李清華，尹明明，陳福良，李文明*

（1.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 植物保護(hù)學(xué)院，鄭州 450000；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 植物保護(hù)研究所 農(nóng)業(yè)部作物有害生物綜合治理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100193）

呋蟲(chóng)胺(dinotefuran)屬于第三代新煙堿類(lèi)殺蟲(chóng)劑，具有觸殺、胃毒、根部強(qiáng)內(nèi)吸性、殺蟲(chóng)譜廣和防效高等特點(diǎn)[1]，被廣泛用于防治小麥、水稻、棉花和蔬菜等作物的蚜蟲(chóng)、葉蟬和飛虱等害蟲(chóng)，對(duì)鞘翅目、雙翅目和鱗翅目害蟲(chóng)有較高防效。呋蟲(chóng)胺廣泛應(yīng)用于各種作物，因此對(duì)其進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)至關(guān)重要。常見(jiàn)呋蟲(chóng)胺殘留檢測(cè)方法有液相色譜(LC)、高效液相色譜(HPLC)、液相色譜-質(zhì)譜(LC-MS)、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)和超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)等方法。其中超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀(UPLC-MS/MS)作為殘留檢測(cè)的儀器，已用于檢測(cè)棉花[2]、黃瓜[3]、豇豆[4]、水稻[5]和甘藍(lán)[6]等作物中的呋蟲(chóng)胺殘留。對(duì)棉花[2]中呋蟲(chóng)胺的檢測(cè)已有對(duì)棉花植株、棉籽和土壤檢測(cè)的報(bào)道，未見(jiàn)對(duì)棉花葉片樣品進(jìn)行殘留檢測(cè)分析，也未見(jiàn)有關(guān)甜瓜和茄子中呋蟲(chóng)胺殘留檢測(cè)方法的研究報(bào)道。

因此，本文采用改進(jìn)的QuEChERS方法，建立了超高效液相色譜-三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)呋蟲(chóng)胺在甜瓜、茄子及棉花葉片中殘留分析方法，旨在為進(jìn)一步研究呋蟲(chóng)胺在上述3種作物葉片中的劑量分布與田間藥效相關(guān)性奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

超高效液相色譜-三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀(ACQUITY UPLC-TQD)，美國(guó)Waters公司；BSA224S-CW電子天平，德國(guó)Sartorius公司；Vottex QL-861渦旋儀，江蘇海門(mén)市其林貝爾儀器制造有限公司；Milli-Q超純水儀，美國(guó)Milli-pore公司。

100%呋蟲(chóng)胺標(biāo)樣，日本三井公司；乙腈(色譜純)，美國(guó)Fisher Scientific公司；乙腈(分析純)，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；甲酸(分析純)，重慶川東化工有限公司；NaCl、無(wú)水MgSO4(均為分析純)，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；PSA、C18，天津Agela公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：準(zhǔn)確稱(chēng)取0.010 0 g呋蟲(chóng)胺標(biāo)樣于100 mL容量瓶，用乙腈定容得到100 mg/L呋蟲(chóng)胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，置于4℃冰箱保存。

溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液：吸取一定量的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，分別用乙腈稀釋至0.005、0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mg/L，作為一系列梯度標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液：將呋蟲(chóng)胺標(biāo)準(zhǔn)溶液分別用基質(zhì)空白提取液稀釋?zhuān)玫脚c標(biāo)準(zhǔn)工作溶液相同濃度的一系列基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2.2 樣品提取與凈化

準(zhǔn)確稱(chēng)取粉碎后的葉片樣品5.0 g于50 mL離心管中，加入10 mL乙腈，振蕩提取10 min，加入1 g NaCl和4 g無(wú)水MgSO4，振蕩5 min，4 000 r/min離心5 min；移取1.5 mL上清液于盛有50 mg PSA、50 mg C18和150 mg無(wú)水MgSO4的2 mL離心管中，渦旋2 min，5 000 r/min離心5 min，過(guò)0.22 μm濾膜至2 mL進(jìn)樣瓶，待UPLC-MS/MS測(cè)。

1.2.3 儀器條件

液相色譜條件：色譜柱Acquity UPLC?BEH C181.7 μm(2.1×50 mm Column，Waters公司)；柱溫：50℃；流速：0.28 mL/min；進(jìn)樣體積：3 μL；流動(dòng)相為乙腈和0.2%甲酸水溶液；梯度洗脫：初始為10%乙腈+90%0.2%甲酸水溶液，1 min為65%乙腈+35%0.2%甲酸水溶液，3.50 min為10%乙腈+90%0.2%甲酸水溶液。

質(zhì)譜條件：電噴霧正離子源ESI+；毛細(xì)管電壓3.0 KV；錐孔電壓52 V；離子源溫度150℃；脫溶劑溫度300℃；脫溶劑氣流量500 L/h；錐孔氣流量50 L/h；表1多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)。圖1為0.005 mg/L呋蟲(chóng)胺標(biāo)樣液相色譜圖，相對(duì)保留時(shí)間為1.73 min，保留時(shí)間較短，能較大程度節(jié)省檢測(cè)時(shí)間。

表1 呋蟲(chóng)胺UPLC-MS/MS檢測(cè)條件參數(shù)

1.2.4添加回收試驗(yàn)

分別在空白甜瓜葉片、茄子葉片和棉花葉片樣品中添加一定濃度的呋蟲(chóng)胺標(biāo)準(zhǔn)溶液。在每一樣品中分別添加質(zhì)量濃度為0.01、0.1、1.0 mg/kg的呋蟲(chóng)胺，每個(gè)添加濃度重復(fù)5次，混勻靜置30 min，采用1.2.2章節(jié)所述樣品提取和凈化方法處理，1.2.3章節(jié)所述方法檢測(cè)。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)、線(xiàn)性關(guān)系與基質(zhì)效應(yīng)

按1.2.3章節(jié)所述方法對(duì)呋蟲(chóng)胺標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行測(cè)定，以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)(x)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)見(jiàn)圖2。在0.005～2.0 mg/L時(shí)，呋蟲(chóng)胺標(biāo)準(zhǔn)溶液線(xiàn)性回歸方程Y=81 070x+2 527.2，相關(guān)系數(shù)為R=0.999 2。結(jié)果表明，呋蟲(chóng)胺在0.005～2.0 mg/L范圍內(nèi)具有良好的線(xiàn)性關(guān)系。

基質(zhì)效應(yīng)(ME)=基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)斜率/溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)斜率，當(dāng)ME＞1.1時(shí)，表示存在基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)；ME＜0.9時(shí)，表示基質(zhì)效應(yīng)減弱；0.9＜ME＜1.1時(shí)，基質(zhì)效應(yīng)可以忽略[7]。呋蟲(chóng)胺在各基質(zhì)中線(xiàn)性回歸方程見(jiàn)表2。本試驗(yàn)中，ME(甜瓜葉片)=1.17；ME(茄子葉片)=0.86；ME(棉花葉片)=0.97。因此，棉花葉片對(duì)呋蟲(chóng)胺的基質(zhì)效應(yīng)可以忽略，在進(jìn)一步試驗(yàn)中，對(duì)甜瓜和茄子葉片中呋蟲(chóng)胺的檢測(cè)需引入基質(zhì)匹配外標(biāo)法進(jìn)行校正。

圖2 呋蟲(chóng)胺標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

表2 方法的線(xiàn)性范圍及相關(guān)性

2.2 方法的準(zhǔn)確度與精密度

表3為呋蟲(chóng)胺的添加回收率與相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。由表3可知在0.01～1.0 mg/kg添加濃度范圍內(nèi)，甜瓜葉片中的呋蟲(chóng)胺平均回收率為81%～91%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.55%～7.30%；在茄子葉片樣品中的平均回收率為78%～97%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.17%～5.72%；在棉花葉片中的平均回收率為92%～99%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.41%～6.75%。以最低添加濃度為定量限，呋蟲(chóng)胺在3種基質(zhì)中定量限(LOQ)均為0.01 mg/kg。以上結(jié)果均滿(mǎn)足葉片中對(duì)呋蟲(chóng)胺吸收劑量的檢測(cè)。圖3-5為0.01 mg/kg呋蟲(chóng)胺在3種基質(zhì)中的添加回收色譜圖。

表3 添加回收率與相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

圖3 0.01 mg/kg呋蟲(chóng)胺-甜瓜葉片添加回收色譜圖

圖4 0.01 mg/kg呋蟲(chóng)胺-茄子葉片添加回收色譜圖

圖5 0.01 mg/kg呋蟲(chóng)胺-棉花葉片添加回收色譜圖

3 結(jié) 論

本文建立了甜瓜、茄子和棉花3種作物葉片中呋蟲(chóng)胺的超高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜儀(UPLC-MS/MS)殘留檢測(cè)方法。試驗(yàn)結(jié)果表明，在0.005～2.0 mg/L濃度范圍內(nèi)，呋蟲(chóng)胺峰面積與濃度線(xiàn)性關(guān)系良好。在0.01～1.0 mg/kg添加濃度范圍內(nèi)，3種作物葉片中呋蟲(chóng)胺的平均回收率為78%～99%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.41%～7.30%，定量限(LOQ)為0.01 mg/kg，均符合殘留檢測(cè)要求。該方法快速高效，準(zhǔn)確度高，重復(fù)性好，適用于對(duì)甜瓜、茄子及棉花3種作物葉片中呋蟲(chóng)胺殘留量的檢測(cè)。對(duì)葉片中呋蟲(chóng)胺殘留量的檢測(cè)，為呋蟲(chóng)胺在葉片中的劑量分布與田間藥效的相關(guān)性研究奠定基礎(chǔ)。