程再興

摘 要：目的 研究西洋參水提物對小鼠免疫力的影響。方法 以小鼠為實驗對象，研究西洋參水提物對ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化實驗、小鼠血清溶血素測定、NK細胞活性測定以及臟器/體重比值等試驗的影響。結果 與陰性對照組比較，西洋參水提物中、高劑量組（0.2g/kg.BW、0.6g/kg.BW）能提高ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞增殖能力、提高小鼠NK細胞活性，西洋參水提物高劑量組（0.6g/kg.BW）能提高小鼠抗體積數，差異均具有統計學意義。結論 ?西洋參水提物具有增強小鼠免疫力的作用。

關鍵詞：西洋參水提物;小鼠;免疫力

西洋參為五加科植物西洋參Panax quinque folium L.的干燥根，甘、微苦、涼，歸心、肺、腎經，具有補氣養(yǎng)陰、清熱生津等功效，用于氣虛陰虧、虛熱煩倦、咳喘痰血、內熱消渴、口燥咽干等。西洋參為貴重藥材，主要含有皂苷類、揮發(fā)油類、氨基酸類、糖和多糖類等成分，具有廣泛的生物活性和獨特的藥理作用，具有抗腫瘤、保護心血管系統、提高機體免疫功能、調節(jié)代謝、抗缺氧等藥理作用[1]。本實驗研究了西洋參水提物粉末對小鼠免疫力的作用。

一、材料與方法

（一）樣品制備

西洋參飲片加水8倍量，提取3次，每次1.5h，收集提取液，濾過，濃縮至相對密度為1.05～1.08（70℃），噴霧干燥，得西洋參水提物粉末（每克粉末相當于生藥量2.60g）。

（二）受試動物

SPF級雄性Ba1b/c小鼠，體重18～22g[北京維通利華實驗動物技術有限公司，許可證號：SCXK（京）2016-0006]。動物飼料由成都達碩實驗動物有限公司提供，飲水為純化水，整個實驗期間動物自由攝食和飲水，動物房溫度20～26℃，相對濕度40%～70%。

（三）主要試劑與儀器

刀豆蛋白A（ConA）、MTT、綿陽紅細胞（SRBC）、YAC-1細胞、LDH基質液、T-1000電子天平、7100全自動生化分析儀、二氧化碳培養(yǎng)箱、多功能酶標儀等。

（四）方法

1.實驗分組及周期

實驗動物共分為4個測定組，每個測定組均分別包括陰性對照組和受試物三個劑量組，每組10只動物。根據人體推薦西洋參水提物粉末劑量為1.2g（60kg.d）（相當于生藥量3.12g），動物給藥劑量分別按人體推薦劑量的5倍、10倍、30倍設計低劑量組（0.1g/kg.BW）、中劑量組（0.2g/kg.BW）、高劑量組（0.6g/kg.BW）。所有測定組經口（灌胃）給予不同劑量的樣品，灌胃量均為20mL/kg.BW，每天一次，連續(xù)灌胃30d;陰性對照組給予同等容積的純化水。

2.脾淋巴細胞轉化實驗（MTT法）[2]

實驗30d后，頸椎脫臼處死動物，無菌取脾臟，撕碎，200目篩網過濾，用Hanks液洗滌3次，用完全1640培養(yǎng)液配成3×106個/mL細胞懸液。將每份脾細胞懸液加入24孔培養(yǎng)板，1mL/孔，2孔/份樣品，一孔加75μLConA液（相當于7.5μg/mL），一孔作為對照，置CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)68h后，取出培養(yǎng)板，每孔輕輕吸取0.7mL上清液，加入0.7mL不含小牛血清的1640培養(yǎng)液及50μLMTT液（5mg/mL），繼續(xù)培養(yǎng)4h。取出培養(yǎng)板，每孔加入1mL酸性異丙醇，吹打使紫色結晶完全溶解。將溶解液移入2mL比色杯，在570nm波長測定OD值，以加ConA孔OD值減去未加ConA孔OD值代表淋巴細胞的增殖能力，受試劑量組的光密度差值顯著高于陰性對照組的光密度差值，判為該項實驗結果陽性。

3.小鼠血清溶血素的測定[2]

在試驗第25天，每只小鼠腹腔注射0.2mL2%（V/V）綿陽紅細胞（SRBC）懸液，進行免疫。5d后，取血離心，收集血清，用生理鹽水將血清倍比稀釋，37℃3h后觀察結果，記錄凝聚程度，計算抗體積數。

4.NK細胞活性測定[2]

處死動物，取脾臟以制備單細胞懸浮液，離心，滅菌水加入細胞漿用于裂解紅細胞，加Hanks液，離心，培養(yǎng)液調整細胞濃度。96孔培養(yǎng)板中加入脾細胞和YAC-1細胞，加培養(yǎng)液和YAC-1細胞的為YAC-1細胞自然釋放孔，加2.5%Triton和YAC-1細胞的為YAC-1細胞最大釋放孔，經4 h培養(yǎng)，離心，平底96孔培養(yǎng)板中加入上清液及LDH基質液，10 min后再加1 mol/L的HCl，在波長490 nm處酶標儀測定光密度。如劑量組NK細胞活性顯著高于陰性對照組，視為陽性試驗結果。

（五）臟器/體重比值測定

處死動物，取其胸腺及脾臟，稱重，計算胸腺/體重和脾臟/體重比值。

（六）數據統計

數據分析使用 SPSS10.0 軟件，P<0.05為差異有統計學意義。

二、結果

（一）淋巴細胞增殖能力

西洋參水提物對ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞增殖能力的影響，見表1。西洋參水提物中、高劑量組與陰性對照組比較，均能顯著提高脾淋巴細胞的增殖能力（P<0.05）。

（二）血清溶血素

西洋參水提物對小鼠血清溶血素的影響，見表2。西洋參水提物中、高劑量組與陰性對照組比較，均能顯著提高小鼠血清溶血素抗體積水平（P<0.05）。

（三）NK細胞活性

西洋參水提物對小鼠NK細胞活性的影響，見表3。西洋參水提物低、中劑量組與陰性對照組比較，其NK細胞活性率無顯著差異（P>0.05）;高劑量組與陰性對照組相比，其NK細胞活性率顯著增加（P<0.05）。

（四）臟器/比重比值

三個劑量組小鼠胸腺/體重比值及脾臟/體重比值和陰性對照組比較，均無顯著差異（P>0.05）。

三、討論

對小鼠免疫力研究結果顯示，西洋參水提物中、高劑量組能提高ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞增殖能力、提高小鼠NK細胞活性，差異均具有統計學意義;西洋參水提物高劑量組能提高小鼠抗體積數。實驗證明，西洋參具有增強小鼠免疫力的作用。

參考文獻

[1] 王蕾，王英平，許世泉，等.西洋參化學成分及藥理活性研究進展[J].特產研究，2017（3）：73-77.

[2] 衛(wèi)生部衛(wèi)生法制與監(jiān)督司.保健食品檢驗與評價技術規(guī)范[S].北京：人民衛(wèi)生出版社，2003：22-34.