安小紅,樊 萍

(1.渭南市蒲城縣醫(yī)院檢驗(yàn)科，陜西渭南 715500；2.咸陽市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，陜西咸陽 712000)

男性不育被定義為一對(duì)夫婦在無保護(hù)、有規(guī)律的性生活一年后無法懷孕。據(jù)統(tǒng)計(jì)全球大約有10%～15%的夫婦患有不孕不育，而男性不育的發(fā)生率約占50%[1]。研究表明，機(jī)體氧化應(yīng)激作用的增強(qiáng)是導(dǎo)致男性不育的重要原因之一[2]。目前的證據(jù)表明谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶(glutathioneS-transferases,GSTs)和8-羥基脫氧鳥苷(8-hydroxydeoxyguanosine, 8-OHdG)通過調(diào)節(jié)機(jī)體的氧化應(yīng)激能力參與男性不育的病理過程[1,3]。本研究通過分析35例不育男性患者精漿8-OHdG和GSTs水平的變化，旨在揭示兩指標(biāo)在男性不育發(fā)病機(jī)制中的作用，進(jìn)而為該疾病的診治提供參考依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象 收集2017年5月～2019年5月期間在陜西咸陽市第一人民醫(yī)院和渭南市蒲城縣醫(yī)院就診的35例不育男性患者(不育組)的精液標(biāo)本進(jìn)行分析。年齡為26～45歲,平均年齡32.15±5.07歲；婚齡1～10年，平均婚齡4.39±3.28年。其中少精癥患者 11例，弱精癥患者21例，無精癥患者3例。所有患者夫妻性生活正常、未采取避孕措施、身體健康、排除女方因素(經(jīng)婦科檢查、輸卵管通暢試驗(yàn)、B超及內(nèi)分泌檢查等)。收集同期婚后已生育的26例健康男性精液標(biāo)本作為對(duì)照組，年齡30.87±6.19歲,平均31.37±5.19歲;婚齡1～9年，平均婚齡4.12±3.39年。對(duì)照組精液質(zhì)量分析正常。所有受試者均排除泌尿、生殖、造血系統(tǒng)及內(nèi)分泌疾病，以及其他慢性疾病、隱睪癥、性功能低下、放療和化療等。不育組和對(duì)照組的年齡和婚齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。樣本的采集過程及信息使用均經(jīng)過陜西咸陽市第一人民醫(yī)院和蒲城縣醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。本研究已得到所有研究對(duì)象的知情同意。

1.2 試劑和儀器 采用計(jì)算機(jī)輔助精液分析系統(tǒng)(偉力CASA 900)分析精子密度和精子活動(dòng)力，采用巴氏染色法分析精子形態(tài)，參照 WHO 標(biāo)準(zhǔn)評(píng)判結(jié)果，計(jì)算精子畸形率。精漿8-OHdG和GSTs水平采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定，分別采用武漢艾美捷科技有限公司和上海將來實(shí)業(yè)股份有限公司的試劑盒,儀器采用雷杜 RT-2100C 酶標(biāo)自動(dòng)分析儀。參考范圍(男性)：血清睪酮(testosterone，T)：13.90～29.23 nmol/ml，卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone，F(xiàn)SH)：1.50 ～12.40mIu/ml，黃 體 生 成 素(luteinizing hormone，LH)：1.70～8.60 mIu/ml.

1.3 方法

1.3.1 精液質(zhì)量分析：患者禁欲3～7天，手淫方法收集精液標(biāo)本，記錄精液總量。在37 ℃待精液液化后，分析精子密度、精子活動(dòng)力及精子畸形率。所有精液實(shí)驗(yàn)按照 2001 年 WHO《人類精液及精子-宮頸黏液相互作用實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)手冊(cè)》中的檢驗(yàn)方法執(zhí)行。精子活動(dòng)力分4級(jí)：a 級(jí)：精子快速前向運(yùn)動(dòng)；b 級(jí)：精子慢速或呆滯的前向運(yùn)動(dòng)；c 級(jí)：精子非前向運(yùn)動(dòng)；D 級(jí)：精子不動(dòng)。精子密度<20×106/ml,或精子密度>20×106/ml，而a級(jí)精子<25%，且a+b級(jí)精子<50%為少弱精癥。

1.3.2 血樣采集：所有研究對(duì)象在安靜狀態(tài)下空腹被抽取靜脈血 3 ml，分離血清，-20℃保存，用于檢測(cè)血清T,FSH及LH水平.

2 結(jié)果

2.1 男性不育患者精液質(zhì)量分析 見表1。與對(duì)照組比較，不育組的精子密度和精子活力顯著降低，而精子畸形率則顯著增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)。不育組和對(duì)照組的精液總量比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2 男性不育患者血清生殖激素水平分析 見表2。與對(duì)照組比較，不育組的血清T水平顯著降低，而FSH及LH水平則顯著增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)。

2.3 男性不育患者精漿8-OHdG及GSTs水平分析 見表2。與對(duì)照組比較，不育組精漿8-OHdG水平顯著增高，而GSTs水平則顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)。

表1 男性不育患者精液質(zhì)量分析

表2 男性不育患者血清生殖激素及精漿8-OHdG和GSTs水平分析

2.4 相關(guān)性分析 精漿8-OHdG水平與精子密度、精子活力和血清T水平呈負(fù)相關(guān)性，而與精子畸形率、血清FSH及LH水平呈正相關(guān)性(r=-0.823，-0.819，-0.798，0.767，0.782，0.807，均P< 0.01).精漿GSTs水平與精子密度、精子活力和T水平有正相關(guān)性，而與精子畸形率、血清FSH及LH水平呈負(fù)相關(guān)性(r=0.857，0.842，0.819，-0.838，-0.802，-0.814，均P< 0.01)。

3 討論

研究表明少弱精子癥是男性不育的常見原因，其特點(diǎn)是精子數(shù)量少或精子運(yùn)動(dòng)能力差?，F(xiàn)在的證據(jù)表明，氧化應(yīng)激在精子正常的生理活動(dòng)中起著重要作用[2]。氧化應(yīng)激作用增強(qiáng)會(huì)導(dǎo)致DNA損傷、精子運(yùn)動(dòng)能力減弱及精子畸形等[3-4]。研究認(rèn)為8-OHdG水平的變化能夠反映機(jī)體的氧化應(yīng)激反應(yīng)及氧自由基的生成程度[5]。8-OHdG被認(rèn)為是DNA氧化損傷的標(biāo)志物。精漿中8-OHdG水平增高可以影響精子的運(yùn)動(dòng)，并可能導(dǎo)致畸形精子數(shù)量的增加[3]。研究顯示8-OHdG可破壞精子質(zhì)膜的完整性，影響精子的生成。8-OHdG水平增高的患者少弱精子癥的發(fā)病率明顯增高。8-OHdG 水平與精子畸形率呈正相關(guān)性，而與精子活動(dòng)力有負(fù)相關(guān)性[5]。本研究的結(jié)果也印證了上述文獻(xiàn)關(guān)于8-OHdG的報(bào)道。說明8-OHdG在評(píng)估男性精子質(zhì)量方面有較高的價(jià)值。劉旭晨等[6]分析111例不育男性精液標(biāo)本的結(jié)果顯示，高水平的8-OHdG與精子碎片率的增高及精子濃度的下降相關(guān)。本研究的結(jié)果與劉旭晨等[6]的觀點(diǎn)相符。提示8-OHdG可能與男性不孕的病理過程密切相關(guān)。目前國內(nèi)關(guān)于 8-OHdG 與男性不育相關(guān)性的報(bào)道較少，其在男性不育發(fā)病機(jī)制中的作用還需要進(jìn)一步地探索。

GSTs是一種重要的抗氧化酶。低水平的GSTs可能促進(jìn)氧化應(yīng)激對(duì)機(jī)體的傷害作用。然而，關(guān)于GSTs在男性精子防御機(jī)制中的生物學(xué)作用的數(shù)據(jù)還有限[7-8]。研究表明，人類睪丸和精漿中存在高水平的GSTs，這有助于保護(hù)精子免受氧化應(yīng)激的損傷。HU等[1]的分析顯示在非阻塞性無精子癥和少弱精子癥的中國人群中，GSTs基因多態(tài)性與男性不育顯著相關(guān)，其中GSTM1/GSTT1的無效基因型可能增加中國男性不育個(gè)體的敏感性。金鑫等[7]研究認(rèn)為精漿GSTs水平與精子活動(dòng)力有正相關(guān)性，而與精子畸形率有負(fù)相關(guān)性。這與本研究結(jié)果一致。推測(cè)男性不育機(jī)制可能與精漿中GSTs 水平降低有關(guān)。

近年來的研究認(rèn)為，生殖激素可以促進(jìn)男性精子的生成。FSH及LH水平增高和T水平下降與生精功能的損害程度有正相關(guān)性[9]。本研究分析顯示精漿8-OHdG水平與血清T水平有負(fù)相關(guān)性，而與FSH及LH水平有正相關(guān)性。GSTs水平與血清T水平有正相關(guān)性，而與FSH及LH水平有負(fù)相關(guān)性，推測(cè)異常的8-OHdG和GSTs水平可能影響精子的生成，進(jìn)而導(dǎo)致男性不育。

綜上所述，8-OHdG和GSTs可能參與男性不育的病理過程。檢測(cè)精漿8-OHdG和GSTs水平可以為男性不育的診治提供依據(jù)。