摘要：本實驗采取遼寧絨山羊正常組織心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、大腦、小腦、腦干和淋巴結(jié)，采用朊蛋白單克隆抗體7D9單抗，應(yīng)用免疫組織化學方法，對絨山羊不同組織中的PrPc進行了定性、定量和定位的研究。結(jié)果，正常朊蛋白在大腦、小腦、腦干等中樞神經(jīng)系統(tǒng)分布廣泛，其次是脾臟、淋巴結(jié)等淋巴網(wǎng)狀系統(tǒng)，而肝臟、心臟和肺臟組織器官未檢測到PrPc。結(jié)論，朊蛋白單克隆抗體7D9可以用于遼寧絨山羊正常組織朊蛋白的免疫組織化學研究。

關(guān)鍵詞：遼寧絨山羊;朊蛋白;免疫組織化學

近年來，對于TSE檢測的發(fā)展非常迅速，盡管朊病毒的分類本質(zhì)還不明確，但其一些生物學特性已有研究，如抵抗性、傳染性等。PrPSc檢測逐漸成為TSE的確診依據(jù)。其中免疫組織化學（IHC）診斷方法具有特異性高、成本低、操作簡單、準確等特點，被世界動物衛(wèi)生組織確定為法定TSE診斷方法之一。IHC已廣泛用于羊癢病等動物海綿狀腦病的診斷和檢測。

朊蛋白在不同組織中的分布和表達量是朊病毒的致病基礎(chǔ)。本試驗將應(yīng)用免疫組織化學方法，對遼寧絨山羊PrPc在不同組織中的分布進行定性、定量和定位的研究，旨在探求TSE的發(fā)病機理、傳播途徑以及為揭示朊蛋白在組織中的表達量與 PrPSc的感染途徑之間的關(guān)系提供生物學信息。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

來自營口臨床健康遼寧絨山羊成年母羊（3～5歲）30只屠宰后，立即采取大腦、小腦、腦干、肝臟、心臟、脾臟、肺臟、腎臟、腸系膜淋巴結(jié)、扁桃體等組織器官，放入10%福爾馬林溶液中固定。

1.2 試驗方法

樣品組織蠟塊制備，石蠟切片脫蠟至水，石蠟切片去除內(nèi)源性過氧化物酶，石蠟切片的修復和抗原暴露，滴加特異性一抗和二抗，顯色、水化、蘇木素復染及封片，用PBS代替PrP單克隆抗體做陰性對照。

2 結(jié)果與分析

免疫組織化學檢測結(jié)果顯示，在遼寧絨山羊的大腦、腦干、小腦、淋巴結(jié)、脾臟、腎臟、肺臟均觀察到了PrP的表達，尤其在大腦、腦干、小腦、淋巴結(jié)和脾臟中，PrP的表達量豐富。腦干部神經(jīng)元排列緊密，可見明顯的紅色片狀區(qū)域;朊蛋白在脾臟分布較為廣泛，表達量多。淋巴結(jié)中PrP數(shù)量很多，分布較為廣泛，在心臟、肝臟、腎臟和肺臟未檢測出PrP表達，結(jié)果為陰性。

3 結(jié)論

本試驗利用單抗7D9進行遼寧絨山羊正常組織中PrP免疫組織化學研究，通過對抗原的甲酸和高溫水浴熱修復，在大腦、小腦、腦干等中樞神經(jīng)系統(tǒng)以及脾臟、淋巴結(jié)等淋巴網(wǎng)狀系統(tǒng)都檢測到了高表達的PrPc。甲酸和高溫水浴對PrP的暴露具有很好的修復作用。

作者簡介：龔商羽，女，中級獸醫(yī)師。研究方向：重大動物疫病的預(yù)防和控制。