金艷平 賈章志
摘? 要:目的:試圖通過(guò)研究長(zhǎng)期大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)對(duì)胸腺上皮細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響,進(jìn)一步探討運(yùn)動(dòng)性免疫抑制產(chǎn)生的機(jī)制。方法:8周齡雄性SD大鼠96只,采用勻速跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)進(jìn)行6周遞增負(fù)荷運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分為4組,分別為安靜對(duì)照組、運(yùn)動(dòng)前安靜組、運(yùn)動(dòng)后即刻組、運(yùn)動(dòng)后3h組,分別于第0周即訓(xùn)練前和第2、4、6周周末,麻醉取主動(dòng)脈血和大鼠胸腺。結(jié)果:2周和6周胸腺指數(shù)顯著性降低,4周下降不明顯;0周大鼠的胸腺被膜下上皮細(xì)胞排列緊密,結(jié)構(gòu)完整清晰,到第6周胸腺上皮細(xì)胞排列松散,細(xì)胞間隙增大,結(jié)構(gòu)遭到明顯破壞;甲狀腺激素受體與0周相比,2周、4周、6周受體表達(dá)量均顯著升高,2周、4周、6周之間相比,受體的表達(dá)量沒(méi)有顯著性差異。結(jié)論:長(zhǎng)期大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)使胸腺體積縮小、上皮結(jié)構(gòu)遭到破壞,甲狀腺激素可能通過(guò)影響胸腺上皮細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)來(lái)影響胸腺激素的含量,機(jī)體可能通過(guò)增加甲狀腺激素受體的數(shù)量來(lái)維持甲狀腺激素的生物學(xué)作用,以對(duì)抗強(qiáng)烈的運(yùn)動(dòng)性免疫抑制過(guò)程中胸腺形態(tài)結(jié)構(gòu)的破壞,保證機(jī)體的正常功能。
關(guān)鍵詞:胸腺上皮細(xì)胞? 甲狀腺激素? 甲狀腺激素受體
中圖分類(lèi)號(hào):G80-35? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文章編號(hào):2095-2813(2020)01(b)-0025-02
1? 材料與方法
1.1 研究對(duì)象和分組
SPF級(jí)SD雄性大鼠96只(8周齡),動(dòng)物合格證號(hào):NO.44005900001124。分籠飼養(yǎng),每籠6只,自由飲食、飲水,飼料為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)顆粒型固體大鼠飼料,飲用水為雙蒸水。
適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,將大鼠隨機(jī)分為4組,每組24只。安靜對(duì)照組各周均不施加任何運(yùn)動(dòng)干預(yù);主要用于觀察生長(zhǎng)發(fā)育對(duì)測(cè)試指標(biāo)的影響。運(yùn)動(dòng)前安靜組、運(yùn)動(dòng)后即刻組、運(yùn)動(dòng)后3h組按照擬定方案運(yùn)動(dòng)完成6周遞增負(fù)荷運(yùn)動(dòng)。
1.2 運(yùn)動(dòng)方案
適應(yīng)性喂養(yǎng)1周,運(yùn)動(dòng)組開(kāi)始進(jìn)行6周遞增負(fù)荷跑臺(tái)訓(xùn)練。1周運(yùn)動(dòng)6d,每天運(yùn)動(dòng)30min,周日休息。動(dòng)物跑臺(tái)速度為10m/min。第2周速度為20m/min。此后,每周以5m/min的增速增加運(yùn)動(dòng)負(fù)荷,至運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練最后1周達(dá)到大鼠運(yùn)動(dòng)的最大強(qiáng)度負(fù)荷40m/min。
1.3 取材
適應(yīng)性訓(xùn)練開(kāi)始當(dāng)天,運(yùn)動(dòng)后即刻組與運(yùn)動(dòng)后3h組大鼠以10m/min的速度運(yùn)動(dòng)30min,分別在運(yùn)動(dòng)后即刻和運(yùn)動(dòng)后3h后,麻醉大鼠,麻醉后取出大鼠胸腺、腹主動(dòng)脈血液,置于冰箱保存待用。第2周、4周、6周分別完成一個(gè)定量負(fù)荷20 m/min、30 m/min、40 m/min后取材。
1.4 主要試劑和儀器
大鼠甲狀腺激素T3酶聯(lián)免疫分析試劑盒、大鼠甲狀腺激素受體一抗、羊抗兔二抗試劑盒。
Motic光學(xué)顯微鏡、彩色數(shù)碼CCD攝像頭、全自動(dòng)組織脫水機(jī)、石蠟包埋機(jī)、石蠟輪轉(zhuǎn)切片機(jī)、臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)、酶標(biāo)儀。
1.5 測(cè)試指標(biāo)及測(cè)試方法
胸腺指數(shù)——稱(chēng)重法、甲狀腺激素的測(cè)定——ELISA、甲狀腺激素受體的測(cè)定——免疫組化。
1.6 圖像處理及數(shù)理統(tǒng)計(jì)
數(shù)字圖像采集系統(tǒng)采集圖像,圖像分析系統(tǒng)分析計(jì)算樣本陽(yáng)性產(chǎn)物的平均光密度值。所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,用SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。
2? 研究結(jié)果
2.1 大鼠胸腺指數(shù)的變化
實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示隨年齡增加,安靜對(duì)照組大鼠的胸腺指數(shù)逐漸下降,第4周和第6周大鼠的胸腺指數(shù)顯著下降。隨著運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度的增加和運(yùn)動(dòng)時(shí)間的延長(zhǎng),運(yùn)動(dòng)組大鼠的胸腺指數(shù)呈下降趨勢(shì)。第2周顯著下降;第4周和第6周非常顯著下降。
2.2 大鼠胸腺被膜下上皮細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化
試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),第0周大鼠的胸腺被膜下上皮細(xì)胞排列緊密,結(jié)構(gòu)清晰,隨著運(yùn)動(dòng)時(shí)間的延長(zhǎng),大鼠胸腺上皮細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)逐漸破壞,第6周可見(jiàn)大鼠胸腺上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)出現(xiàn)了明顯破壞,排列松散,細(xì)胞間隙增寬,胸腺上皮細(xì)胞的結(jié)構(gòu)明顯不完整。
2.3 大鼠胸腺上皮細(xì)胞上甲狀腺激素受體表達(dá)情況
隨著年齡的增加,胸腺上皮細(xì)胞上甲狀腺激素受體的表達(dá)量沒(méi)有顯著性差異。第0周和第6周對(duì)照組和運(yùn)動(dòng)組胸腺上皮細(xì)胞上甲狀腺激素受體表達(dá)量沒(méi)有顯著性差異;第2周、第4周運(yùn)動(dòng)組的甲狀腺激素受體的表達(dá)量顯著高于安靜對(duì)照組。隨著運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度的增加和運(yùn)動(dòng)時(shí)間的延長(zhǎng),各組大鼠胸腺上皮細(xì)胞上甲狀腺激素受體的表達(dá)量逐漸升高,與第0周相比,運(yùn)動(dòng)組大鼠胸腺上皮細(xì)胞上甲狀腺激素受體的表達(dá)量顯著升高。
2.4 大鼠血清中甲狀腺激素T3的變化
實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),隨著年齡的增長(zhǎng),大鼠血清中T3的含量沒(méi)有變化,第2周和第4周大鼠,運(yùn)動(dòng)組大鼠血清中T3的含量高于安靜對(duì)照組,第6周各組大鼠血清中T3的含量則沒(méi)有差異。隨運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度的增加和運(yùn)動(dòng)時(shí)間的延長(zhǎng),運(yùn)動(dòng)組大鼠血清中T3的含量逐漸上升,第2周、第4周和第6周運(yùn)動(dòng)組大鼠血清中T3的含量顯著升高。
3? 討論
3.1 六周遞增負(fù)荷運(yùn)動(dòng)對(duì)大鼠胸腺指數(shù)的影響
胸腺作為機(jī)體重要的中樞免疫器官,對(duì)機(jī)體免疫監(jiān)視和自身穩(wěn)定起主導(dǎo)作用,主要作用是產(chǎn)生大量T淋巴細(xì)胞、分泌各種胸腺激素與胸腺因子,發(fā)揮細(xì)胞免疫作用[1]。安靜對(duì)照組結(jié)果顯示,生長(zhǎng)發(fā)育對(duì)胸腺指數(shù)有一定的影響,隨著年齡的增長(zhǎng),大鼠胸腺指數(shù)逐漸下降,原因是胸腺在青春期達(dá)到絕對(duì)重量的最大值,以后開(kāi)始逐漸萎縮,隨著體重的增加胸腺指數(shù)逐漸降低,說(shuō)明運(yùn)動(dòng)作為一種刺激,能加速胸腺的萎縮,并隨著運(yùn)動(dòng)時(shí)間的延長(zhǎng),萎縮越來(lái)越嚴(yán)重。說(shuō)明長(zhǎng)期遞增負(fù)荷運(yùn)動(dòng)能對(duì)胸腺產(chǎn)生非常顯著的影響,該研究結(jié)果與本方向的研究結(jié)果一致[2]。
3.2 六周遞增負(fù)荷運(yùn)動(dòng)對(duì)大鼠胸腺上皮細(xì)胞上甲狀腺激素受體表達(dá)的影響
安靜對(duì)照組實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,胸腺被膜下上皮細(xì)胞上甲狀腺激素受體的表達(dá)量出現(xiàn)增齡性變化,隨著年齡的增長(zhǎng)逐漸增加。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,隨著運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度的增加和運(yùn)動(dòng)時(shí)間的延長(zhǎng),胸腺上皮細(xì)胞上甲狀腺激素受體的表達(dá)先升高后降低。第2周、第4周大鼠胸腺上皮細(xì)胞上甲狀腺激素受體的表達(dá)量持續(xù)上升,提示此階段機(jī)體細(xì)胞免疫功能對(duì)遞增負(fù)荷訓(xùn)練逐漸適應(yīng),機(jī)體處以應(yīng)激過(guò)程的“反休克”狀態(tài)[3]。但到第6周甲狀腺激素受體的表達(dá)量急劇而下,可能的原因是,長(zhǎng)期遞增負(fù)荷運(yùn)動(dòng)后期胸腺形態(tài)結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破壞,免疫機(jī)能的平衡被打破,機(jī)體免疫抑制進(jìn)一步加深。
3.3 六周遞增負(fù)荷運(yùn)動(dòng)對(duì)血清中甲狀腺激素T3的影響
甲狀腺是人體最大的內(nèi)分泌腺,主要作用是促進(jìn)能量代謝和物質(zhì)代謝,與機(jī)體的生長(zhǎng)和發(fā)育有密切關(guān)系[4]。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明,血清中甲狀腺激素T3的含量不隨年齡的增長(zhǎng)發(fā)生明顯變化,運(yùn)動(dòng)組大鼠血清中T3的含量雖運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度的增加和運(yùn)動(dòng)時(shí)間的延長(zhǎng)先升高后降低,出現(xiàn)這種現(xiàn)象可能是因?yàn)?,?周大鼠的機(jī)體處于緊急的應(yīng)激狀態(tài),機(jī)體為了維持正常的生理功能,甲狀腺激素的合成與分泌增加,致使血清中甲狀腺激素T3的含量顯著上升。第6周,運(yùn)動(dòng)組大鼠血清中T3的含量有出現(xiàn)顯著升高,可能的原因是在運(yùn)動(dòng)刺激的最初階段,機(jī)體強(qiáng)烈的應(yīng)激是各種應(yīng)激激素迅速升高,但隨著運(yùn)動(dòng)負(fù)荷的增加,機(jī)體免疫神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)的平衡被打破,免疫抑制進(jìn)一步加深,為了減小免疫失衡對(duì)機(jī)體的損害,血清中T3含量進(jìn)一步升高,盡力保持被打破的免疫失衡。
參考文獻(xiàn)
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