張繼偉，牛洺鑫，王鵬思，張 博

（中化化工科學(xué)技術(shù)研究總院有限公司，北京 100083）

氟丙嘧草酯（butafenacil,CAS登錄號(hào)134605-64-4）是先正達(dá)公司開(kāi)發(fā)的非選擇性脲嘧啶類(lèi)除草劑，商品名稱(chēng)Inspire，其混劑Rebin GT為氟丙嘧草酯+草甘膦。試驗(yàn)表明，氟丙嘧草酯作為非選擇性除草劑，對(duì)于某些雜草有優(yōu)異的防效[1]。雖然目前氟丙嘧草酯原藥和相關(guān)制劑還沒(méi)有在國(guó)內(nèi)登記，但是對(duì)原藥的工藝研究和生物活性研究一直在進(jìn)行[2-7]，由此可見(jiàn)，該產(chǎn)品在國(guó)內(nèi)的關(guān)注度較高，未來(lái)有望得以登記并商業(yè)化。本文采用高效液相色譜法對(duì)氟丙嘧草酯原藥的定性、定量分析進(jìn)行了研究，首次公開(kāi)報(bào)道了一種快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的氟丙嘧草酯原藥分析方法，為后期該產(chǎn)品及其相關(guān)制劑配方的分析研究提供理論依據(jù)。

1 試驗(yàn)部分

1.1 材料與試劑

99.0 %氟丙嘧草酯標(biāo)樣（德國(guó) Dr.Ehrenstorfer公司）；水：純凈水（屈臣氏）；乙腈：色譜純（Thermo Fisher）；醋酸：分析純（國(guó)藥集團(tuán)）；氟丙嘧草酯原藥樣品（北京穎泰嘉和生物科技有限公司）。

1.2 儀器與設(shè)備

高效液相色譜儀：安捷倫1200高效液相色譜儀，配有紫外檢測(cè)器和自動(dòng)進(jìn)樣器；色譜柱：Zorbax Eclipse XDB-C18色譜柱(150×4.6 mm,5μm)；超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；0.45 μm有機(jī)相針式過(guò)濾器（津騰）；50 mL容量瓶（北京化玻站有限公司）。

1.3 液相色譜操作條件

流動(dòng)相：乙腈-0.5%醋酸水溶液（體積比60.0∶40.0）；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：272 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣體積：5.0 μL。保留時(shí)間：約6.2 min。氟丙嘧草酯原藥的高效液相色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 氟丙嘧草酯原藥的高效液相色譜圖

1.4 測(cè)定步驟

1.4.1 標(biāo)樣溶液的配制

稱(chēng)取0.05 g氟丙嘧草酯標(biāo)樣（精確至0.000 2 g），置于50 mL容量瓶中，加入適量乙腈，在超聲波清洗器上超聲10 min，使標(biāo)樣全部溶解，冷卻至室溫后，用乙腈準(zhǔn)確定容至標(biāo)線，搖勻，用0.45 μm濾膜過(guò)濾，備用。按照上述方法分別配制標(biāo)樣溶液1和標(biāo)樣溶液2。

1.4.2 試樣溶液的配制

稱(chēng)取0.05 g（精確至0.000 2 g）氟丙嘧草酯原藥試樣，置于50 mL容量瓶中，加入適量乙腈，在超聲波清洗器上超聲10 min，使試樣全部溶解，冷卻至室溫后，用乙腈準(zhǔn)確定容至標(biāo)線，搖勻，用0.45 μm濾膜過(guò)濾，備用。按照上述方法分別配制試樣溶液1和試樣溶液2。

1.5 測(cè)定

在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)進(jìn)數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針?lè)撞蒗?biāo)樣的響應(yīng)值相對(duì)變化小于1.5%后，按照標(biāo)樣溶液1、試樣溶液1、試樣溶液1、標(biāo)樣溶液1、標(biāo)樣溶液2、試樣溶液2、試樣溶液2、標(biāo)樣溶液2的順序進(jìn)行測(cè)定。

1.6 計(jì)算

將測(cè)得的2針試樣溶液中氟丙嘧草酯峰面積以及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中氟丙嘧草酯響應(yīng)因子分別進(jìn)行平均。試樣中氟丙嘧草酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω1（%）按式（1）和（2）計(jì)算：

式中：f為標(biāo)樣溶液中氟丙嘧草酯的響應(yīng)因子；m1為氟丙嘧草酯標(biāo)樣的質(zhì)量，g；A1為標(biāo)樣溶液中氟丙嘧草酯峰面積的平均值；ω1為試樣中氟丙嘧草酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%；A2為試樣溶液中氟丙嘧草酯峰面積的平均值；ω為氟丙嘧草酯標(biāo)樣的純度，%；m2為試樣的質(zhì)量，g。

將試樣溶液1和試樣溶液2中測(cè)得的氟丙嘧草酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)的平均值作為測(cè)定結(jié)果。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

在190～380 nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)，對(duì)氟丙嘧草酯進(jìn)行紫外掃描，得到其相應(yīng)的吸收波長(zhǎng)與響應(yīng)值的紫外吸收光譜圖。發(fā)現(xiàn)氟丙嘧草酯在 272 nm波長(zhǎng)有最大紫外吸收，雜質(zhì)干擾小，且流動(dòng)相無(wú)吸收。因此，綜合考慮多種因素后，將檢測(cè)波長(zhǎng)選定為272 nm。

2.2 流動(dòng)相的選擇

采用安捷倫Zorbax Eclipse XDB-C18(150×4.6 mm,5μm)色譜柱進(jìn)行反相液相色譜分析。依據(jù)氟丙嘧草酯自身的理化性質(zhì)，采用溶解性能較好的乙腈-水體系作為流動(dòng)相。試驗(yàn)結(jié)果表明當(dāng)僅使用乙腈-水體系時(shí)，檢測(cè)峰形有拖尾現(xiàn)象，故在水相中加入了千分之五的醋酸來(lái)調(diào)節(jié)流動(dòng)相pH，以便改善出峰拖尾現(xiàn)象。通過(guò)對(duì)不同配比的乙腈-0.5%的醋酸水體系的分離效果對(duì)比，確定最佳的流動(dòng)相配比為乙腈-0.5%醋酸水體積比60.0∶40.0，流速為1.0 mL/min。此時(shí)，有效成分的保留時(shí)間為6.2 min左右，檢測(cè)峰形尖銳且對(duì)稱(chēng)，沒(méi)有拖尾現(xiàn)象。此方法達(dá)到了快速簡(jiǎn)便分離的要求，是一種理想的氟丙嘧草酯原藥分析方法。

2.3 方法線性相關(guān)性的測(cè)定

以乙腈為溶劑，分別配制質(zhì)量濃度約為0.400g/L、0.700 g/L、1.000 g/L、1.100 g/L、1.300 g/L、1.600 g/L的氟丙嘧草酯標(biāo)樣溶液。按照上述色譜條件，依次進(jìn)行測(cè)定。將測(cè)得的結(jié)果，以進(jìn)樣質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，不同質(zhì)量濃度溶液的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制氟丙嘧草酯的線性相關(guān)曲線。結(jié)果表明：氟丙嘧草酯在0.400～1.600 g/L呈良好的線性關(guān)系，其線性方程為y=5 585.1x+35.178，線性相關(guān)系數(shù)R2為0.999 8。

2.4 方法精密度的測(cè)定

在上述色譜分析條件下，從同一個(gè)氟丙嘧草酯原藥樣品中準(zhǔn)確稱(chēng)取6個(gè)試樣，進(jìn)行平行測(cè)定，考察方法的精密度，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。氟丙嘧草酯的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.11，變異系數(shù)為0.11%。結(jié)果表明該方法的重現(xiàn)性良好，精密度高，能夠滿足定量分析的要求。

表1 精密度試驗(yàn)

2.5 方法準(zhǔn)確度的測(cè)定

準(zhǔn)確稱(chēng)取6個(gè)已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的氟丙嘧草酯原藥樣品，分別加入一定量的氟丙嘧草酯標(biāo)準(zhǔn)品，按照1.3章節(jié)的液相色譜條件測(cè)定待測(cè)樣品中氟丙嘧草酯的質(zhì)量，計(jì)算其回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。氟丙嘧草酯的平均回收率為99.94%。試驗(yàn)結(jié)果表明該方法回收率較好，準(zhǔn)確度高。

3 結(jié) 論

采用反相高效液相色譜法對(duì)氟丙嘧草酯原藥進(jìn)行了定性定量分析。試驗(yàn)結(jié)果表明：該方法簡(jiǎn)單快速，分離效果好，峰形尖銳對(duì)稱(chēng)，線性關(guān)系好，精密度和準(zhǔn)確度高，適用于氟丙嘧草酯原藥的定量分析，也為該產(chǎn)品相關(guān)制劑配方的分析研究提供了參考。