李苗，余陽(yáng)濤，馮光

(1.武漢藥品醫(yī)療器械檢驗(yàn)所，武漢 430075；2.湖北科技學(xué)院，咸寧 437100)

開(kāi)塞露常用于治療便秘、術(shù)后尿潴留等。常見(jiàn)的開(kāi)塞露有兩種制劑，一種是甘油制劑，另一種是甘露醇、硫酸鎂制劑。兩種制劑成分不同，但作用原理基本一樣，都是利用甘油或山梨醇高濃度的高滲作用，軟化大便，刺激腸壁，反射性引起排便反應(yīng)，再加上其具有潤(rùn)滑作用，能使大便容易排出。開(kāi)塞露中甘油含量測(cè)定的方法主要有滴定法、近紅外光譜法[1-3]、紫外-可見(jiàn)分光光度法[4]，但上述方法操作較繁瑣，且專(zhuān)屬性較差。筆者在本實(shí)驗(yàn)中建立了采用示差折光檢測(cè)器的高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定開(kāi)塞露中甘油的含量，方法準(zhǔn)確、專(zhuān)屬、快速，適用于含甘油開(kāi)塞露大通量樣品的質(zhì)量控制，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Agilent1260型高效液相色譜儀(配示差折光檢測(cè)器，美國(guó)安捷倫公司)；Mettler SX105電子分析天平(瑞士梅特勒-托利多儀器公司，感量：0.01 mg)；Millipore simplicity超純水機(jī)(美國(guó)密理博公司)。

1.2試藥 甘油對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：190057-201301，含量：99.5%)，開(kāi)塞露(市售樣品，規(guī)格：含甘油52.8%～58.3%，批號(hào)：160419，170403，160517)，氯化鈣二水合物(國(guó)藥集團(tuán)，分析純，批號(hào)：20170214)，水為純水機(jī)制超純水(18.2 mΩ)。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱：鈣型陽(yáng)離子交換柱[Rezex RCM-Monosaccharide Ca2+(8%)，300 mm×7.8 mm]；流動(dòng)相：0.1%氯化鈣二水合物溶液；流速：0.6 mL·min-1，柱溫：60 ℃；進(jìn)樣量：20 μL；檢測(cè)器：示差折光檢測(cè)器，溫度55 ℃。甘油色譜峰保留時(shí)間約17 min，理論板數(shù)按甘油峰計(jì)算不低于10 000。

2.2對(duì)照品溶液的制備 稱(chēng)取甘油對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加純化水溶解并稀釋制成0.5 mg·mL-1溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.3供試品溶液的制備 取開(kāi)塞露3支，將內(nèi)容物混勻，精密稱(chēng)取1 g，置100 mL量瓶，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品儲(chǔ)備溶液，精密量取5 mL，置50 mL量瓶，用水稀釋至刻度，制成0.5 mg·mL-1溶液，作為供試品溶液。

2.4陰性空白溶液的制備 取不含甘油的空白輔料，同法制備陰性空白溶液。陰性空白溶液在甘油峰保留時(shí)間處未檢出其他色譜峰，說(shuō)明空白輔料對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)干擾。色譜圖見(jiàn)圖1。

A.系統(tǒng)適用性溶液；B.陽(yáng)性空白；C.對(duì)照品；D.樣品；1.甘油；2.丙二醇；3.二甘醇。

圖1 甘油含量測(cè)定HPLC圖

A.system suitability solution;B.positive blank solution;C.reference substance;D.sample;1.glycerol;2.propylene glycol;3.diglycol.

Fig.1HPLCchromatogramsofglycerol

2.5專(zhuān)屬性實(shí)驗(yàn) 分別稱(chēng)取甘油、丙二醇、二甘醇對(duì)照品適量，用純化水溶解并稀釋制成0.5 mg·mL-1溶液，作為系統(tǒng)適用性溶液。照“2.1”項(xiàng)下方法測(cè)定，甘油、丙二醇、二甘醇色譜峰可完全分離。色譜圖見(jiàn)圖1。

2.6強(qiáng)制降解實(shí)驗(yàn) 取供試品儲(chǔ)備液5 mL各5份，分別置50 mL量瓶，①加0.1 mol·L-1鹽酸10 mL，放置30 min，0.1 mol·L-1氫氧化鈉溶液中和，水稀釋至刻度；②加0.1 mol·L-1氫氧化鈉溶液10 mL，放置30 min，0.1 mol·L-1鹽酸中和，水稀釋至刻度；③加入10%過(guò)氧化氫溶液0.5 mL，放置30 min，水稀釋至刻度；④水浴加熱30 min，水稀釋至刻度；⑤254 nm波長(zhǎng)下光照24 h，水稀釋至刻度。對(duì)5份溶液進(jìn)行測(cè)定，降解產(chǎn)物與甘油分離度均符合要求。見(jiàn)圖2。

2.7線性關(guān)系考察 稱(chēng)取對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，用純化水溶解并稀釋制成甘油含量0.03，0.08，0.3，1.6，2.8 mg·mL-1系列對(duì)照品溶液，分別精密進(jìn)樣20 μL，以甘油濃度(X)對(duì)相應(yīng)峰面積(Y)進(jìn)行回歸，結(jié)果甘油回歸方程為：Y= 2.37×106X+7.80×104，r=0.999 0。甘油在0.03～2.8 mg·mL-1范圍內(nèi)，濃度與峰面積之間具有較好的線性關(guān)系。

2.8精密度實(shí)驗(yàn) 取對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，以甘油峰面積計(jì)算得RSD為0.3%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.9定量限 取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，逐步稀釋?zhuān)M(jìn)樣測(cè)定。當(dāng)信噪比(S/N)為10時(shí)，甘油定量限為4.4 μg·mL-1。

2.10重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批樣品，按“2.3”項(xiàng)制備供試品溶液6份，依法測(cè)定，采用外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品中甘油含量，結(jié)果平均含量55.32%，RSD為1.6%。說(shuō)明該方法重復(fù)性良好。

A.酸破壞；B.堿破壞；C.氧化破壞；D.熱破壞；E.光破壞；1.甘油；2.丙醇。

A.acid destruction; B.alkali destruction; C.oxidation destruction; D.thermal destruction; E.light destruction；1.glycerol；2.propylene glycol.

Fig.2HPLCchromatogramsofcompulsorydestructiontests

2.11穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密量取供試品溶液20 μL，在2，4，8 h分別進(jìn)樣測(cè)定，甘油峰面積RSD為0.7%，結(jié)果表明供試品溶液8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.12加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取本品0.4 g，精密稱(chēng)定，置100 mL量瓶，分別精密加入甘油對(duì)照品適量，純化水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置50 mL量瓶，水稀釋制成高、中、低濃度甘油溶液各3份，分別進(jìn)樣20 μL，外標(biāo)法以峰面積計(jì)算回收率。結(jié)果甘油平均回收率99.37%，RSD為1.4%，見(jiàn)表1，表明該方法回收率良好。

表1 甘油加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Table.1Recoverytestofglyceroln=9

樣品取樣量甘油加入量甘油測(cè)得量g回收率/%0.389 30.258 90.474 998.520.439 30.269 30.512 698.200.388 20.274 40.493 499.910.423 20.326 10.566 6100.440.387 50.335 80.560 2101.640.436 50.354 60.593 297.770.380 00.403 00.618 7100.260.449 20.416 70.663 998.440.409 60.387 00.615 399.22

2.13樣品測(cè)定 精密量取供試品溶液及對(duì)照品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算甘油含量，結(jié)果見(jiàn)表2。經(jīng)t檢驗(yàn)，兩種方法測(cè)定結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表2 3批樣品中甘油含量測(cè)定結(jié)果

Table.2Resultsofthedeterminationonthreebatchesofsamples%

批號(hào)HPLC法含量滴定法含量16041956.556.917040355.755.216051756.755.8

3 討論

3.1色譜柱選擇 筆者在本實(shí)驗(yàn)中以專(zhuān)屬性強(qiáng)的鈣型陽(yáng)離子交換柱為色譜柱，可將甘油與結(jié)構(gòu)類(lèi)似物丙二醇、二甘醇等完全分離，故最終選擇鈣型陽(yáng)離子交換柱為本實(shí)驗(yàn)的色譜柱。

3.2檢測(cè)器選擇 筆者在本實(shí)驗(yàn)采用示差折光檢測(cè)器進(jìn)行甘油的檢測(cè)。由于甘油基本無(wú)紫外吸收，不適合常規(guī)紫外檢測(cè)器測(cè)定；示差折光檢測(cè)器為通用型檢測(cè)器，可以對(duì)甘油進(jìn)行有效檢測(cè)，故選擇示差檢測(cè)器為本實(shí)驗(yàn)色譜系統(tǒng)的檢測(cè)器。

3.3流動(dòng)相選擇 筆者在本實(shí)驗(yàn)中分別考察不同濃度氯化鈣溶液對(duì)分離效果的影響。結(jié)果表明，氯化鈣溶液濃度越高，甘油保留時(shí)間越長(zhǎng)，與其他色譜峰分離度越大。綜合考慮分離度與保留時(shí)間，筆者在本實(shí)驗(yàn)中采用0.1%氯化鈣溶液作為流動(dòng)相。

3.4結(jié)果 現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)采用容量法測(cè)定開(kāi)塞露中甘油含量，而現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道方法主要有電位滴定法、分光光度法、近紅外光譜法等[5-7]。筆者在本實(shí)驗(yàn)中采用HPLC法測(cè)定開(kāi)塞露中甘油含量，專(zhuān)屬性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)便，重復(fù)性好。可用于開(kāi)塞露中甘油含量的大通量檢測(cè)，還可以在藥品安全監(jiān)管工作中進(jìn)行藥品中可能存在非法添加二甘醇情況的風(fēng)險(xiǎn)篩查，避免二甘醇非法替代甘油使用導(dǎo)致的藥害事件發(fā)生。