王慧 張?jiān)葡?/p>

[摘要] 公共用品微生物檢測的目的是為了通過檢測公共場所的消毒效果，從而加強(qiáng)公共場所消毒效率，保證公共場所的公共用品安全、衛(wèi)生，通過定期對公共場所采集的物品進(jìn)行微生物檢測，有利于督促相關(guān)部門對公共設(shè)施制度健全的的消毒規(guī)章制度，培養(yǎng)消毒人員加強(qiáng)消毒操作技術(shù)，保障公共場所公共用品的衛(wèi)生安全，提高公共場所公共用品消毒效率。

[關(guān)鍵詞] 公共場所;公共用品;微生物;檢測

[中圖分類號] R7 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1672-5654（2020）01（a）-0160-03

[Abstract] The purpose of microbiology testing of public goods is to strengthen the disinfection efficiency of public places and to ensure the safety and sanitation of public goods in public places by testing the disinfection effect of public places. By regularly conducting microbiological testing on items collected in public places， it is helpful to urge related departments sound disinfection rules and regulations for public facilities; cultivate disinfection personnel to strengthen disinfection operation technology; guarantee the sanitation and safety of public supplies in public places; improve the disinfection efficiency of public supplies in public places.

[Key words] Public places; Public goods; Microorganism; Detection

公共場所的公共用品如果消毒不到位，會導(dǎo)致細(xì)菌滋生，嚴(yán)重會傳播傳染類病毒，因此需要定期通過采集公共場所中公共用品的微生物進(jìn)行檢查，從而有效監(jiān)督公共場所衛(wèi)生安全問題，也能夠?qū)魅炯膊∑鸬椒婪蹲饔?，通過公共用品微生物檢測[1]，完善公共場所衛(wèi)生安全相關(guān)規(guī)章制度，為公共安全提供科學(xué)的依據(jù)。

1? 公共場所公共用品微生物檢測方法

1.1? 微生物檢查范圍

2018年，微生物檢查相關(guān)機(jī)構(gòu)對市內(nèi)4類公共場所做了微生物檢查，分別是洗浴場所、美容場所、理發(fā)場所和旅店，其中一共有490戶，對其中1 076份公共衛(wèi)生用品采集微生物進(jìn)行檢測。針對上述4類場所中毛巾、拖鞋、浴巾等進(jìn)行檢測，通過檢測分析出其中含有大量細(xì)菌，包括大腸菌群、溶血性鏈球菌等，在拖鞋中檢測出含有真菌成分。

1.2? 微生物收集方法

通過對公共用品中隨機(jī)抽取的方法，將場所中做過消毒處理準(zhǔn)備使用的物品進(jìn)行微生物收集工作，要全程進(jìn)行無菌操作，通過利用將細(xì)菌消除過后的棉拭子，浸泡在10 mL滅菌生理鹽水內(nèi)，在采集的公共物品上進(jìn)行反復(fù)的涂抹，注意要涂抹均勻[2]，利用剪刀，將手拿部分減掉，將沾取公共物品微生物的棉拭子放進(jìn)生理鹽水內(nèi)，4 h內(nèi)送往實(shí)驗(yàn)室檢測。

1.3? 微生物收集部位和面積

①對于毛巾、浴巾、枕巾等進(jìn)行微生物收集時(shí)，需要先將其進(jìn)行對折，將棉拭子在其反正面進(jìn)行反復(fù)涂抹，范圍以25 cm2為標(biāo)準(zhǔn)，反復(fù)涂抹5次過后，作為一份樣品，在對其進(jìn)行微生物檢測時(shí)，需要每件物品收集2份微生物樣品。

②對床單、被罩等進(jìn)行微生物檢測時(shí)，需要采集使用過程中與皮膚接觸較多的部位，例如頸部或者腳部，與收集毛巾的方法相同，以25 cm2為標(biāo)準(zhǔn)，反復(fù)涂抹5次過后，作為一份樣品，需要采集2份微生物樣品進(jìn)行檢測。

③對睡衣、浴袍等進(jìn)行微生物檢測時(shí)，需要對即將檢測的對象采取兩個(gè)范圍進(jìn)行展開，通過不同地方采取兩個(gè)25 cm2的面積范圍，分別對其進(jìn)行5次反復(fù)均勻的涂抹，每個(gè)公共物品的微生物檢測收集2份樣品。

④在對拖鞋進(jìn)行采集微生物樣品時(shí)，將鞋內(nèi)與皮膚接觸最多的部位進(jìn)行采集，可以通過腳趾部分對其25 cm2的面積進(jìn)行反復(fù)的涂抹，5次過后作為一份樣品，通常可以將一雙鞋作為一份樣品，采集的總面積為50 cm2。

2? 樣品的培養(yǎng)及檢驗(yàn)流程

2.1? 實(shí)驗(yàn)器材和培養(yǎng)基

想要對公共場所中的公共物品進(jìn)行科學(xué)的微生物檢測，就要通過各種實(shí)驗(yàn)器材和培養(yǎng)基的支持，通過高壓蒸汽滅菌器、試管、器皿、恒溫培養(yǎng)箱等實(shí)驗(yàn)器材對微生物進(jìn)行檢測[3]，利用生理鹽水、血瓊脂培養(yǎng)基、孟加拉紅培養(yǎng)基等對微生物的繁殖提供營養(yǎng)基質(zhì)。

2.2? 微生物檢驗(yàn)流程

①對采集的樣品進(jìn)行稀釋，將放有采樣后棉拭子的試管充分震搖，此液為1：10的樣品勻液，用1 mL無菌吸管吸取1：10的樣品勻液，沿管壁緩緩注入到盛有9 mL的無菌生理鹽水管中，制成1：100的樣品勻液。每遞增稀釋一次，都要更換一次1 mL無菌吸管。

②對樣品中細(xì)菌總數(shù)進(jìn)行檢驗(yàn)，通過對樣品的分析，預(yù)測出樣品的污染情況，選擇1～2個(gè)稀釋度的樣品勻液，對其采取10倍遞增稀釋過程中，將吸取的1 mL勻液分別放置在2個(gè)無菌器皿中，再通過1 mL的稀釋液，對兩個(gè)無菌器皿中的樣品進(jìn)行對比，把營養(yǎng)瓊脂冷卻到45～50度左右，取15～20 mL分別倒入2個(gè)無菌器皿中[4]，并將其混合均勻，待瓊脂凝固之后，把2個(gè)無菌器皿進(jìn)行翻轉(zhuǎn)，放到培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

③對菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，對菌落的計(jì)數(shù)要選擇菌落數(shù)在30～300 CFU之間，并且無蔓延菌落生長的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)。在計(jì)數(shù)過程中，若所有稀釋度的菌落數(shù)均超過300 CFU，用稀釋度最高的平板的菌落平均數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù);若所有稀釋度菌落數(shù)均小于30 CFU，則按照稀釋倍數(shù)最低的平板的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù);若所有稀釋度均無菌生長，則以<1乘以最低稀釋倍數(shù)進(jìn)行菌落計(jì)數(shù);若所有稀釋度菌落數(shù)均不在30～300 CFU之間，以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù);若只有1個(gè)稀釋度的菌落數(shù)在適宜范圍內(nèi)，以兩個(gè)平板的平均菌落數(shù)乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)計(jì)數(shù);若兩個(gè)連續(xù)稀釋度菌落數(shù)均在適宜范圍內(nèi)，則按菌落計(jì)數(shù)公式計(jì)算。

3? 微生物檢測方法

3.1? 大腸桿菌檢測方法

通過乳糖膽鹽發(fā)酵實(shí)驗(yàn)進(jìn)行檢查，將收集的公共物品微生物樣品倒進(jìn)雙料乳糖膽鹽發(fā)酵液中，置于培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18～24 h，繼而對其進(jìn)行仔細(xì)的觀察，通過分析確定是否有酸和氣產(chǎn)生，如果沒有出現(xiàn)產(chǎn)酸和產(chǎn)氣的現(xiàn)象，則通過檢測可以認(rèn)定為大腸菌群為陰性[5]，如果觀察過程中發(fā)現(xiàn)產(chǎn)酸和產(chǎn)氣現(xiàn)象，需要進(jìn)行分離培養(yǎng)，從而進(jìn)一步證實(shí)實(shí)驗(yàn)。

分離培養(yǎng)：從產(chǎn)酸和產(chǎn)氣的樣品中，挑取1環(huán)培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)接到伊紅美藍(lán)瓊脂平板中，再將其放置在培養(yǎng)箱中18～24 h，取出并進(jìn)行仔細(xì)觀察菌落在培養(yǎng)過程中形成的形態(tài)進(jìn)行分析，通過革蘭氏染色鏡檢對其進(jìn)行下一步研究。在伊紅美藍(lán)瓊脂平板選取類似大腸菌群菌落接種到乳糖發(fā)酵管中，置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～24 h，凡乳糖發(fā)酵產(chǎn)酸產(chǎn)氣，革蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌，即為檢出大腸菌群。

3.2? 金黃色葡萄球菌檢測

①將采取的公共用品中的1 mL微生物樣品放在9 mL的氯化鈉肉湯培養(yǎng)基內(nèi)，培養(yǎng)18～24 h，繼而需要從培養(yǎng)基中取出1～2接種環(huán)接種在血瓊脂培養(yǎng)基中，置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～24 h，此時(shí)平板上菌落成圓形、金黃色、凸起，表面光滑，周圍有溶血環(huán)，選取其中較為典型的菌落，通過鏡檢進(jìn)行分析，如果是革蘭氏陽性，會出現(xiàn)葡萄狀排列現(xiàn)象。

②通過血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)進(jìn)行金黃色葡萄球菌檢測，吸取新鮮血漿，按照1：4的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，其中0.5 mL放在滅菌試管中，再加入等待檢測的肉湯培養(yǎng)物中的細(xì)菌[6]，要注意培養(yǎng)24 h左右的，取0.5 mL放在滅菌試管中，將新鮮血漿和待檢菌混勻，放在溫箱中，每隔30 min對其仔細(xì)觀察一次，放置24 h左右，如果檢測出現(xiàn)凝塊現(xiàn)象，可以確定檢測結(jié)果是陽性。

③實(shí)驗(yàn)報(bào)告，在上面敘述的實(shí)驗(yàn)過程中，如果平板出現(xiàn)典型菌落生長現(xiàn)象，通過染色鏡檢，血漿凝固酶試驗(yàn)陽性，得出科學(xué)的報(bào)告。

3.3? 溶血性鏈球菌檢測方法

①選取1 mL的公共用品微生物樣品，將其放置在9 mL的葡萄糖肉浸液肉湯中，如果樣品出現(xiàn)污染嚴(yán)重的現(xiàn)象，要根據(jù)上文所提到的同樣量接種在匹克氏肉湯中，放在培養(yǎng)皿中18～24 h，接種在血平板上，再放置18～24 h進(jìn)行培養(yǎng)，將其中產(chǎn)生的溶血圓形的細(xì)小菌落挑起，放置在血平板對其進(jìn)行分純處理，再對其進(jìn)行觀察和分析，鏈的長短能夠直接收環(huán)境的影響和細(xì)菌種類的影響，液體培養(yǎng)過程中容易形成較長的鏈，相反，固體培養(yǎng)基中鏈的長度較短。

②實(shí)驗(yàn)報(bào)告，對血平板上的菌落進(jìn)行分析，當(dāng)期呈現(xiàn)灰白色菌落，呈現(xiàn)半透明狀態(tài)，表面較為光滑，呈現(xiàn)圓形或者卵圓形，通過鏈的方式以此排列，并且在周圍伴有溶血環(huán)[7]，這時(shí)能夠通過實(shí)驗(yàn)得出樣品有溶血性鏈球菌。

3.4? 真菌檢測方法

①將1：10的稀釋液通過滅菌吸管吸取2 mL，將其分別放置在滅菌平皿中，每個(gè)滅菌平皿中放置1 mL，同時(shí)，另外吸取1 mL放置在9 mL的滅菌鹽水中，用新的滅菌吸管對其吸取5次，這時(shí)，勻液為1：100稀釋液，然后在根據(jù)上述順序以同樣的方式做10倍遞增稀釋液，每次換一只吸管，結(jié)合樣品中的污染情況進(jìn)行分析，并選3個(gè)合理的稀釋度，等到溶液冷卻到45℃左右時(shí)，放進(jìn)滅菌平皿中，等到其凝固之后，將其放置在25～28℃的溫箱中，放置3 d后對其進(jìn)行觀察，以一周為周期進(jìn)行培養(yǎng)和觀察分析。

②菌落計(jì)數(shù)，在這些實(shí)驗(yàn)中，通常選擇5～50 CFU平皿展開計(jì)數(shù)，通過兩個(gè)滅菌平皿中的菌落平均數(shù)乘以稀釋倍數(shù);若兩個(gè)稀釋度菌落數(shù)都在規(guī)定范圍內(nèi)或3個(gè)稀釋度都不在范圍內(nèi)，可以通過菌落總數(shù)的計(jì)算方法對其進(jìn)行計(jì)數(shù)。

4? 檢測結(jié)果

通過對公共場所公共用品的檢測，能夠得出市內(nèi)90%的衛(wèi)生用品微生物指標(biāo)檢測合格，其中真菌檢測率較高，達(dá)到9%。

5? 結(jié)論

綜上所述，通過該次監(jiān)測可以看出，該市公共場所公共用品的微生物指標(biāo)合格率較高，其中大型公共場所消毒效果較好，小公共場所合格率較低，因此需要相關(guān)部門加強(qiáng)衛(wèi)生監(jiān)督和宣傳工作，定期對公共場所的公共用品進(jìn)行微生物檢測。

[參考文獻(xiàn)]

[1]? 王惠平，高全山，楊麗君，等.公共場所公共用品的衛(wèi)生狀況分析[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2017（10）：178.

[2]? 祝艷云，曹萍.公共場所公共用品的微生物檢測分析[J].中國衛(wèi)生產(chǎn)業(yè)，2015，263（36）：124-126.

[3]? 尹小燕，陳宏宇.公共場所公共用品的微生物檢測分析[J].中國農(nóng)村衛(wèi)生，2017（10）：37.

[4]? 李繼強(qiáng).公共場所住宿業(yè)公共用品消毒方式的探討[J].中國公共衛(wèi)生管理，2016（4）：119-121.

[5]? 馬玉霞，麗娜.哈密地區(qū)公共場所公共用品衛(wèi)生監(jiān)測[J].中國消毒學(xué)雜志，2019（6）：121-122.

[6]? 樸亨東.2008～2010年圖們市公共場所公共用品消毒監(jiān)測[J].中國實(shí)用醫(yī)藥，2017（32）：266-267.

[7]? 劉柳萍.公共場所公共用品消毒效果監(jiān)測[J].中國消毒學(xué)雜志，2016（1）：13.

（收稿日期：2019-10-09）