靳明偉 徐在革

甲狀腺癌屬于一種甲狀腺惡性腫瘤，在臨床極為常見，近年來，其發(fā)病率日益提升。早期甲狀腺癌患者具有良好的預(yù)后，但是晚期甲狀腺癌患者具有較高的惡性程度、較差的預(yù)后[1-2]。本研究對(duì)DC-CIK生物免疫療法對(duì)甲狀腺癌患者術(shù)后IL-16、TNF水平影響及臨床療效進(jìn)行了研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選取2018年1月至2019年3月我院甲狀腺癌患者60例，隨機(jī)分為2組?；熃M(30例)采用CMF化療方案輔助治療，DC-CIK生物免疫療法組(30例)在CMF化療方案輔助治療基礎(chǔ)上進(jìn)行DC-CIK生物免疫治療。DC-CIK生物免疫療法組患者中男性9例，女性21例，年齡24～56歲，平均(38.5±6.6)歲；病程3～18個(gè)月，平均(8.3±1.6)個(gè)月；在病理類型方面，20例為乳頭癌，10例為濾泡癌；在TNM分期方面，10例為Ⅰ期，14例為Ⅱ期，6例為Ⅲ期；在腫瘤部位方面，14例為單側(cè)，16例為雙側(cè)。CMF化療方案輔助治療組患者中男性8例，女性22例，年齡25～56歲，平均(39.3±6.8)歲；病程4～18個(gè)月，平均(8.8±1.8)個(gè)月；在病理類型方面，19例為乳頭癌，11例為濾泡癌；在TNM分期方面，11例為Ⅰ期，12例為Ⅱ期，7例為Ⅲ期；在腫瘤部位方面，13例為單側(cè)，17例為雙側(cè)。2組患者的一般資料比較差異均不顯著(P>0.05)，見表1。

表1 2組患者的一般資料比較

1.2 納入和排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)CT、病理組織學(xué)檢查確診為甲狀腺癌；②均接受甲狀腺腫瘤切除手術(shù)治療；③均有手術(shù)治療指征。排除標(biāo)準(zhǔn)：①無法耐受手術(shù)；②預(yù)計(jì)生存期在半年以內(nèi)；③有遠(yuǎn)處病灶轉(zhuǎn)移。

1.3 方法

1.3.1 CMF化療方案輔助治療組 患者接受甲狀腺腫瘤切除手術(shù)后CMF化療方案輔助治療，第1、8天給予患者靜脈注射50 mg/m2環(huán)磷酰胺，6 h后給予患者靜脈注射50 mg/m2甲氨蝶呤+500 mg/m2氟尿嘧啶，每7～10天1次，2～3次為1個(gè)療程，4周為1個(gè)周期，共治療6個(gè)周期。

1.3.2 DC-CIK生物免疫療法組 患者接受甲狀腺腫瘤切除手術(shù)后CMF化療方案輔助治療基礎(chǔ)上進(jìn)行DC-CIK生物免疫治療。免疫治療方法：將CD細(xì)胞制備出來，即將患者的靜脈血抽取出來，采用離心機(jī)將單核細(xì)胞分離出來，應(yīng)用Ficoll淋巴細(xì)胞分離液洗滌并分離淋巴細(xì)胞，應(yīng)用BIN無血清培養(yǎng)基將細(xì)胞分離液制備出來，在恒溫箱中放置，進(jìn)行2 h的孵育。將細(xì)胞液移取后將500 U/l白介素4(IL-4)、1 000 U/l GM-CSF加入，繼續(xù)進(jìn)行2～3 d的培養(yǎng)，將培養(yǎng)液更換1次，第6天將500 U/ml腫瘤壞死因子α(TNF-α)加入。將淋巴細(xì)胞分離出來后，將1 000 U/l重組人干擾素(IFN-γ)、含10% AB型血清PMI-1640培養(yǎng)液加入，進(jìn)行1 d的孵育后更換培養(yǎng)液為含IL-1、IL-2的RPMI-1640培養(yǎng)液、含1 000 ng/ml的小鼠抗人CD3單克隆抗體，進(jìn)行2 d的培養(yǎng)后更換培養(yǎng)液為含IL-2的完全培養(yǎng)液，培養(yǎng)到1周后按1∶5比例混合DC、CIK細(xì)胞，將DC-CIK細(xì)胞懸浮液制備出來，然后向體內(nèi)回輸DC-CIK細(xì)胞，濃度為5×10個(gè)/l，4次為1個(gè)療程，共治療3～8個(gè)療程。

1.4 療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)

依據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)腫瘤化療療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，分為完全緩解、部分緩解、疾病穩(wěn)定、疾病進(jìn)展，總緩解=完全緩解+部分緩解[3]。

1.5 觀察指標(biāo)

治療前后分別將2組患者的5 ml清晨空腹靜脈血抽取出來，將肝素鈉加入其中抗凝，進(jìn)行10 min的離心，將速率設(shè)定為3 000 r/min，將懸浮液留取出來。將淋巴細(xì)胞分離液加入，運(yùn)用密度梯度離心法分離單核細(xì)胞，采用RPM-1640調(diào)整細(xì)胞濃度為2×106/ml，將鼠抗人CD4單抗、鼠抗人CD25單抗分別加入，在4 ℃的溫度下進(jìn)行20 min的避光放置。室溫下用固定液進(jìn)行15 min處理，離心將沉淀物留取下來，用磷酸鹽緩沖液(PBS)進(jìn)行2次洗滌，進(jìn)行細(xì)胞漿染色，然后采用流式細(xì)胞儀(Beckm Epics，美國貝克曼公司)測(cè)定其CD4+Th17、Th17/Treg、CD4+CD25+Treg等免疫功能指標(biāo)。同時(shí)，將2組患者的5 ml空腹靜脈血抽取出來，進(jìn)行20 min的離心，速率為3 000 r/min，將血漿留取出來，在-20 ℃溫度下放置保存待測(cè)。應(yīng)用上海書吉生物科技有限公司生產(chǎn)的VEGF試劑盒、上海一研生物科技有限公司生產(chǎn)的TNF-α試劑盒、上海酶聯(lián)生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的IL-1試劑盒、上海開放生物科技有限公司生產(chǎn)的IL-6試劑盒，運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)對(duì)其血清血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、IL-1、IL-6水平進(jìn)行測(cè)定。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 2組患者的臨床療效比較

DC-CIK生物免疫療法組患者的總緩解率為86.7%(26/30)，顯著高于CMF化療方案輔助治療組的60.0%(18/30)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=13.34，P<0.05)。見表2。

表2 2組患者的臨床療效比較(例，%)

2.2 2組患者治療前后的T細(xì)胞水平變化情況比較

2組患者治療后的CD4+Th17均顯著低于治療前(P<0.05)，Th17/Treg、CD4+CD25+Treg均顯著高于治療前(P<0.05)。治療前2組患者的CD4+Th17、Th17/Treg、CD4+CD25+Treg之間的差異均不顯著(P>0.05)，治療后DC-CIK生物免疫療法組患者的CD4+Th17均顯著低于CMF化療方案輔助治療組(P<0.05)，Th17/Treg、CD4+CD25+Treg均顯著高于CMF化療方案輔助治療組(P<0.05)。見表3。

表3 2組患者治療前后的T細(xì)胞水平變化情況比較

2.3 2組患者治療前后的血清VEGF、TNF-α、IL-1、IL-6水平變化情況比較

2組患者治療后的血清VEGF、TNF-α、IL-1、IL-6水平均顯著低于治療前(P<0.05)。治療前2組患者的血清VEGF、TNF-α、IL-1、IL-6水平之間的差異均不顯著(P>0.05)，治療后DC-CIK生物免疫療法組患者的血清VEGF、TNF-α、IL-1、IL-6水平均顯著低于CMF化療方案輔助治療組(P<0.05)。見表4。

表4 2組患者治療前后的血清VEGF、TNF-α、IL-1、IL-6水平變化情況比較

3 討論

相關(guān)醫(yī)學(xué)研究表明[4-7]，甲狀腺癌發(fā)病的誘發(fā)因素主要為機(jī)體免疫功能降低，特別是細(xì)胞免疫功能降低。VEGF屬于血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性肝素結(jié)合生長因子，甲狀腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移、侵襲均和其水平關(guān)系密切。在早期甲狀腺癌的治療中，外科手術(shù)是臨床采用的最有效治療方法，但是圍手術(shù)期創(chuàng)傷會(huì)對(duì)機(jī)體免疫功能造成破壞，使機(jī)體釋放炎癥因子，促進(jìn)機(jī)體炎癥反應(yīng)的加重，進(jìn)而對(duì)患者預(yù)后造成不良影響。近年來，在腫瘤的治療中，樹突狀細(xì)胞-細(xì)胞因子誘導(dǎo)殺傷細(xì)胞(DC-CIK)生物免疫療法在飛速發(fā)展的細(xì)胞生物學(xué)、免疫分子學(xué)等作用下已經(jīng)成為臨床通常采用的輔助手段[8-11]。相關(guān)醫(yī)學(xué)研究表明[12-15]，DC-CIK生物免疫療法能夠?qū)谞钕侔┗颊咝g(shù)后免疫功能進(jìn)行有效改善，促進(jìn)患者炎癥因子的降低、治療效果的提升。本研究結(jié)果表明，DC-CIK生物免疫療法組患者的總緩解率顯著高于CMF化療方案輔助治療組，CD4+Th17均顯著低于CMF化療方案輔助治療組，Th17/Treg、CD4+CD25+Treg均顯著高于CMF化療方案輔助治療組，血清VEGF、TNF-α、IL-1、IL-6水平均顯著低于CMF化療方案輔助治療組，和上述相關(guān)醫(yī)學(xué)研究結(jié)果一致。

總之，DC-CIK生物免疫療法能夠有效降低甲狀腺癌患者術(shù)后IL-16、TNF水平，提升臨床療效，值得推廣。