潘 鈺，于 沖，夏海華，葉 陽(yáng)

(黑龍江省科學(xué)院微生物研究所，哈爾濱 150010； 黑龍江省科學(xué)院高技術(shù)研究院，哈爾濱 150020)

酒精性肝病是酒精攝入過(guò)多導(dǎo)致的肝臟損傷性疾病，嚴(yán)重威脅人類身體健康，涉及氧化應(yīng)激、脂質(zhì)過(guò)氧化作用、免疫炎癥反應(yīng)等多個(gè)方面[1-2]。葛根素、姜黃素、沙棘黃酮是衛(wèi)生部公布的《既是食品又是藥品的物品名單》中葛根、姜黃、沙棘的有效成分，三者可能通過(guò)不同的機(jī)制起到減輕肝損傷的作用[3-5]。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立急性小鼠酒精性肝損傷模型，將文獻(xiàn)報(bào)道過(guò)有護(hù)肝作用的“既是食品又是藥品”的葛根素、姜黃素、沙棘黃酮組成復(fù)方，探究復(fù)方對(duì)小鼠酒精性肝損傷的輔助保護(hù)作用，旨在為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)對(duì)酒精性肝損傷具有綜合作用的保健食品提供一定的理論依據(jù)和參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

沙棘黃酮(陜西冠晨生物科技有限公司生產(chǎn))；葛根素，姜黃素(西安瑞林科技有限公司生產(chǎn))；AST(Aspartate Transaminase谷草轉(zhuǎn)氨酶)、ALT(Alanine Transaminase谷丙轉(zhuǎn)氨酶)、SOD(Superoxide Dismutase超氧化物歧化酶)、MDA(Maleic Dialdehyde丙二醛)、TG(Triglyceride甘油三酯)、GSH(Glutathione還原型谷胱甘肽)測(cè)定試劑盒(江蘇南京建成生物工程研究所生產(chǎn))；Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒(北京索萊寶科技有限公司生產(chǎn))；無(wú)水乙醇(中國(guó)天津富裕華工有限公司生產(chǎn))。

1.2 動(dòng)物試驗(yàn)

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)方對(duì)乙醇致肝損傷小鼠肝指數(shù)的影響

肝臟指數(shù)是肝臟質(zhì)量與體質(zhì)量的比值。肝臟受損后，肝臟指數(shù)可明顯上升，能反映肝臟病變程度[6]。由圖1可以看出，與對(duì)照組比較，模型組肝臟指數(shù)顯著升高(P<0.01)，說(shuō)明乙醇肝損傷小鼠模型造模成功。與模型組比較，各試驗(yàn)組均能顯著降低肝臟指數(shù)(P<0.05)，表明對(duì)酒精性肝損傷有一定保護(hù)作用。

圖1 各組對(duì)急性酒精肝損傷小鼠肝臟指數(shù)的影響與Control 組比較，**P#PFig.1 Effect of groups on the levels of aspartate aminotransferase. **P#P

2.2 復(fù)方對(duì)乙醇致肝損傷小鼠血清指標(biāo)AST、ALT活性的影響

如圖2所示，與空白對(duì)照組相比，乙醇模型組小鼠血清ALT、AST顯著升高(P<0.01)，表明小鼠急性酒精肝損傷模型造模成功。與模型組比較，試驗(yàn)各組ALT、AST含量均降低，葛根素組、姜黃素組和復(fù)方組在降低AST含量上有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著性(P<0.05)，姜黃素組在降低ALT含量上有差異顯著性(P<0.05)，復(fù)方組作用更明顯(P<0.01)。

圖2 各組對(duì)急性酒精肝損傷小鼠血清AST(A)，ALT(B)活性的影響與Control組比較，**P#P##PFig.2 Effect of groups on the levels of aspartate aminotransferase(AST)(A) and alanine transaminate(ALT)(B).**P#P##P

2.3 復(fù)方對(duì)乙醇致肝損傷小鼠肝組織中MDA、TG含量的影響

酒精性肝損傷主要影響的是脂質(zhì)水平，造成肝細(xì)胞脂肪主要是甘油三酯(TG)的積聚，形成脂肪肝。如圖3所示，模型組和對(duì)照組相比，肝臟TG值顯著升高(P<0.01)，表明酒精影響肝細(xì)胞脂肪代謝。與模型組相比，試驗(yàn)組肝臟TG含量降低(P<0.05)，表明各試驗(yàn)組減輕酒精所致脂肪代謝紊亂，減少肝細(xì)胞脂肪堆積。

肝臟MDA含量的高低直接反映了肝臟氧化應(yīng)激的強(qiáng)烈程度，是ROS所致脂質(zhì)過(guò)氧化損傷的標(biāo)志產(chǎn)物[7]。與對(duì)照組比較，模型組MDA含量顯著升高(P<0.01)，與模型組比較，試驗(yàn)組肝勻漿MDA值降低，但是差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；復(fù)方組顯著降低MDA含量(P<0.01)，表明其可減輕肝細(xì)胞的過(guò)氧化損傷。

圖3 各組對(duì)急性酒精肝損傷小鼠肝臟TG(A)，MDA(B)活性的影響與Control組比較，**P#P##PaPaaPFig.3 Effect of groups on the levels of triglyceride (TG)(A) and malondialdehyde (MDA)(B). **P*P#P##PaPaaP

圖4 各組對(duì)急性酒精肝損傷小鼠肝臟SOD(A)，GSH(B)活性的影響與Control組比較，**P#P##PFig.4 Effect of groups on the levels of superoxide (SOD)(A) and glutathione (GSH)(B). **P#P##>P

2.4 復(fù)方對(duì)乙醇致肝損傷小鼠肝組織中SOD、GSH含量的影響

乙醇肝損傷時(shí)，ROS產(chǎn)生增加，抗氧化酶SOD等活性降低，導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生氧化應(yīng)激，進(jìn)一步加重肝損傷的發(fā)展[8]。由圖4所示，與空白對(duì)照組比較，模型組SOD顯著降低(P<0.01)，與模型組比較，姜黃素組和復(fù)方組顯著增加SOD活性，表明其能夠提高抗氧化酶活力，提高抗氧化能力，起到保護(hù)肝臟作用。

乙醛是乙醇代謝的中間產(chǎn)物，乙醛與GSH結(jié)合會(huì)影響肝臟發(fā)揮正常功能。乙醛與GSH結(jié)合，會(huì)使GSH的含量降低，質(zhì)膜通透性和流動(dòng)性發(fā)生改變，線粒體等細(xì)胞器的結(jié)構(gòu)和功能受到損害[8]。與空白對(duì)照組比較，模型組GSH含量顯著降低(P<0.01)，表明短時(shí)間內(nèi)大量攝入酒精，肝臟產(chǎn)生較強(qiáng)的氧化應(yīng)激。與模型組相比，除沙棘黃酮組都能顯著地提高GSH含量(P<0.05或P<0.01)，與葛根素和姜黃素組比較，復(fù)方組減輕氧化應(yīng)激產(chǎn)生的肝臟的GSH損耗作用更加明顯(P<0.01)。

2.5 乙醇致肝損傷小鼠肝組織病理學(xué)

如圖5所示，透射電鏡掃描圖顯示空白對(duì)照組小鼠肝細(xì)胞細(xì)胞核完整，有少量脂滴，線粒體正常；急性酒精肝損傷模型組小鼠肝細(xì)胞發(fā)生核固縮，脂滴增多，線粒體變性；單一材料處理組選取了護(hù)肝效果相對(duì)較好的姜黃素組(Cur)，透射電鏡圖顯示姜黃素組小鼠肝細(xì)胞有明顯的核固縮癥狀；復(fù)方組小鼠肝細(xì)胞脂滴增多，顯示肝細(xì)胞受到輕微損傷。

圖5 對(duì)照組、模型組、姜黃素組、復(fù)方組小鼠肝臟透射電鏡掃描圖Fig.5 Tem images of liver of control group, model group, curcumin group and compound group

3 結(jié)語(yǔ)

酒精性肝損傷是常見(jiàn)肝病之一， 嚴(yán)重危害人們健康。姜黃素對(duì)肝臟纖維化有較好的保護(hù)作用[9]；葛根素抑制甘油三酯合成作用效果較好，有解酒護(hù)肝等功效作用[10]；沙棘黃酮具有良好的自由基清除能力及抑制脂質(zhì)過(guò)氧化作用[11]。比較三種材料的單獨(dú)護(hù)肝作用，姜黃素護(hù)肝作用相對(duì)較好，三種成分組成的復(fù)方護(hù)肝作用優(yōu)于單獨(dú)作用，三種成分也許能起到一定的協(xié)同上調(diào)作用，加強(qiáng)了對(duì)脂質(zhì)過(guò)氧化作用的抵抗，清除活性氧能力增強(qiáng)，阻止機(jī)體產(chǎn)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，使得抗氧化酶很好地發(fā)揮抗氧化作用。