馬新剛，張愛娟，梁 林，左伯軍

(山東省農(nóng)藥科學(xué)研究院 山東省化學(xué)農(nóng)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 濟(jì)南 250033)

花生是我國重要的經(jīng)濟(jì)和油料作物。根腐病是影響花生產(chǎn)量和品質(zhì)的主要病害之一,各生育期均可發(fā)病。近年來國內(nèi)市場花生需求增多,花生種植面積不斷增大,花生重茬面積也隨之?dāng)U大,根腐病的發(fā)生有加重趨勢,導(dǎo)致花生缺苗斷壟、爛根死苗,嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致花生成片死亡，造成重大生產(chǎn)經(jīng)濟(jì)損失[1]。目前，對(duì)咯菌腈的殘留報(bào)道較少[2]，涉及的作物主要有棉花、人參、水果和蔬菜等，檢測方法主要為液相色譜法和液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法[3-8]，但未見咯菌腈在花生中殘留分析方法的研究。

本文參考QuEChERS方法結(jié)合高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，建立了花生仁和秸稈中咯菌腈殘留量的分析檢測方法，該方法試驗(yàn)樣品前處理簡單快速、咯菌腈的定性定量準(zhǔn)確、檢測結(jié)果重現(xiàn)性好。

1 材料與方法

1.1 儀器與藥劑

高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(LCMS-8030)，SHIMADZU公司；多管渦旋混合儀(MTV-100)，杭州奧盛儀器有限公司渦旋儀；精密電子天平(AL204)，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司；離心機(jī)(TDL-5-A)，上海安亭科學(xué)儀器廠。

氯化鈉(分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)；乙腈(色譜純，瑞典歐森巴克環(huán)境化學(xué)公司；分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)；乙酸銨(色譜純，F(xiàn)isher Chemical)；十八烷基硅烷(C18)吸附劑(安捷倫科技有限公司)；咯菌腈標(biāo)準(zhǔn)品(純度為99.0%，購自德國Dr.Ehrenstorfer GmbH公司)。

溶液配制：準(zhǔn)確稱取0.0270 g咯菌腈標(biāo)準(zhǔn)品，將準(zhǔn)確稱重的標(biāo)準(zhǔn)品轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，用乙腈溶解，待標(biāo)準(zhǔn)品完全溶解，定容得535 mg/L咯菌腈標(biāo)準(zhǔn)溶液，置于4℃冰箱中保存，使用時(shí)用乙腈稀釋成100mg/L的咯菌腈標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2 前處理方法

將花生仁(秸稈)用食品調(diào)理儀粉碎，準(zhǔn)確稱取混勻的樣品10.0 g(秸稈5.0g)于50 mL具塞式塑料離心管中，加入10 mL乙腈和10 mL超純水，用渦旋儀高速渦旋4 min，加入5g氯化鈉，劇烈振蕩30s，5000r/min離心4 min至液面分層，取上清液1 mL至裝有50mg C18的2mL離心管中，高速渦旋1min，靜置1min，上清液過0.22 μm微孔濾膜，待測。

1.3 色譜及質(zhì)譜檢測條件

色譜條件：Shim-pack XR-ODSⅡ色譜柱(75 mm×2.0 mm，2.2 μm)；柱溫為室溫；流動(dòng)相： 5mmol乙酸銨水溶液+乙腈體積比20：80；進(jìn)樣體積：2 μL；流速：0.4 mL/min。

質(zhì)譜：電噴霧離子源ESI(-)；毛細(xì)管電壓：3.5 kV；加熱塊溫度：400 ℃；干燥氣溫度：250 ℃；干燥氣流量：15 L/min；霧化氣流量：3 L/min；反應(yīng)氣(Ar)壓力：230kpa。定量分析結(jié)果(見表1)。

表1 咯菌腈的質(zhì)譜檢測條件

2 結(jié)果與分析

2.1 儀器條件的確定

選用1 mg/L的咯菌腈標(biāo)準(zhǔn)溶液，在電噴霧離子源正/負(fù)方式下進(jìn)行全掃描(m/z 50～300)，根據(jù)掃描結(jié)果，選擇合適的電離方式和分子離子峰。通過比較儀器響應(yīng)值，發(fā)現(xiàn)在ESI(-)下咯菌腈[M-1]峰(m/z 247)為最強(qiáng)峰。選擇[M-1]峰(m/z 247)做母離子，進(jìn)行子離子掃描，優(yōu)化碰撞池電壓，分別獲得定量離子對(duì)m/z 247>247和定性離子對(duì)m/z 247>126，相應(yīng)的碰撞能量分別為25V和35V。質(zhì)譜圖(見圖1)。

a.全掃描質(zhì)譜圖;b.二級(jí)質(zhì)譜圖圖1 咯菌腈的全掃描質(zhì)譜圖和二級(jí)質(zhì)譜圖

色譜條件的選擇，通過試驗(yàn)表明5mmol乙酸銨水溶液+乙腈體積比為20∶80，流速為0.4mL/min時(shí)，咯菌腈與其余雜質(zhì)分離效果好且基線平穩(wěn)、峰型對(duì)稱。溶劑標(biāo)樣色譜圖(見圖2)。

圖2 咯菌腈溶劑標(biāo)樣(0.1 mg/L)

2.2 咯菌腈線性關(guān)系

將咯菌腈(10mg/L)的標(biāo)準(zhǔn)溶液用乙腈、花生仁空白基質(zhì)溶液、秸稈空白基質(zhì)溶液配制成0.01、0.05、0.1、0.5、1mg/L系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。按1.3節(jié)條件測定，每個(gè)質(zhì)量濃度重復(fù)3次，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，定量離子對(duì)峰面積為縱坐標(biāo)，繪制工作曲線。在 0.01～1 mg/L 范圍內(nèi)，咯菌腈在乙腈、花生仁空白基質(zhì)溶液、秸稈空白基質(zhì)溶液中均呈良好的線性關(guān)系 (見表2)。目前常用的基質(zhì)效應(yīng)的評(píng)價(jià)方法是采用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合的線性方程斜率與溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程斜率比 ( Slope ratio，SR)，可以采用 SR 比值或其百分?jǐn)?shù)表示。若 SR =100% (或 1)，說明無基質(zhì)效應(yīng); 若SR < 100%，呈基質(zhì)抑制效應(yīng); 若 SR > 100%，呈基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)[9]。本研究中，咯菌腈在兩種基質(zhì)中均呈現(xiàn)基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)。為校正和消除基質(zhì)效應(yīng)影響，本研究均采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液。

表2 咯菌腈的線性方程、相關(guān)系數(shù)、斜率比

2.3 咯菌腈的添加回收率和精密度

在空白花生仁基質(zhì)中按照0.01～1mg/kg 3個(gè)添加水平，在空白秸稈基質(zhì)中按照0.05～2mg/kg 3個(gè)添加水平分別添加咯菌腈標(biāo)準(zhǔn)溶液，結(jié)果表明(見表3)：咯菌腈在花生仁中添加回收率為86%～114%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為7%～8%；咯菌腈在花生秸稈中添加回收率為79%～107%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為5%～8%，符合農(nóng)藥殘留分析要求。目標(biāo)峰峰型較好且無雜質(zhì)干擾(圖3和圖4)。

表3 咯菌腈在花生仁和秸稈中的添加回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

圖3 花生仁中添加色譜圖(添加0.1 mg/kg)

2.4 方法定量限

以最低添加水平作為方法的定量限(LOQ)，咯菌腈在花生仁的定量限為0.01 mg/kg，秸稈中的定量限為0.05mg/kg。

3 結(jié)論

本文參照QuEChERS方法，建立了咯菌腈在花生仁及秸稈中的殘留分析方法，樣品經(jīng)乙腈和水提取，C18凈化，高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測?？┚嬖诨ㄉ手械亩肯逓?.01mg/kg，在秸稈中的定量限為0.05mg/kg，平均回收率在92%～105%之間。該方法準(zhǔn)確可靠、簡單快速、重現(xiàn)性良好，滿足農(nóng)藥殘留分析要求，為咯菌腈及其制劑在其他農(nóng)產(chǎn)品中殘留檢測提供了參考依據(jù)。

圖4 花生秸稈中添加色譜圖(添加0.5 mg/kg)