鄔崇華，熊 婷，陳開豐，陳 彪，毛輝榮，劉三鳳

（江西農(nóng)業(yè)大學 動物科學技術(shù)學院，江西 南昌330045）

【研究意義】山麻鴨原產(chǎn)地位于福建省龍巖市，故又稱龍巖山麻鴨，是我國南方飼養(yǎng)量最大的小型蛋鴨品種，具有體型小、早熟、產(chǎn)蛋多、蛋質(zhì)量適中、適應(yīng)性強和飼料報酬高等特點。由于養(yǎng)殖資源的日益短缺和新《環(huán)境保護法》的實施，傳統(tǒng)的散養(yǎng)模式正逐步向集約化籠養(yǎng)模式轉(zhuǎn)變，且取得了不錯的進展，因此蛋鴨的繁殖方式也由自然交配轉(zhuǎn)為人工授精[1-2]。提高公鴨的繁殖性能可以提高種公鴨的利用率和種蛋受精率，從而減少種公鴨的飼養(yǎng)量，降低生產(chǎn)成本，增加生產(chǎn)效益。本試驗所選用的E時代魚肝油中含有豐富的維生素A、維生素D、維生素E、飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸。【前人研究進展】研究表明，維生素A、維生素E和不飽和脂肪酸對畜禽的繁殖性能有顯著的改善作用，能夠提高公禽的精液品質(zhì)和母禽的受精率[3-9]。魚肝油中含有豐富的營養(yǎng)成分，可以改善種鴨的繁殖性能?！颈狙芯壳腥朦c】在實際生產(chǎn)中，魚肝油常用于維生素A、維生素D缺乏癥，強化維生素E，加快畜禽新陳代謝，促進生長發(fā)育，強壯體質(zhì)，提高繁殖性能，增加蛋質(zhì)量。目前對于魚肝油用來提高畜禽繁殖性能的文章鮮有報道?！緮M解決的關(guān)鍵問題】本試驗以山麻鴨公鴨為研究對象，通過在日糧中添加不同量的魚肝油來研究其對公鴨繁殖性能的影響，為實際生產(chǎn)中魚肝油應(yīng)用于種公鴨繁殖性能的提升提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗選用實驗室現(xiàn)有的已進行選擇的64周齡山麻鴨公鴨24只和30周齡山麻鴨母鴨64只。公鴨飼料采用南昌華達集團生產(chǎn)的育成鴨全價料，母鴨采用同一公司生產(chǎn)的蛋鴨料，每天早晚各飼喂1次。試驗鴨飼養(yǎng)于江西農(nóng)業(yè)大學動物科學技術(shù)學院動物房，均采用3層階梯式單籠飼養(yǎng)，光照時間16 h/d，其他飼養(yǎng)管理嚴格按照種鴨場要求進行。魚肝油為中鯊動物保健品（廈門）有限公司生產(chǎn)的E時代魚肝油。

試驗器具和試劑主要包括鴨授精輸精器、光學顯微鏡、25×16型血細胞計數(shù)板、恒溫水浴鍋、恒溫載物臺、集精杯、電子天平、振蕩機、1.5 mL EP管、50 mL EP管、生理鹽水、無水乙醇、體積分數(shù)75%酒精、飽和龍膽紫染液、35%甲醛、碳酸氫鈉、高錳酸鉀。

1.2 試驗設(shè)計

試驗開始前3周為公鴨采精訓練，每隔2 d訓練1次，淘汰不能采出精液或精液品質(zhì)不良的公鴨，在此基礎(chǔ)上選擇24只公鴨隨機分成4組，分別為對照組和試驗Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組，每組6只，對應(yīng)日糧中分別添加0 mL/kg、7.2 mL/kg、10.8 mL/kg和14.4 mL/kg E時代魚肝油。另外，隨機選擇64只33周齡母鴨隨機分成4組與公鴨對應(yīng)，每組16只。試驗從2018年11月18日開始至2018年12月28日，共持續(xù)41 d。試驗正式開始后第1天對公鴨進行采精，并進行精液品質(zhì)檢測。正式試驗開始后每隔2 d對公鴨采精1次，每隔5 d進行1次精液品質(zhì)檢測，即每隔1次采精，進行1次精液品質(zhì)檢測，試驗期間共測定6次精液品質(zhì)。

另外，在第22天采完精液后，分別將每組的各公鴨的精液混合，用于對各組的試驗?zāi)给喌娜斯ぽ斁?，且在?3天繼續(xù)采精輸精，即第1次授精需要連續(xù)輸2 d。人工輸精的間隔為5 d，這樣正好每次采集到的精液將分別逐次用于精液品質(zhì)檢測和人工輸精。從第24天開始收集種蛋，種蛋每收集3 d入孵1次，直到試驗結(jié)束。在每次入孵后的第7天進行照蛋，撿出無精蛋和死胚蛋，并記錄，計算種蛋受精率。試驗期間共輸精4次，輸精間隔為5 d，計算每次輸精后第3天起連續(xù)3 d和連續(xù)6 d的種蛋的受精率。

試驗期間記錄每天每組的采食量。在試驗開始前和結(jié)束后對公鴨進行稱質(zhì)量。

1.3 采精和輸精方法

人工采精采用背腹式按摩法，輸精采用輸卵管口外翻法，輸精時間為08:00—11:30。

1.4 測定指標及方法

1.4.1 精液品質(zhì)及種蛋受精率 測定精液量（mL）、精子活力、精子密度（億/mL）和精子畸形率（%）。

精子活力：在顯微鏡中觀察，采用0～1.0的十級評分法[10]。取20 μL生理鹽水（0.9%，39℃預熱）于載玻片上，然后加入20 μL新鮮精液，涂片，蓋上蓋玻片，然后立刻鏡檢。按以下標準評分：精子呈螺旋翻滾狀態(tài)可評0.8～10，代表精子活力很高；多數(shù)精子呈直線前進，運動速度快，可評為0.5～0.8，代表精子活力高；多數(shù)精子呈圓周運動，運動緩慢可評0.3～0.5，代表精子活力低；多數(shù)精子擺動或漂浮可評為0.1～0.3，代表精子活力很差或死亡。

精子密度：運用血細胞計數(shù)法。為了準確統(tǒng)計精子數(shù)量，在數(shù)精子數(shù)時先將精液按1∶1 000的倍數(shù)稀釋。鏡檢所采用的精液稀釋液成分參考辛清武等[11]使用的鴨精液稀釋液。精液稀釋液的配制：NaHCO310 g，35%的甲醛2 mL，飽和龍膽紫溶液1 mL，無水酒精1 mL，加生理鹽水至200 mL。稀釋液中的NaHCO3可溶解精液中的粘液，35%的甲醛及無水酒精有殺死和抑制精子活動的作用，龍膽紫可提高鏡檢時的清晰度。稀釋方法采用分步稀釋法。精液和稀釋液的混合液用振蕩機混合均勻，減小誤差。精液稀釋完后用移液槍分別吸取10 μL稀釋液混合液于上下2個計數(shù)室中，靜置1 min左右，分別讀取上下2個計數(shù)室的精子數(shù)，取平均值。

精子畸形率：取精液稀釋液20 μL于載玻片上，進行抹片，并用蓋玻片蓋上。靜置幾小時，待自然干燥后，將制好的抹片置于顯微鏡下，觀察蓋玻片上、下、左、右4個區(qū)域不同視野的精子，共200個，數(shù)出畸形精子數(shù)，求出畸形率?；尉又饕幸韵聨追N：尾部盤繞、斷尾、無尾、盤繞頭、鉤狀頭、破裂頭、膨脹頭等。

1.4.2 公鴨采精時的反應(yīng)強度評分及精清量評分 公鴨進行采精時，對每羽公鴨的反應(yīng)強度和精清量進行評分。反應(yīng)強度分3個層次：很強烈、強烈和一般，分別對應(yīng)3個評分：3、2、1。反應(yīng)強度評分可以很好地反映公鴨對于人工采精時按摩的反射程度，使采精人員對公鴨按摩后的反應(yīng)程度有一個預判，可以預測到公鴨是否能采出精液，并可以避免公鴨反應(yīng)過于強烈而收集不到精液的情況。

精清量評分是觀察采集的精液中精清所占的比例，也是分3個等級：大量、中等量和少量，評分：3、2、1。精清偏少的話為少量，精清大約占一半為中等量精清，精清占一半以上為大量。精清量評分可以幫助精液檢測人員更好地預測精液密度，從而據(jù)此選擇更合適的稀釋比例。因為精液中精清量越多，精子密度就越小。

1.4.3 公鴨每日耗料量、公鴨試驗前后體質(zhì)量變化 試驗期間每天記錄每組公鴨的耗料量。在試驗開始前對所有公鴨進行體質(zhì)量的測定，并在試驗結(jié)束時再次稱量，統(tǒng)計試驗前后體質(zhì)量的變化情況。

1.5 統(tǒng)計與分析

運用Excel 2013軟件進行數(shù)據(jù)初步整理后，采用SPSS 20.0軟件進行單因素方差分析，多重比較方法采用LSD法，結(jié)果以（平均值±標準差）表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 魚肝油對山麻鴨精液品質(zhì)的影響

對6次精液品質(zhì)測定的結(jié)果分次進行組間差異性分析，得出不同魚肝油添加量對籠養(yǎng)山麻鴨精液品質(zhì)的影響，結(jié)果見表1。

表1 各組精液品質(zhì)測定及公鴨采精時反應(yīng)強度評分結(jié)果Tab.1 Semen quality test results of each group

續(xù)表1

由表1可知，6次精液品質(zhì)的測定結(jié)果中，在第4次和第6次精液品質(zhì)檢測時，第Ⅱ、Ⅲ組的精液量和精子密度與對照組出現(xiàn)顯著差異（P＜0.05）。第2次精液品質(zhì)測定中，第Ⅲ組的精子活力顯著高于第Ⅰ組，在第4次精液品質(zhì)檢測時第Ⅱ、Ⅲ組的精子活力均顯著高于對照組，且在第6次精液品質(zhì)檢測中，各試驗組精子活力均顯著高于對照組（P＜0.05），其余幾次測定結(jié)果各組差異均不顯著（P＞0.05）。此外，各組在精子畸形率、有效精子數(shù)、公鴨采精反應(yīng)強度評分、精清量評分等指標上均無顯著差異（P＞0.05）。

2.2 魚肝油對種蛋受精率的影響

各組以每天收集的種蛋的受精率為變量，分別統(tǒng)計分析4次人工輸精后3 d和6 d（以輸精日為第1天，輸精后第3天為收集種蛋的第1天）的種蛋的受精率，結(jié)果見表2。

表2 各組受精率統(tǒng)計Tab.2 Fertilization rate and hatching rate of each group

從表2可以看出，籠養(yǎng)山麻鴨采用人工授精方法可以獲得較好的受精率，特別是前3 d，各組受精率均為90%以上。后3 d的受精率在各組表現(xiàn)不一，對照組和試驗Ⅲ組水平較高，Ⅰ組和Ⅱ組出現(xiàn)了受精率快速下降的情況，導致其6 d的平均數(shù)較低，但各組之間沒有顯著性差異。

2.3 魚肝油對公鴨采食量和體質(zhì)量的影響

各組采食量與試驗前后體質(zhì)量變化如表3所示。由表3可知，第Ⅲ組的采食量最高，第Ⅰ組的采食量最低，但是各組的采食量差異不顯著（P＞0.05）。試驗結(jié)束后，各組公鴨的體質(zhì)量均有上升，但是體質(zhì)量變化差異不顯著（P＞0.05）。

表3 各組采食量與試驗前后體質(zhì)量變化Tab.3 Fertilization rate of each group and weight change before and after the test

3 討論與結(jié)論

3.1 魚肝油對山麻鴨精液品質(zhì)的影響

試驗發(fā)現(xiàn)E時代魚肝油可以顯著提高山麻鴨公鴨的精液量和精子活力，但同時降低了精子密度。試驗第Ⅱ組和Ⅲ組中的10.8 mL/kg和14.4 mL/kg的E時代魚肝油添加量對公鴨的精液量提升顯著。精液是由精清和精子組成，試驗中各試驗組的精液量提升，精子密度降低，且各組有效精子數(shù)在每次測定結(jié)果中都無顯著差異，說明E時代魚肝油能增加精液的精清量，而精清主要來自睪丸精細管、附睪和輸精管，說明E時代魚肝油可能主要作用于上述幾個器官來影響公鴨的精液量。

從試驗結(jié)果可以看出，公鴨個體間精液品質(zhì)差異很大，有部分個體穩(wěn)定性差。在第2次精液品質(zhì)檢測結(jié)果中，試驗Ⅰ組的精子活力無征兆性的顯著低于試驗Ⅲ組，并與其他各組間無顯著差異。且試驗處于寒冷的冬季，溫度的降低，對精子活力產(chǎn)生了不同程度的影響。對照組公鴨的精子密度一直是最高的，主要是因為其中1只公鴨的精子密度出奇的高，將對照組整體的精子密度水平拉高了。在第5次精液品質(zhì)檢測結(jié)果中，對照組公鴨的精液量無故增加了50%以上，縮小了與各試驗組的差距，直接和間接導致各組之間精液量和精子密度差異不顯著。這是因為在精液品質(zhì)檢測的試驗過程中，供試公鴨中有個別出現(xiàn)精液品質(zhì)突然變化非常大，帶動了其試驗組整體的數(shù)據(jù)變化。除以上討論的精液品質(zhì)指標外，試驗各組其他精液品質(zhì)均差異不顯著（P＞0.05）。

該試驗試驗期間共對各組山麻鴨公鴨采精15次，精液品質(zhì)檢測共6次，發(fā)現(xiàn)山麻鴨公鴨的平均精液量為（0.30±0.11）mL，精子密度為（28.80±13.79）億/mL，精子畸形率為（8.50±3.03）%，精子活力為0.83±0.11。試驗中對照組所收集到的精液量與郭海寧等對山麻鴨進行人工采精時的收集到的精液量0.20～0.25 mL相近，說明該試驗數(shù)據(jù)可靠，而添加魚肝油的各試驗組采集的精液量明顯高于對照組，表明了E時代魚肝油具有增加山麻鴨精液量的作用。山麻鴨的精液量要遠低于番鴨，但是精子密度山麻鴨更大[12-14]。另外該試驗所采出的山麻鴨的精液量遠高于蘇郵1號成年公鴨的（0.17±0.05）mL，山麻鴨的精子畸形率明顯低于蘇郵1號的12.96%，2個品種的蛋鴨的精子活力和精子密度差異不大[15]。山麻鴨的精液量和精子密度都遠大于斑嘴鴨[16]。對于同為水禽的鵝來說，山麻鴨的精液品質(zhì)更高，但是山麻鴨的精液量和正常精子比例要低于雞[17-19]。E時代魚肝油中含有豐富的維生素A、維生素E、飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸，這些營養(yǎng)成分都能顯著改善畜禽的繁殖性能[3-9，20-22]。

3.2 魚肝油對種蛋受精率的影響

影響種鴨精液品質(zhì)的因素頗多，包括品種、遺傳、個體差異、營養(yǎng)與飼養(yǎng)環(huán)境、采精頻率等[2]。鴨的人工授精是近代種禽繁殖業(yè)中普遍采用的技術(shù)措施之一[23]。本試驗輸精方式為人工輸精，影響人工授精中種蛋受精率的因素除了人工輸精的水平外有很多，包括公鴨的精液品質(zhì)，輸精間隔，精液稀釋倍數(shù)，母鴨的蛋殼質(zhì)量等等[24]。馬銘龍等[25]提出公鵝精液品質(zhì)對繁殖性能有直接影響，選擇精液品質(zhì)好的公鵝有利于提高獅頭鵝的受精率和產(chǎn)雛數(shù)。該試驗中各試驗組與對照組相比種蛋受精率的差異不顯著（P＞0.05），說明E時代魚肝油對于種蛋的受精率影響不顯著。雖然目前鴨人工輸精技術(shù)的成熟度不高，效果不穩(wěn)定[26]，但是本試驗還是取得比較良好的受精率。本試驗中的種蛋平均受精率為（86.75±12.60）%，與田河等的結(jié)果類似，高于陳巖峰等[4，27]的（76.38±2.32）%。

3.3 魚肝油對公鴨采食量和體質(zhì)量的影響

從試驗結(jié)果可以看出，雖然各組的采食量與體質(zhì)量差異不顯著，但是隨著E時代魚肝油添加量的增加，各試驗組公鴨的采食量有上升的趨勢，其中第Ⅲ組的公鴨耗料量和體質(zhì)量的增加量均為最高，說明E時代魚肝油可能對飼料的風味有影響，從而影響公鴨的采食量，進而影響其體質(zhì)量變化。

通過本試驗可以看出，10.8 mL/kg和14.4 mL/kg的魚肝油可以明顯提高山麻鴨種公鴨的精液量和精子活力，但是精子密度有所降低，對受精率無顯著影響。