周 芳，李召?gòu)V，劉云峰

(1.江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院，江蘇 泰州 225300； 2.江蘇吉貝爾藥業(yè)股份有限公司，江蘇 鎮(zhèn)江 212009)

鹵米松是一種新型強(qiáng)效的外用糖皮質(zhì)激素類(lèi)藥物，具有明顯的抗炎、抗增生、抗過(guò)敏、抗?jié)B出、收縮毛細(xì)血管和止癢的作用，主要應(yīng)用劑型為乳膏劑，在臨床上用于濕疹、皮炎、白癜風(fēng)、銀屑病、扁平苔蘚等多種非感染性炎癥性皮膚病的治療，其使用方便、起效迅速、安全性高，臨床應(yīng)用效果得到較高認(rèn)可[1-6]。鹵米松原料藥在合成過(guò)程中使用了有機(jī)溶劑甲醇、乙醇、乙腈等，其中殘留的溶劑無(wú)治療益處，對(duì)人的健康有潛在的危害，應(yīng)盡可能去除，以符合相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)或要求?！吨袊?guó)藥典》2015版及人用藥品注冊(cè)技術(shù)國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)(ICH)指導(dǎo)原則中對(duì)這些有機(jī)溶劑殘留限度進(jìn)行了規(guī)定[7-8]，為了有效控制產(chǎn)品的質(zhì)量和安全性，文中結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)[9-12]，采用氣相色譜法對(duì)上述3種殘留的有機(jī)溶劑進(jìn)行檢測(cè)。

1 儀器和試藥

1.1 儀器

GC-7890A氣相色譜儀包括氫焰離子化檢測(cè)器(Agilent科技有限公司)；SQP十萬(wàn)分之一電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司)；KQ-400DB數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥

無(wú)水乙醇(批號(hào)20180718，分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；乙腈(批號(hào)18065023，色譜純，TEDIA)；甲醇(批號(hào)18045039，色譜純，TEDIA)；DMF(批號(hào)18080173，色譜純，TEDIA)；鹵米松原料藥(批號(hào)181101、181102、181103，自制)。

2 方法

2.1 色譜條件

以DB-624型毛細(xì)管柱(50.0 m×0.32 mm×0.5 μm)為色譜柱，起始柱溫為50℃，保持7 min，以40℃·min-1的速度升溫至200℃，保持6 min；進(jìn)樣口溫度為200℃，檢測(cè)器溫度為220℃；載氣：N2，1 mL·min-1；燃?xì)猓篐2，40 mL·min-1；助燃?xì)猓嚎諝猓?50 mL·min-1；進(jìn)樣量1 μL。

2.2 溶液的配制

對(duì)照品儲(chǔ)備液配制：分別取甲醇150 mg、無(wú)水乙醇250 mg、乙腈20 mg，精密稱定，分別置50 mL容量瓶中，加DMF稀釋至刻度，制成每1 mL約含甲醇3 mg、乙醇5 mg、乙腈0.4 mg的溶液。

混合對(duì)照溶液的配制：精密吸取各對(duì)照品儲(chǔ)備液1 mL，至10 mL容量瓶中，加DMF稀釋至刻度，搖勻，即得。

供試品溶液的配制：取鹵米松原料藥1 g，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加DMF溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

3 方法驗(yàn)證及結(jié)果

3.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

分別取空白溶劑、混合對(duì)照溶液、樣品溶液按2.1色譜條件進(jìn)行測(cè)定，色譜圖如圖1、2、3所示，甲醇、乙醇、乙腈的保留時(shí)間分別為4.567、5.143、6.180 min，各組分間分離度大于1.5，各組分理論塔板數(shù)大于5000，空白溶劑無(wú)干擾，分離效果好，符合系統(tǒng)要求。

圖1 空白溶劑GC圖

圖2 對(duì)照品溶液GC圖(依次為甲醇、乙醇、乙腈和DMF)

圖3 供試品溶液GC圖(依次為乙醇、DMF)

3.2 線性試驗(yàn)

取2.2中對(duì)照品儲(chǔ)備液，精密量取2、1、0.5、0.2、0.1 mL，置10 mL量瓶中，加DMF稀釋至刻度，搖勻，作為各濃度梯度的供試液。按2.1的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積。每份溶液進(jìn)樣3針，求平均峰面積。以平均峰面積為縱坐標(biāo)Y，以供試溶液濃度(μg·mL-1)為橫坐標(biāo)X，進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果表明在該色譜條件下，甲醇、乙醇、乙腈在各自的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

表1 線性試驗(yàn)結(jié)果

3.3 定量限和檢測(cè)限

取2.2中混合對(duì)照品溶液用DMF逐級(jí)稀釋?zhuān)?.1色譜條測(cè)定，以S/N≈10作為定量限，甲醇、乙醇、乙腈的濃度分別為2.53、1.30、0.748 μg·mL-1；以S/N≈2～3作為檢測(cè)限，甲醇、乙醇、乙腈的濃度分別為1.26、0.65、0.374μg·mL-1。

3.4 精密度試驗(yàn)

取2.2中混合對(duì)照品溶液，按2.1色譜條件進(jìn)行測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。計(jì)算甲醇、乙醇、乙腈峰面積的RSD分別為5.07%，3.32%，4.65%，試驗(yàn)表明精密度良好。

3.5 回收率試驗(yàn)

按2.2供試品溶液配制方法，配制9份樣品溶液，精密移取對(duì)照品儲(chǔ)備液0.8、1.0、1.2 mL分別加入到供試品溶液中，制備低、中、高濃度的溶液各3份，按2.1色譜條件測(cè)定，記錄峰面積，每份溶液進(jìn)樣3針，求平均峰面積，根據(jù)峰面積計(jì)算回收率。測(cè)得甲醇的平均回收率為103.42%，RSD為0.94%；乙醇的平均回收率為100.90%，RSD為1.95%；乙腈的平均回收率為103.98%，RSD為0.51%。

3.6 溶液穩(wěn)定性

取2.2中混合對(duì)照品溶液，按2.1色譜條件進(jìn)行測(cè)定，間隔0、1、2、4、6、8 h，進(jìn)樣一次，考察各時(shí)間點(diǎn)甲醇、乙醇、乙腈的穩(wěn)定性，在8 h內(nèi)該溶液中甲醇、乙醇、乙腈濃度的RSD分別為2.28%、2.56%、2.60%，試驗(yàn)表明溶液穩(wěn)定。

3.7 樣品測(cè)定

按2.2中的方法配制三批樣品溶液，按2.1色譜條件進(jìn)行測(cè)定，每份樣品溶液測(cè)定3次，記錄色譜圖，計(jì)算樣品中各有機(jī)溶劑的含量。3批樣品中乙醇的含量分別為0.25%、0.26%、0.26%，甲醇和乙腈未檢出，結(jié)果符合規(guī)定。

4 討論

氣相色譜中常用的溶劑有水、乙醇、二甲基亞砜、DMF等，選用DMF做溶劑，可較好地溶解樣品。為了獲得較高的檢測(cè)靈敏度，所以配制了較高濃度的供試品溶液，1 g樣品在10 mL的DMF中能快速完全溶解。采用程序升溫，使3種有機(jī)溶劑達(dá)到完全分離的效果，而且縮短了分離的時(shí)間。

根據(jù)《中國(guó)藥典》2015版和ICH指導(dǎo)原則的規(guī)定，甲醇的殘留限度為0.37%、乙醇的殘留限度為0.5%、乙腈的殘留限度為0.041%，經(jīng)試驗(yàn)測(cè)定后自制的原料藥鹵米松中這3種有機(jī)溶劑殘留符合限度的規(guī)定，本方法經(jīng)過(guò)方法學(xué)考察各項(xiàng)均符合規(guī)定，該方法可用于鹵米松原料藥中甲醇、乙醇、乙腈有機(jī)溶劑殘留的檢測(cè)。