傅鈺 桂靜 李雄

【摘要】 目的 進(jìn)一步研究干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)技術(shù)在結(jié)核病診斷中的優(yōu)勢(shì)， 為未來(lái)進(jìn)一步提高結(jié)核病檢出率奠定基礎(chǔ)。方法 138例患者， 分別接受結(jié)核菌素皮膚過(guò)敏試驗(yàn)與干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)。比較兩種檢查方法診斷結(jié)核病的靈敏度、特異度;不同結(jié)核病患者干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)診斷準(zhǔn)確率。結(jié)果 138例患者， 病理確診結(jié)核病42例， 非結(jié)核病96例。干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)診斷結(jié)核病的靈敏度為85.71%（36/42）、特異度為90.63%（87/96）， 均高于結(jié)核菌素皮膚過(guò)敏試驗(yàn)的66.67%（28/42）、80.21%（77/96）， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。肺結(jié)核患者27例， 肺外結(jié)核患者15例。肺外結(jié)核患者干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)診斷準(zhǔn)確率為100.00%， 高于肺結(jié)核患者的77.78%， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)方法滿足結(jié)核病臨床診斷的需求， 該診斷方法具有更高的陽(yáng)性檢出率， 并且還具有操作步驟簡(jiǎn)單、結(jié)果精準(zhǔn)等優(yōu)點(diǎn)， 能夠減少誤診、漏診等情況發(fā)生， 為結(jié)核病的早期預(yù)防、早期治療奠定基礎(chǔ)， 因此值得在臨床上做進(jìn)一步推廣。

【關(guān)鍵詞】 干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)技術(shù);結(jié)核病;結(jié)核菌素皮膚過(guò)敏試驗(yàn)

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.07.042

現(xiàn)階段， 結(jié)核病作為臨床常見(jiàn)病， 已經(jīng)成為全世界不容忽視的醫(yī)療衛(wèi)生問(wèn)題， 該疾病具有多樣臨床表現(xiàn)， 隨著疾病發(fā)展往往會(huì)累及全身， 威脅生命， 因此為了保證預(yù)后， 需要及早診斷， 并根據(jù)結(jié)核病發(fā)展情況采取針對(duì)性治療手段[1， 2]。本中心通過(guò)長(zhǎng)期實(shí)踐發(fā)現(xiàn)， 干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)技術(shù)是一種科學(xué)的診斷方法， 在結(jié)核病等疾病診斷中的意義重大， 因此本文為進(jìn)一步評(píng)價(jià)干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)技術(shù)在結(jié)核病中的應(yīng)用價(jià)值， 現(xiàn)選取本中心收治的138例患者作為研究對(duì)象， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取本中心于2018年2月～2019年4月收治的138例患者作為研究對(duì)象， 其中男83例， 女45例;平均年齡（46.9±5.3）歲。

1. 2 方法 患者分別接受干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)技術(shù)診斷、結(jié)核菌素皮膚過(guò)敏試驗(yàn)診斷。其中在結(jié)核菌素皮膚過(guò)敏試驗(yàn)中， 采用Moutax方法， 取0.25 ml

吐溫80的結(jié)核菌素注入到患者前臂掌側(cè)面， 在注射后的2～3 d時(shí)間內(nèi)測(cè)量直徑， 若測(cè)量結(jié)果顯示面積>10 mm

則認(rèn)為是陽(yáng)性。之后對(duì)兩組患者實(shí)施干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)技術(shù)診斷， 采集5 ml靜脈血后， 通過(guò)肝素抗凝管， 選擇Qiagen公司提供的試劑盒， 根據(jù)試劑盒的內(nèi)容對(duì)患者血液樣本進(jìn)行分析。

1. 3 觀察指標(biāo) 比較兩種檢查方法診斷結(jié)核病的靈敏度、特異度;不同結(jié)核病患者干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)診斷準(zhǔn)確率。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 兩種檢查方法診斷結(jié)核病的靈敏度、特異度比較

138例患者， 病理確診結(jié)核病42例， 非結(jié)核病96例。干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)診斷結(jié)核病的靈敏度為85.71%（36/42）、特異度為90.63%（87/96）， 均高于結(jié)核菌素皮膚過(guò)敏試驗(yàn)的66.67%（28/42）、80.21%（77/96）， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

2. 2 不同結(jié)核病患者干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)診斷準(zhǔn)確率比較 肺結(jié)核患者27例， 肺外結(jié)核患者

15例。肺外結(jié)核患者干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)診斷準(zhǔn)確率為100.00%， 高于肺結(jié)核患者的77.78%， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表2。

3 討論

目前我國(guó)非結(jié)核病的發(fā)病率居高不下， 對(duì)居民生命安全構(gòu)成研究威脅， 同時(shí)我國(guó)現(xiàn)階段結(jié)核病的發(fā)現(xiàn)率較低， 導(dǎo)致結(jié)核病傳染的幾率增加， 因此在當(dāng)前臨床上， 快速診斷與治療是結(jié)核病防控的關(guān)鍵。根據(jù)當(dāng)前臨床經(jīng)驗(yàn)可知， 各地區(qū)均以實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)作為臨床診斷結(jié)核病的金標(biāo)準(zhǔn)， 且通過(guò)各類實(shí)驗(yàn)室檢查也可以發(fā)現(xiàn)結(jié)核病病菌， 而傳統(tǒng)診斷方法中的抗酸染色圖片敏感度僅為50%左右， 分枝桿菌培養(yǎng)則需要近

1個(gè)月的時(shí)間， 存在培養(yǎng)耗時(shí)長(zhǎng)、效率低、陽(yáng)性檢出率不滿意等問(wèn)題[3-5]。所以為了進(jìn)一步改善結(jié)核病患者

預(yù)后， 尋找一種科學(xué)的診斷方法已經(jīng)成為醫(yī)學(xué)界關(guān)注的重點(diǎn)內(nèi)容。

本研究結(jié)果顯示：干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)診斷結(jié)核病的靈敏度為85.71%（36/42）、特異度為90.63%（87/96）， 均高于結(jié)核菌素皮膚過(guò)敏試驗(yàn)的66.67%（28/42）、80.21%（77/96）， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)技術(shù)是在酶聯(lián)免疫檢測(cè)法基礎(chǔ)上逐漸發(fā)展而來(lái)的新方法， 通過(guò)對(duì)抗原或抗體進(jìn)行檢測(cè)， 在獲得患者血清后， 對(duì)酶復(fù)合物做常規(guī)稀釋， 并結(jié)合說(shuō)明書內(nèi)容識(shí)別診斷檢驗(yàn)中的陰性或陽(yáng)性結(jié)果對(duì)患者疾病情況進(jìn)行判斷。而干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)技術(shù)則在原有技術(shù)體系上進(jìn)行了優(yōu)化， 通過(guò)試劑盒避免了傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)中復(fù)雜的步驟， 醫(yī)師可以按照說(shuō)明書的步驟合理安排各個(gè)試驗(yàn)步驟， 能夠在短時(shí)間內(nèi)對(duì)血清中的部分物質(zhì)進(jìn)行判斷， 因此與傳統(tǒng)診斷檢測(cè)技術(shù)相比， 干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)技術(shù)無(wú)論是在效率還是在準(zhǔn)確性方面都有明顯的提高[6-8]?，F(xiàn)代研究認(rèn)為， 結(jié)核病感染T細(xì)胞檢測(cè)的主要刺激源為特異性抗原， 因此在臨床診斷期間， 通過(guò)酶聯(lián)免疫的方法確診結(jié)核病感染具有可行性[2]。干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)技術(shù)作為一種新的診斷技術(shù)， 最初在被英國(guó)學(xué)者建立后， 目前已經(jīng)被廣泛應(yīng)用在歐美等西方發(fā)達(dá)資本主義國(guó)家中， 成為結(jié)核感染診斷的常見(jiàn)方法。在本次研究中， 本文通過(guò)γ-干擾素檢測(cè)試劑盒即干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)技術(shù)能夠精準(zhǔn)檢測(cè)結(jié)核分歧桿菌感染情況， 其整體特異度與靈敏度較高， 因此具有廣闊的應(yīng)用前景。而相比之下， 結(jié)核菌素皮膚過(guò)敏試驗(yàn)雖然已經(jīng)被廣泛的應(yīng)用在臨床診斷結(jié)核病中， 但是受卡介苗影響， 導(dǎo)致在結(jié)核菌素皮膚過(guò)敏試驗(yàn)中會(huì)出現(xiàn)較高的假陽(yáng)性率， 整個(gè)診斷技術(shù)對(duì)于免疫抑制患者缺乏足夠的靈敏度， 造成檢出準(zhǔn)確率下降[9]， 例如本次研究結(jié)果證明， 結(jié)核病患者接受結(jié)核菌素皮膚過(guò)敏試驗(yàn)診斷存在不足。

相比之下， 近幾年以干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)技術(shù)為代表的新型免疫學(xué)方法已經(jīng)在臨床上得到廣泛的應(yīng)用， 現(xiàn)代研究均證明， 干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)技術(shù)對(duì)于結(jié)核桿菌具有較高的特異性， 在獲得疑似結(jié)核病患者血液樣本之后， 能夠?qū)κ軝z者進(jìn)行全血檢測(cè)， 通過(guò)識(shí)別γ干擾素水平變化， 進(jìn)而對(duì)患者身體狀況作出詳細(xì)判斷， 判斷是否發(fā)生結(jié)核桿菌感染等情況。在本次研究中， 本文在干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)技術(shù)診斷期間， 通過(guò)Qiagen公司的試劑盒進(jìn)行檢測(cè)， 該試劑盒的主要通過(guò)利用CFP-10、ESAT-6， 并將其作為診斷結(jié)核桿菌的抗原， 通過(guò)對(duì)患者血液樣本中的抗原特異性T細(xì)胞進(jìn)行刺激， 避免患者發(fā)生免疫應(yīng)答， 最終為疾病臨床診斷提供一種科學(xué)有有效方法。在結(jié)核病診斷期間， 上述整個(gè)診斷過(guò)程的抗原編碼主要來(lái)源于RD-1， 該物質(zhì)作為結(jié)核分歧桿菌基因中所包含的一種基因片段， 可以反映患者身體情況， 包含了卡介苗在內(nèi)的所有分歧桿菌， 而相對(duì)應(yīng)的肺結(jié)核分歧桿菌是不存在的， 這就決定了在結(jié)核病診斷中可以保持較高的靈敏度， 因此在臨床上可以通過(guò)干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)技術(shù)有效區(qū)分卡介苗與結(jié)核分歧桿菌， 保證了診斷質(zhì)量[10]。所以在疾病臨床診斷期間， 干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)技術(shù)可以幫助醫(yī)師快速確診結(jié)核病， 尤其是在肺外結(jié)核病診斷中的效果更顯著， 具有極高的靈敏度， 本研究結(jié)果顯示：肺外結(jié)核患者干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)診斷準(zhǔn)確率為100.00%， 高于肺結(jié)核患者的77.78%， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）對(duì)于肺外結(jié)核病患者， 診斷期間可以根據(jù)肺部以外臟器中發(fā)生結(jié)核病病變之后判斷疾病發(fā)展情況。而臨床上針對(duì)這種情況， 多數(shù)學(xué)者針對(duì)肺外結(jié)核病的臨床診斷問(wèn)題進(jìn)行了研究， 結(jié)果顯示影像學(xué)檢查技術(shù)（如X線胸片）難以正確評(píng)估患者疾病發(fā)展， 大部分檢查結(jié)果提示胸部正常;而相比之下， 干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)技術(shù)能夠快速識(shí)別患者體內(nèi)γ干擾素反應(yīng)水平， 通過(guò)對(duì)T細(xì)胞介導(dǎo)情況作出判斷， 并以其中關(guān)鍵生化指標(biāo)變化來(lái)判斷患者疾病發(fā)展， 保證具有較高的靈敏度[3]。從本次研究結(jié)果來(lái)看， 通過(guò)干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)方法可以取得滿意的診斷結(jié)果， 與傳統(tǒng)方法相比， 該技術(shù)在臨床診斷結(jié)核病期間的檢出率更高， 對(duì)相關(guān)病原體的敏感度更強(qiáng)， 因此檢出率滿意， 符合臨床干預(yù)的需求。

也有學(xué)者通過(guò)詳細(xì)研究發(fā)現(xiàn)， 臨床上針對(duì)結(jié)核潛伏感染或者合并免疫系統(tǒng)疾病患者， 通過(guò)干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)技術(shù)依然可以保持較高的陽(yáng)性檢出率， 并且從相關(guān)地區(qū)的應(yīng)用情況可知， 該技術(shù)已經(jīng)有替代傳統(tǒng)結(jié)核菌素皮膚過(guò)敏試驗(yàn)診斷的趨勢(shì)， 進(jìn)一步論證該技術(shù)具有廣闊的應(yīng)用前景[4]。

從相關(guān)人員的研究情況來(lái)看， 也有學(xué)者針對(duì)干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)技術(shù)的臨床應(yīng)用先進(jìn)性展開(kāi)分析， 并取得了一定成果。文獻(xiàn)[5]在相關(guān)問(wèn)題研究中， 以100例患者為研究對(duì)象， 在根據(jù)患者疾病類型進(jìn)行分組之后， 分別對(duì)患者采取了干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)技術(shù)檢驗(yàn)與結(jié)核抗體試驗(yàn)， 研究結(jié)果證明， 肺外結(jié)核病組的20例患者， 在經(jīng)過(guò)干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)后， 其陽(yáng)性率為85.0%;而在經(jīng)過(guò)結(jié)核抗體試驗(yàn)后， 其檢出率僅為55.0%， 因此認(rèn)為干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)技術(shù)具有理想的應(yīng)用價(jià)值， 這與本文的研究結(jié)果是相同的。

綜上所述， 干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)方法滿足結(jié)核病臨床診斷的需求， 該診斷方法具有更高的陽(yáng)性檢出率， 并且還具有操作步驟簡(jiǎn)單、結(jié)果精準(zhǔn)等優(yōu)點(diǎn)， 能夠減少誤診、漏診等情況發(fā)生， 為結(jié)核病的早期預(yù)防、早期治療奠定基礎(chǔ)， 因此值得在臨床上做進(jìn)一步推廣。

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[收稿日期：2019-10-16]