP平均質(zhì)量濃度緩慢上升至峰值然后下降到基礎(chǔ)值，且該峰值出現(xiàn)時(shí)間落后于FSH和LH的第一個(gè)峰，這一現(xiàn)象可能是由于LH排卵峰后雌二醇水平下降，顆粒細(xì)胞開始產(chǎn)生孕酮和排卵所需要的因子；9月后PP平均質(zhì)量濃度逐步升高，這極大可能是妊娠期胎盤形成的PP，它可以與雌二醇協(xié)同作用促使乳房充分發(fā)育，為泌乳做準(zhǔn)備，對維持母羊妊娠有重要作用[14]；12月份到4月份，PP平均質(zhì)量濃度逐步下降。

3.7 藏西北白絨山羊PRL質(zhì)量濃度的全年變化規(guī)律

試驗(yàn)結(jié)果顯示藏西北白絨山羊的垂體泌乳素(PRL)濃度5月開始上升，7月到達(dá)峰值，之后逐步下降，6到8月高水平的PRL可能會作用于卵巢局部，抑制排卵反應(yīng)[15]。9月后PRL平均質(zhì)量濃度逐步上漲，這一變化與妊娠母羊的生理變化相關(guān)，催乳素可與雌二醇、孕激素等其他激素一起發(fā)揮作用，促進(jìn)乳腺發(fā)育[16]；12月份時(shí)妊娠羊群的PRL平均質(zhì)量濃度達(dá)到峰值，隨著妊娠過程逐步降低。

4 結(jié) 論

受西藏地區(qū)氣候的影響，藏西北白絨山羊在5到8月份GnRH、FSH、LH、E2、T、PP和PRL激素分泌旺盛，但第一次促性腺素升高的時(shí)候沒有出現(xiàn)明顯的LH峰，可能由于熱應(yīng)激等原因，羊只LH釋放受影響，存在發(fā)情不排卵或排出卵母細(xì)胞質(zhì)量較差等情況；9月份后這些生殖激素的分泌出現(xiàn)周期性波動，GnRH、FSH濃度水平升高的同時(shí)LH平均質(zhì)量濃度也達(dá)到峰值，因此一般配種選擇在九、十月份(第二次激素峰出現(xiàn)的時(shí)候)更為合理。另外，母羊從乏情期向發(fā)情期過渡時(shí)，有激素參與調(diào)節(jié)，這可能導(dǎo)致了短周期的出現(xiàn)。母羊的發(fā)情周期短會影響其排卵和受胎率[14]。研究藏西北白絨山羊生殖激素水平的變化規(guī)律對今后羊群繁育有一定的指導(dǎo)意義。