周 芳,李召廣,劉云峰
(1.江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學院,江蘇 泰州 225300; 2.江蘇吉貝爾藥業(yè)股份有限公司,江蘇 鎮(zhèn)江 212009)
鹵米松是一種新型強效的外用糖皮質(zhì)激素類藥物,具有明顯的抗炎、抗增生、抗過敏、抗?jié)B出、收縮毛細血管和止癢的作用,主要應(yīng)用劑型為乳膏劑,在臨床上用于濕疹、皮炎、白癜風、銀屑病、扁平苔蘚等多種非感染性炎癥性皮膚病的治療,其使用方便、起效迅速、安全性高,臨床應(yīng)用效果得到較高認可[1-6]。鹵米松原料藥在合成過程中使用了有機溶劑甲醇、乙醇、乙腈等,其中殘留的溶劑無治療益處,對人的健康有潛在的危害,應(yīng)盡可能去除,以符合相關(guān)質(zhì)量標準或要求?!吨袊幍洹?015版及人用藥品注冊技術(shù)國際協(xié)調(diào)會(ICH)指導原則中對這些有機溶劑殘留限度進行了規(guī)定[7-8],為了有效控制產(chǎn)品的質(zhì)量和安全性,文中結(jié)合相關(guān)文獻[9-12],采用氣相色譜法對上述3種殘留的有機溶劑進行檢測。
GC-7890A氣相色譜儀包括氫焰離子化檢測器(Agilent科技有限公司);SQP十萬分之一電子天平(賽多利斯科學儀器(北京)有限公司);KQ-400DB數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。
無水乙醇(批號20180718,分析純,國藥集團化學試劑有限公司);乙腈(批號18065023,色譜純,TEDIA);甲醇(批號18045039,色譜純,TEDIA);DMF(批號18080173,色譜純,TEDIA);鹵米松原料藥(批號181101、181102、181103,自制)。
以DB-624型毛細管柱(50.0 m×0.32 mm×0.5 μm)為色譜柱,起始柱溫為50℃,保持7 min,以40℃·min-1的速度升溫至200℃,保持6 min;進樣口溫度為200℃,檢測器溫度為220℃;載氣:N2,1 mL·min-1;燃氣:H2,40 mL·min-1;助燃氣:空氣,450 mL·min-1;進樣量1 μL。
對照品儲備液配制:分別取甲醇150 mg、無水乙醇250 mg、乙腈20 mg,精密稱定,分別置50 mL容量瓶中,加DMF稀釋至刻度,制成每1 mL約含甲醇3 mg、乙醇5 mg、乙腈0.4 mg的溶液。
混合對照溶液的配制:精密吸取各對照品儲備液1 mL,至10 mL容量瓶中,加DMF稀釋至刻度,搖勻,即得。
供試品溶液的配制:取鹵米松原料藥1 g,精密稱定,置10 mL容量瓶中,加DMF溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得。
分別取空白溶劑、混合對照溶液、樣品溶液按2.1色譜條件進行測定,色譜圖如圖1、2、3所示,甲醇、乙醇、乙腈的保留時間分別為4.567、5.143、6.180 min,各組分間分離度大于1.5,各組分理論塔板數(shù)大于5000,空白溶劑無干擾,分離效果好,符合系統(tǒng)要求。
圖1 空白溶劑GC圖
圖2 對照品溶液GC圖(依次為甲醇、乙醇、乙腈和DMF)
圖3 供試品溶液GC圖(依次為乙醇、DMF)
取2.2中對照品儲備液,精密量取2、1、0.5、0.2、0.1 mL,置10 mL量瓶中,加DMF稀釋至刻度,搖勻,作為各濃度梯度的供試液。按2.1的色譜條件進行測定,記錄峰面積。每份溶液進樣3針,求平均峰面積。以平均峰面積為縱坐標Y,以供試溶液濃度(μg·mL-1)為橫坐標X,進行線性回歸,結(jié)果見表1。結(jié)果表明在該色譜條件下,甲醇、乙醇、乙腈在各自的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
表1 線性試驗結(jié)果
取2.2中混合對照品溶液用DMF逐級稀釋,按2.1色譜條測定,以S/N≈10作為定量限,甲醇、乙醇、乙腈的濃度分別為2.53、1.30、0.748 μg·mL-1;以S/N≈2~3作為檢測限,甲醇、乙醇、乙腈的濃度分別為1.26、0.65、0.374μg·mL-1。
取2.2中混合對照品溶液,按2.1色譜條件進行測定,連續(xù)進樣6次,記錄峰面積。計算甲醇、乙醇、乙腈峰面積的RSD分別為5.07%,3.32%,4.65%,試驗表明精密度良好。
按2.2供試品溶液配制方法,配制9份樣品溶液,精密移取對照品儲備液0.8、1.0、1.2 mL分別加入到供試品溶液中,制備低、中、高濃度的溶液各3份,按2.1色譜條件測定,記錄峰面積,每份溶液進樣3針,求平均峰面積,根據(jù)峰面積計算回收率。測得甲醇的平均回收率為103.42%,RSD為0.94%;乙醇的平均回收率為100.90%,RSD為1.95%;乙腈的平均回收率為103.98%,RSD為0.51%。
取2.2中混合對照品溶液,按2.1色譜條件進行測定,間隔0、1、2、4、6、8 h,進樣一次,考察各時間點甲醇、乙醇、乙腈的穩(wěn)定性,在8 h內(nèi)該溶液中甲醇、乙醇、乙腈濃度的RSD分別為2.28%、2.56%、2.60%,試驗表明溶液穩(wěn)定。
按2.2中的方法配制三批樣品溶液,按2.1色譜條件進行測定,每份樣品溶液測定3次,記錄色譜圖,計算樣品中各有機溶劑的含量。3批樣品中乙醇的含量分別為0.25%、0.26%、0.26%,甲醇和乙腈未檢出,結(jié)果符合規(guī)定。
氣相色譜中常用的溶劑有水、乙醇、二甲基亞砜、DMF等,選用DMF做溶劑,可較好地溶解樣品。為了獲得較高的檢測靈敏度,所以配制了較高濃度的供試品溶液,1 g樣品在10 mL的DMF中能快速完全溶解。采用程序升溫,使3種有機溶劑達到完全分離的效果,而且縮短了分離的時間。
根據(jù)《中國藥典》2015版和ICH指導原則的規(guī)定,甲醇的殘留限度為0.37%、乙醇的殘留限度為0.5%、乙腈的殘留限度為0.041%,經(jīng)試驗測定后自制的原料藥鹵米松中這3種有機溶劑殘留符合限度的規(guī)定,本方法經(jīng)過方法學考察各項均符合規(guī)定,該方法可用于鹵米松原料藥中甲醇、乙醇、乙腈有機溶劑殘留的檢測。