李治芳 溫奎申 趙建軍 雍婧姣 高曉娟 王漢卿 張霞

摘要 [目的]比較不同干燥方法對(duì)沙棘提取物水分及活性成分含量的影響，指導(dǎo)沙棘提取物生產(chǎn)實(shí)踐。[方法]分別采用烘干法、紫外分光光度法、高效液相色譜法測(cè)定不同干燥方法沙棘提取物中水分、總黃酮、異鼠李素-3-O蕓香糖苷含量。[結(jié)果]冷凍干燥提取物中水分含量最低，總黃酮和異鼠李素-3-O蕓香糖苷含量最高。[結(jié)論]干燥方法對(duì)沙棘提取物的含水量、活性成分含量產(chǎn)生一定程度影響，該研究結(jié)果為沙棘提取物的進(jìn)一步研究和利用提供了試驗(yàn)依據(jù)。

關(guān)鍵詞沙棘提取物;干燥方法;水分;總黃酮;異鼠李素-3-O蕓香糖苷;活性成分

中圖分類號(hào)R282.4文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2020）04-0175-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2020.04.050

開(kāi)放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Effects of Different Drying Methods on the Content of Active Ingredients in the Extracts of Hippophae rhamnoides L.

LI Zhi-fang1，2， WEN Kui-shen1，ZHAO Jian-jun1，2，3 et al

（1. Schoole of Pharmacy，Ningxia Medical University，Yinchuan，Ningxia 750004;2. Ningxia Research Center of Modern Hui Medicine Engineering and Technology，Yinchuan， Ningxia 750004;3. Key Laboratory of Hui Ethnic Medicine Modernization， Ministry of Education，Ningxia Medical University，Yinchuan， Ningxia 750004）

Abstract[Objective]To compare the content of water and bioactive component under different drying methods in the extracts of Hippophae rhamnoides.[Method]Using separately hot air drying method， UV， HPLC to determine the content of water， total flavonoids and isorhamL-3-o rutin by different drying methods of vacuum freeze drying， low-temperature oven drying and high-temperature oven drying in the extracts of Hippophae rhamnoides. [Result]The water content was the lowest，the contents of total flavonoids and isorhamnetin-3-O rutin were the highest in freeze-drying method than the other two.[Conclusion]The drying method has a certain effect on the water content and active ingredient content of Hippophae rhamnoides extract. The results of this study provide experimental basis for further research and utilization of Hippophae rhamnoides extract.

Key wordsExtracts of Hippophae rhamnoides L.;Drying methods;Water;Total flavonoids;Isorhamnetin-3-O rutin;Active ingredients

沙棘為胡頹子科植物沙棘（Hippophae rhamnoides L.）的干燥成熟果實(shí)，蒙古族、藏族習(xí)用藥材，具有健脾消食、止咳祛痰、活血散瘀的功效，用于治療脾虛食少、食積腹痛、咳嗽痰多、胸痹心痛、瘀血經(jīng)閉、跌撲瘀腫等癥[1]，是國(guó)家衛(wèi)健委公布的藥食同源中藥。沙棘富含多種化學(xué)成分，包括黃酮類、糖類、維生素類、甾醇類、類胡蘿卜素類、揮發(fā)油類及微量元素等[2-4]。黃酮類化合物為其重要的活性物質(zhì)，主要包括槲皮素、異鼠李素、楊梅素、山奈酚等黃酮苷元及其苷類，在治療心臟疾病、高血壓、高血脂、高血糖、腫瘤等方面具有良好的作用[5-7]。

中藥提取物的干燥過(guò)程是其制備過(guò)程的重要環(huán)節(jié)，不同的干燥方法對(duì)提取物中指標(biāo)成分有不同程度的影響[8-9]。筆者以沙棘總黃酮、異鼠李素-3-O蕓香糖苷為指標(biāo)成分，分析不同干燥方法對(duì)沙棘提取物中活性成分的影響，為優(yōu)化沙棘提取物的干燥工藝提供試驗(yàn)依據(jù)，也為其進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供參考。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1儀器。LC-20A高效液相色譜儀（島津公司）;UV-2450紫外分光光度計(jì)（島津公司）;EL 204電子分析天平（梅特勒-托利多）;Biosafer-12A 冷凍干燥機(jī)（賽飛（中國(guó)）有限公司）;WFO-700W送風(fēng)式定溫干燥箱（上海愛(ài)朗儀器（東京理化器械））;Wi17896超聲波中藥提取器（東西儀（北京）科技有限公司）;R-1050CE旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）

1.1.2試材。沙棘，購(gòu)自寧夏隆德縣美隆飲料制品有限公司，經(jīng)寧夏醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院王漢卿副教授鑒定為沙棘（Hippophae rhamnoides L.）的干燥成熟果實(shí)，按《中國(guó)藥典》2015年版一部沙棘項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)，結(jié)果符合規(guī)定。

1.1.3試劑。對(duì)照品蘆?。ㄅ?hào)16111111，純度98.0%），購(gòu)自上海雅吉生物科技有限公司;對(duì)照品異鼠李素-3-O蕓香糖苷（批號(hào)604-80-8，純度98.0%），購(gòu)自成都埃法生物科技有限公司;乙腈（色譜純，F(xiàn)isher公司）;高效液相分析用水為娃哈哈純凈水;其他試劑均為分析純。

1.2方法

1.2.1

提取物的制備。取5 kg沙棘干果，置超聲波中藥提取器中，加入30 L 60%乙醇（固液比1∶6），提取溫度為60 ℃，超聲提取3次，每次1 h，合并提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至相對(duì)密度為1.28～1.31的稠膏（80 ℃）。

1.2.2

干燥處理。將相同質(zhì)量的沙棘提取物稠膏分別按不同的方法干燥，粉碎后過(guò)篩（過(guò)3號(hào)篩），進(jìn)行測(cè)定。比較不同干燥方法對(duì)其含水量及活性成分含量的影響。

1.2.2.1

冷凍干燥。稱取沙棘提取物稠膏200 g，在 -80 ℃ 預(yù)凍24 h，然后進(jìn)行冷凍干燥。凍干條件：阱溫度-40 ℃，真空度0.025 MPa，干燥時(shí)間48 h。

1.2.2.2

低溫?zé)犸L(fēng)干燥。稱取沙棘提取物稠膏200 g，平鋪于白瓷盤(pán)中，鼓風(fēng)干燥箱中干燥。干燥條件為60 ℃、36 h。

1.2.2.3

高溫?zé)犸L(fēng)干燥。稱取沙棘提取物稠膏200 g，平鋪于白瓷盤(pán)中，鼓風(fēng)干燥箱中干燥。干燥條件為80 ℃、18 h。

1.2.3

水分的測(cè)定。按照《中國(guó)藥典》2015年版第四部0832水分測(cè)定法之烘干法（第二法）測(cè)定。分別精密稱取不同方法干燥的干膏粉2 g，依法操作，每個(gè)樣品平行測(cè)定3份。

1.2.4

總黃酮含量的測(cè)定。

1.2.4.1

對(duì)照品溶液的制備。精密稱定蘆丁對(duì)照品19.20 mg，置50 mL容量瓶中，加60%乙醇適量，置水浴上微熱使溶解，放冷，加60%乙醇至刻度，搖勻，即得每1 mL含蘆丁0.384 mg的對(duì)照品溶液。

1.2.4.2

標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。精密量取對(duì)照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分別置25 mL容量瓶中，各加30%乙醇至6.0 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，混勻，放置6 min，再加10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min。加氫氧化鈉試液10 mL，再加30%乙醇至刻度，搖勻，放置15 min，以相應(yīng)試劑為空白，按照紫外可見(jiàn)分光光度法，在500 mn的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度（Y）為縱坐標(biāo)、對(duì)照品溶液濃度（X）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.4.3

供試品溶液的制備。取不同干燥方法制得的干浸膏粉約0.1 g，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中，精密加入60%乙醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用60%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，續(xù)濾液作為供試品溶液。

精密量取續(xù)濾液5 mL，置25 mL容量瓶中，加30%乙醇至6.0 mL，按照“1.2.4.2”方法，自“加5%亞硝酸鈉溶液1 mL”起，依法測(cè)定吸光度，同時(shí)取供試品溶液5 mL，除不加氫氧化鈉試液外，其余同“1.2.4.2”操作，得到的溶液作為空白，通過(guò)回歸方程計(jì)算出供試品中總黃酮的量（以蘆丁計(jì)）。

1.2.4.4

精密度試驗(yàn)。取同一對(duì)照品溶液，按照“1.2.4.1”方法顯色后，測(cè)定吸光度6次，并計(jì)算RSD。

1.2.4.5

重復(fù)性試驗(yàn)。精密稱取冷凍干燥的沙棘提取物干浸膏粉6份，各約0.1 g，按照“1.2.4.3”方法測(cè)定，并計(jì)算總黃酮含量的RSD。

1.2.4.6

穩(wěn)定性試驗(yàn)。精密量取供試品溶液和對(duì)照品溶液各5 mL，按照“1.2.4.3”方法顯色，放置15 min后，分別在30 min內(nèi)每隔5 min在500 nm波長(zhǎng)處測(cè)定，計(jì)算30 min內(nèi)吸光度的RSD。

1.2.4.7

加樣回收率試驗(yàn)。取冷凍干燥的沙棘提取物干浸膏粉6份，各約0.1 g，精密稱定。精密稱定蘆丁對(duì)照品25.20 mg，置10 mL容量瓶中，加60%乙醇適量，置水浴上微熱使溶解，放冷，加60%乙醇至刻度，搖勻，即得每1 mL含蘆丁2.52 mg的對(duì)照品溶液。分別精密量取對(duì)照品溶液1 mL，加入所稱樣品中，即各加入蘆丁對(duì)照品2.52 mg，平行制備供試品溶液，按照“1.2.4.3”方法測(cè)定，計(jì)算回收率。

1.2.4.8不同干燥方法沙棘提取物中總黃酮含量?？傸S酮含量按下式計(jì)算：

總黃酮含量（mg/g）=（Y+0.003）×25×250.011×m×5×1 000（1）

其中，Y為吸光度;m為稱取的樣品質(zhì)量（g）。

1.2.5異鼠李素-3-O蕓香糖苷含量的測(cè)定。

1.2.5.1

色譜條件。采用Agilent Eclipse Plus C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）;流動(dòng)相A為乙腈，B為1%磷酸溶液，梯度洗脫：0～6 min，5%～15%A;6～15 min，15% ～20%A;15～20 min，20%～25%A;20～30 min，25%～40%A;30～35 min，40%～50%A;35～39 min，50%～70%A;39～39.5 min，70%～5%A;39.5～45.0 min，5%～5%A;流速1.0 mL/min;柱溫30 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng)380 nm，進(jìn)樣量20 μL。

1.2.5.2

對(duì)照品溶液的制備。精密稱取異鼠李素-3-O蕓香糖苷對(duì)照品14.10 mg，置50 mL容量瓶中，加60%乙醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得每1 mL含異鼠李素-3-O蕓香糖苷0.282 mg的對(duì)照品溶液。

1.2.5.3

供試品溶液的制備。取不同干燥方法制得的干浸膏粉約0.2 g，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中，精密加入60%乙醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用60%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

1.2.5.4

標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。分別精密量取0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL，置10 mL容量瓶中，加60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得不同濃度的對(duì)照品溶液。在“1.2.5.1”色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，以對(duì)照品溶液濃度（X）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸。

1.2.5.5

精密度試驗(yàn)。取同一對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定異鼠李素-3-O蕓香糖苷峰面積的RSD。

1.2.5.6

重復(fù)性試驗(yàn)。精密稱取冷凍干燥的沙棘提取物干浸膏粉6份，按照“1.2.5.3”方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算含量的RSD。

1.2.5.7

穩(wěn)定性試驗(yàn)。取同一供試品溶液，室溫下放置，分別在0、1、2、4、6、8 h測(cè)定峰面積，并計(jì)算峰面積的RSD。

1.2.5.8

加樣回收率試驗(yàn)。取冷凍干燥的沙棘提取物干浸膏粉6份，各約0.2 g，精密稱定。各加入異鼠李素-3-O蕓香糖苷對(duì)照品1.15 mg，平行制備供試品溶液，按照“1.2.5.1”條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率和RSD。

1.2.5.9不同干燥方法沙棘提取物中異鼠李素-3-O蕓香糖苷含量。異鼠李素-3-O蕓香糖苷含量按下式計(jì)算：

含量（mg/g）=（Y+83 081）×2559 085×m×1 000（2）

其中，Y為峰面積;m為稱取的樣品質(zhì)量（g）。

2結(jié)果與分析

2.1不同干燥方法沙棘提取物水分含量

經(jīng)分析，高溫烘干沙棘提取物水分含量（2.8%）略低于低溫烘干的（3.1%），而冷凍干燥沙棘提取物水分含量（1.0%）明顯低于前二者。冷凍干燥是將含水物質(zhì)先凍結(jié)成固態(tài)后，再使其中的水分升華成氣態(tài)而除去水分的方法，干燥后的物質(zhì)成多孔的海綿狀，體積、性狀基本不變，水分不會(huì)被包裹，因此能使水分除去更完全。

2.2不同干燥方法沙棘提取物中總黃酮含量

2.2.1

線性關(guān)系考察。以吸光度（Y）為縱坐標(biāo)、對(duì)照品溶液濃度（X）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1），進(jìn)行線性回歸，得出回歸方程為Y = 0.011 6X-0.003 8（R2= 0.999 7），表明總黃酮在7.68～76.80 μg/mL有良好的線性關(guān)系。

2.2.2精密度試驗(yàn)。按“1.2.4.4”方法操作，測(cè)定吸光度6次，RSD為0.25%，表明在此試驗(yàn)條件下精密度良好。

2.2.3重復(fù)性試驗(yàn)。按“1.2.4.5”方法操作，計(jì)算得總黃酮含量的RSD為1.7%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.4

穩(wěn)定性試驗(yàn)。按“1.2.4.6”方法操作，計(jì)算得出30 min內(nèi)吸光度的RSD為0.86%（n=7），表明顯色放置15 min 后的溶液在30 min內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.5加樣回收率試驗(yàn)。按“1.2.4.7”方法操作，計(jì)算得出回收率為93.1%，RSD 為2.4%，表明該方法準(zhǔn)確、可靠，可用于沙棘提取物中總黃酮的含量測(cè)定。

2.2.6不同干燥方法沙棘提取物中總黃酮含量。試驗(yàn)結(jié)果表明，干燥方式影響沙棘提取物中總黃酮含量;干燥過(guò)程中溫度越高，總黃酮損失越多。冷凍干燥提取物中總黃酮含量最高（47.35 mg/g），低溫烘干的次之（29.04 mg/g），而高溫烘干的最低（23.37 mg/g）。提取物熱烘干過(guò)程中需要經(jīng)過(guò)60 ℃或80 ℃的持續(xù)加熱，可能會(huì)造成黃酮類成分損失。

2.3不同干燥方法沙棘提取物中異鼠李素-3-O蕓香糖苷含量

2.3.1線性關(guān)系考察。以對(duì)照品溶液濃度（X）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖2），進(jìn)行線性回歸，得出回歸方程為Y =59 085X - 83 081（R2= 0.998 3），表明異鼠李素-3-O蕓香糖苷在2.82～70.50 μg/mL有良好的線性關(guān)系。

2.3.2精密度試驗(yàn)。按“1.2.5.5”方法操作，測(cè)得異鼠李素-3-O蕓香糖苷峰面積的RSD為0.42%（n = 6），表明在此試驗(yàn)條件下精密度良好。

2.3.3重復(fù)性試驗(yàn)。按“1.2.5.6”方法操作，計(jì)算得出異鼠李素-3-O蕓香糖苷含量的RSD為2.0%（n = 6），表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.4穩(wěn)定性試驗(yàn)。按“1.2.5.7”方法操作，計(jì)算得出異鼠李素-3-O蕓香糖苷峰面積的RSD為1.8%（n = 6），表明異鼠李素-3-O蕓香糖苷在8 h內(nèi)比較穩(wěn)定。

2.3.5加樣回收率試驗(yàn)。按“1.2.5.8”方法操作，計(jì)算得出回收率為93.1%，RSD 為3.2%，表明該方法準(zhǔn)確、可靠，可用于沙棘提取物中異鼠李素-3-O蕓香糖苷的含量測(cè)定。

2.3.6不同干燥方法沙棘提取物中異鼠李素-3-O蕓香糖苷含量。試驗(yàn)結(jié)果表明，干燥方式對(duì)沙棘提取物中異鼠李素-3-O蕓香糖苷含量略有影響。冷凍干燥中異鼠李素-3-O蕓香糖苷含量最高（4.86 mg/g），低溫烘干的次之（4.65 mg/g），而高溫烘干的最低（4.41 mg/g）。

3討論與結(jié)論

干燥是中藥生產(chǎn)中的重要環(huán)節(jié)，中藥在干燥過(guò)程中，除有物料間的混合和物理蒸發(fā)外，還有藥物各成分間的相互作用，可能發(fā)生氧化、還原、聚合、水解、異構(gòu)化等化學(xué)反應(yīng)，從而引起物料物理穩(wěn)定性、化學(xué)穩(wěn)定性及生物穩(wěn)定性的改變，進(jìn)而對(duì)中藥的內(nèi)在質(zhì)量與后續(xù)的臨床療效產(chǎn)生不同程度的影響[10]。

該試驗(yàn)以沙棘提取物中總黃酮及其主要黃酮苷類成分異鼠李素-3-O蕓香糖苷為評(píng)價(jià)指標(biāo)，分析不同干燥方法對(duì)沙棘提取物的影響，結(jié)果表明，冷凍干燥法所得沙棘提取物水分含量明顯低于烘干法。原因可能是冷凍干燥過(guò)程中物質(zhì)先凍結(jié)成固態(tài)后，其中的水分直接升華成氣態(tài)而除去，干燥后的物質(zhì)成多孔的海綿狀，水分不會(huì)被包裹，能使水分除去更完全。物料含水量較低，不易返潮結(jié)塊，有利于長(zhǎng)期保存。

干燥溫度對(duì)沙棘提取物中活性成分含量有顯著影響，試驗(yàn)結(jié)果表明，冷凍干燥沙棘提取物中總黃酮含量遠(yuǎn)高于低溫和高溫烘干者。黃酮類物質(zhì)含有大量酚羥基，容易被氧化，而冷凍干燥可以阻止氧化過(guò)程。冷凍干燥不經(jīng)過(guò)加熱過(guò)程，有利于保持提取物中的黃酮類成分。而低溫烘干和高溫烘干需經(jīng)過(guò)60 ℃和80 ℃的加熱過(guò)程，會(huì)造成黃酮類成分的損失。低溫烘干提取物中總黃酮含量高于高溫烘干者，試驗(yàn)也證實(shí)溫度越高，黃酮類物質(zhì)損失越多。由此可見(jiàn)，冷凍干燥對(duì)提取物中活性成分的保留具有明顯優(yōu)勢(shì)。

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