金艷平 賈章志

摘? 要：目的：試圖通過研究長期大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)對(duì)胸腺上皮細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響，進(jìn)一步探討運(yùn)動(dòng)性免疫抑制產(chǎn)生的機(jī)制。方法：8周齡雄性SD大鼠96只，采用勻速跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)進(jìn)行6周遞增負(fù)荷運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分為4組，分別為安靜對(duì)照組、運(yùn)動(dòng)前安靜組、運(yùn)動(dòng)后即刻組、運(yùn)動(dòng)后3h組，分別于第0周即訓(xùn)練前和第2、4、6周周末，麻醉取主動(dòng)脈血和大鼠胸腺。結(jié)果：2周和6周胸腺指數(shù)顯著性降低，4周下降不明顯;0周大鼠的胸腺被膜下上皮細(xì)胞排列緊密，結(jié)構(gòu)完整清晰，到第6周胸腺上皮細(xì)胞排列松散，細(xì)胞間隙增大，結(jié)構(gòu)遭到明顯破壞;甲狀腺激素受體與0周相比，2周、4周、6周受體表達(dá)量均顯著升高，2周、4周、6周之間相比，受體的表達(dá)量沒有顯著性差異。結(jié)論：長期大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)使胸腺體積縮小、上皮結(jié)構(gòu)遭到破壞，甲狀腺激素可能通過影響胸腺上皮細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)來影響胸腺激素的含量，機(jī)體可能通過增加甲狀腺激素受體的數(shù)量來維持甲狀腺激素的生物學(xué)作用，以對(duì)抗強(qiáng)烈的運(yùn)動(dòng)性免疫抑制過程中胸腺形態(tài)結(jié)構(gòu)的破壞，保證機(jī)體的正常功能。

關(guān)鍵詞：胸腺上皮細(xì)胞? 甲狀腺激素? 甲狀腺激素受體

中圖分類號(hào)：G80-35? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文章編號(hào)：2095-2813（2020）01（b）-0025-02

1? 材料與方法

1.1 研究對(duì)象和分組

SPF級(jí)SD雄性大鼠96只（8周齡），動(dòng)物合格證號(hào)：NO.44005900001124。分籠飼養(yǎng)，每籠6只，自由飲食、飲水，飼料為國家標(biāo)準(zhǔn)顆粒型固體大鼠飼料，飲用水為雙蒸水。

適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，將大鼠隨機(jī)分為4組，每組24只。安靜對(duì)照組各周均不施加任何運(yùn)動(dòng)干預(yù);主要用于觀察生長發(fā)育對(duì)測試指標(biāo)的影響。運(yùn)動(dòng)前安靜組、運(yùn)動(dòng)后即刻組、運(yùn)動(dòng)后3h組按照擬定方案運(yùn)動(dòng)完成6周遞增負(fù)荷運(yùn)動(dòng)。

1.2 運(yùn)動(dòng)方案

適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，運(yùn)動(dòng)組開始進(jìn)行6周遞增負(fù)荷跑臺(tái)訓(xùn)練。1周運(yùn)動(dòng)6d，每天運(yùn)動(dòng)30min，周日休息。動(dòng)物跑臺(tái)速度為10m/min。第2周速度為20m/min。此后，每周以5m/min的增速增加運(yùn)動(dòng)負(fù)荷，至運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練最后1周達(dá)到大鼠運(yùn)動(dòng)的最大強(qiáng)度負(fù)荷40m/min。

1.3 取材

適應(yīng)性訓(xùn)練開始當(dāng)天，運(yùn)動(dòng)后即刻組與運(yùn)動(dòng)后3h組大鼠以10m/min的速度運(yùn)動(dòng)30min，分別在運(yùn)動(dòng)后即刻和運(yùn)動(dòng)后3h后，麻醉大鼠，麻醉后取出大鼠胸腺、腹主動(dòng)脈血液，置于冰箱保存待用。第2周、4周、6周分別完成一個(gè)定量負(fù)荷20 m/min、30 m/min、40 m/min后取材。

1.4 主要試劑和儀器

大鼠甲狀腺激素T3酶聯(lián)免疫分析試劑盒、大鼠甲狀腺激素受體一抗、羊抗兔二抗試劑盒。

Motic光學(xué)顯微鏡、彩色數(shù)碼CCD攝像頭、全自動(dòng)組織脫水機(jī)、石蠟包埋機(jī)、石蠟輪轉(zhuǎn)切片機(jī)、臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)、酶標(biāo)儀。

1.5 測試指標(biāo)及測試方法

胸腺指數(shù)——稱重法、甲狀腺激素的測定——ELISA、甲狀腺激素受體的測定——免疫組化。

1.6 圖像處理及數(shù)理統(tǒng)計(jì)

數(shù)字圖像采集系統(tǒng)采集圖像，圖像分析系統(tǒng)分析計(jì)算樣本陽性產(chǎn)物的平均光密度值。所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。

2? 研究結(jié)果

2.1 大鼠胸腺指數(shù)的變化

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示隨年齡增加，安靜對(duì)照組大鼠的胸腺指數(shù)逐漸下降，第4周和第6周大鼠的胸腺指數(shù)顯著下降。隨著運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度的增加和運(yùn)動(dòng)時(shí)間的延長，運(yùn)動(dòng)組大鼠的胸腺指數(shù)呈下降趨勢。第2周顯著下降;第4周和第6周非常顯著下降。

2.2 大鼠胸腺被膜下上皮細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化

試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，第0周大鼠的胸腺被膜下上皮細(xì)胞排列緊密，結(jié)構(gòu)清晰，隨著運(yùn)動(dòng)時(shí)間的延長，大鼠胸腺上皮細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)逐漸破壞，第6周可見大鼠胸腺上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)出現(xiàn)了明顯破壞，排列松散，細(xì)胞間隙增寬，胸腺上皮細(xì)胞的結(jié)構(gòu)明顯不完整。

2.3 大鼠胸腺上皮細(xì)胞上甲狀腺激素受體表達(dá)情況

隨著年齡的增加，胸腺上皮細(xì)胞上甲狀腺激素受體的表達(dá)量沒有顯著性差異。第0周和第6周對(duì)照組和運(yùn)動(dòng)組胸腺上皮細(xì)胞上甲狀腺激素受體表達(dá)量沒有顯著性差異;第2周、第4周運(yùn)動(dòng)組的甲狀腺激素受體的表達(dá)量顯著高于安靜對(duì)照組。隨著運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度的增加和運(yùn)動(dòng)時(shí)間的延長，各組大鼠胸腺上皮細(xì)胞上甲狀腺激素受體的表達(dá)量逐漸升高，與第0周相比，運(yùn)動(dòng)組大鼠胸腺上皮細(xì)胞上甲狀腺激素受體的表達(dá)量顯著升高。

2.4 大鼠血清中甲狀腺激素T3的變化

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，隨著年齡的增長，大鼠血清中T3的含量沒有變化，第2周和第4周大鼠，運(yùn)動(dòng)組大鼠血清中T3的含量高于安靜對(duì)照組，第6周各組大鼠血清中T3的含量則沒有差異。隨運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度的增加和運(yùn)動(dòng)時(shí)間的延長，運(yùn)動(dòng)組大鼠血清中T3的含量逐漸上升，第2周、第4周和第6周運(yùn)動(dòng)組大鼠血清中T3的含量顯著升高。

3? 討論

3.1 六周遞增負(fù)荷運(yùn)動(dòng)對(duì)大鼠胸腺指數(shù)的影響

胸腺作為機(jī)體重要的中樞免疫器官，對(duì)機(jī)體免疫監(jiān)視和自身穩(wěn)定起主導(dǎo)作用，主要作用是產(chǎn)生大量T淋巴細(xì)胞、分泌各種胸腺激素與胸腺因子，發(fā)揮細(xì)胞免疫作用[1]。安靜對(duì)照組結(jié)果顯示，生長發(fā)育對(duì)胸腺指數(shù)有一定的影響，隨著年齡的增長，大鼠胸腺指數(shù)逐漸下降，原因是胸腺在青春期達(dá)到絕對(duì)重量的最大值，以后開始逐漸萎縮，隨著體重的增加胸腺指數(shù)逐漸降低，說明運(yùn)動(dòng)作為一種刺激，能加速胸腺的萎縮，并隨著運(yùn)動(dòng)時(shí)間的延長，萎縮越來越嚴(yán)重。說明長期遞增負(fù)荷運(yùn)動(dòng)能對(duì)胸腺產(chǎn)生非常顯著的影響，該研究結(jié)果與本方向的研究結(jié)果一致[2]。

3.2 六周遞增負(fù)荷運(yùn)動(dòng)對(duì)大鼠胸腺上皮細(xì)胞上甲狀腺激素受體表達(dá)的影響

安靜對(duì)照組實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，胸腺被膜下上皮細(xì)胞上甲狀腺激素受體的表達(dá)量出現(xiàn)增齡性變化，隨著年齡的增長逐漸增加。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，隨著運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度的增加和運(yùn)動(dòng)時(shí)間的延長，胸腺上皮細(xì)胞上甲狀腺激素受體的表達(dá)先升高后降低。第2周、第4周大鼠胸腺上皮細(xì)胞上甲狀腺激素受體的表達(dá)量持續(xù)上升，提示此階段機(jī)體細(xì)胞免疫功能對(duì)遞增負(fù)荷訓(xùn)練逐漸適應(yīng)，機(jī)體處以應(yīng)激過程的“反休克”狀態(tài)[3]。但到第6周甲狀腺激素受體的表達(dá)量急劇而下，可能的原因是，長期遞增負(fù)荷運(yùn)動(dòng)后期胸腺形態(tài)結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破壞，免疫機(jī)能的平衡被打破，機(jī)體免疫抑制進(jìn)一步加深。

3.3 六周遞增負(fù)荷運(yùn)動(dòng)對(duì)血清中甲狀腺激素T3的影響

甲狀腺是人體最大的內(nèi)分泌腺，主要作用是促進(jìn)能量代謝和物質(zhì)代謝，與機(jī)體的生長和發(fā)育有密切關(guān)系[4]。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，血清中甲狀腺激素T3的含量不隨年齡的增長發(fā)生明顯變化，運(yùn)動(dòng)組大鼠血清中T3的含量雖運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度的增加和運(yùn)動(dòng)時(shí)間的延長先升高后降低，出現(xiàn)這種現(xiàn)象可能是因?yàn)?，?周大鼠的機(jī)體處于緊急的應(yīng)激狀態(tài)，機(jī)體為了維持正常的生理功能，甲狀腺激素的合成與分泌增加，致使血清中甲狀腺激素T3的含量顯著上升。第6周，運(yùn)動(dòng)組大鼠血清中T3的含量有出現(xiàn)顯著升高，可能的原因是在運(yùn)動(dòng)刺激的最初階段，機(jī)體強(qiáng)烈的應(yīng)激是各種應(yīng)激激素迅速升高，但隨著運(yùn)動(dòng)負(fù)荷的增加，機(jī)體免疫神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)的平衡被打破，免疫抑制進(jìn)一步加深，為了減小免疫失衡對(duì)機(jī)體的損害，血清中T3含量進(jìn)一步升高，盡力保持被打破的免疫失衡。

參考文獻(xiàn)

[1] 汪美光.《 醫(yī)學(xué)微生物學(xué)與免疫學(xué)》[J].單克隆抗體通訊，2005（1）：54-54.

[2] 李金煥.6周遞增負(fù)荷運(yùn)動(dòng)中大鼠胸腺和脾臟的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化特征[J].南京體育學(xué)院學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2012（1）：24-28.

[3] 朱亞林，王國慶.遞增負(fù)荷的力竭性運(yùn)動(dòng)對(duì)血清甲狀腺激素的影響[J].標(biāo)記免疫分析與臨床，2003（1）：51-52.