牛改改 ，覃媚 ，游剛 *，張自然 ，郭德軍 ，覃敏敏

1. 北部灣大學(xué)食品工程學(xué)院（欽州 535011）；2. 廣西高校北部灣特色海產(chǎn)品資源開發(fā)與高值化利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北部灣大學(xué)（欽州 535011）

龍眼（Dimocarpus longan Lour.）/荔枝（Litchi chinensis Sonn.）均是無患子科植物，是中國特色水果，主要生長在熱帶亞熱帶地區(qū)[1-2]?！侗静菥V目》中記載“食品以荔枝為貴，而資益以龍眼為良”，認(rèn)為荔枝肉具有“通神、益智、健氣、治瘰疬、瘤贅”的功效；龍眼肉可“開胃健脾，補(bǔ)虛益智”[3]，兩者均是藥食兼用的滋補(bǔ)佳品。龍眼/荔枝肉已被加工成干制品、罐頭、果汁、酒類等產(chǎn)品，在加工和消費(fèi)過程中產(chǎn)生的果核與果殼富含多酚、黃酮等活性物質(zhì)[4-5]，且具有一定藥用價值，這部分資源通常作為廢棄物處理，未得到有效利用，深度開發(fā)利用該資源具有重要意義。

現(xiàn)代研究報(bào)道龍眼/荔枝組織（核、肉、殼）具有抗氧化、抗衰老、抗癌和增強(qiáng)記憶等功效，而這些生理活性與其組織中所含多酚、黃酮類物質(zhì)相關(guān)[6-7]。Gong等[8]從荔枝果皮提取物中分離得到B型和復(fù)合物A/B型表兒茶素三聚體其具有較高抗氧化和抗癌活性；Su等[9]的研究顯示提取溶劑影響荔枝果肉提取物中總酚含量及細(xì)胞抗氧化活性；Prasad等[10]研究荔枝核抗氧化及抗酪氨酸酶活性，發(fā)現(xiàn)其可以作為天然抗氧化劑的來源；Prasad等[11]發(fā)現(xiàn)龍眼殼提取物中的多酚含量較高，且其抗氧化性較強(qiáng)；Zhang等[12]對比分析24個品種龍眼果肉的總酚、類黃酮含量及其抗氧化活性，并發(fā)現(xiàn)總酚和類黃酮含量與抗氧化性呈顯著正相關(guān)；國內(nèi)外研究集中在單一原料活性成分測定及抗氧化活性研究，而將龍眼/荔枝核、肉、殼中活性成分（總酚、總黃酮）含量、清除自由基能力和還原能力系統(tǒng)地對比分析，各指標(biāo)間相關(guān)性的研究均未見報(bào)道。

皮爾森（Person）相關(guān)性分析可分析不同指標(biāo)間相關(guān)性[13]，主成分分析（PCA）可從大量數(shù)據(jù)中提取出最重要信息[14]。試驗(yàn)以龍眼/荔枝核、肉、殼為原料，分別測定其提取物中總酚、總黃酮的含量，通過DPPH·清除率、·OH清除率和還原能力3種方法研究其體外抗氧化活性，并利用Person相關(guān)性和PCA法對活性成分含量與抗氧化性間相關(guān)性進(jìn)行分析。系統(tǒng)性地對比分析龍眼/荔枝組織中活性成分含量與抗氧化活性，以期為綜合利用龍眼/荔枝資源，避免龍眼/荔枝核、殼浪費(fèi)，開發(fā)新型抗氧化抗衰老保健品奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

龍眼（產(chǎn)地：廣西平南縣大新鎮(zhèn)；品種：石硤）；荔枝（產(chǎn)地：廣西靈山縣，品種：妃子笑）。采購后迅速運(yùn)入實(shí)驗(yàn)室，選擇大小一致、無機(jī)械損傷、無病害的全果為原料，將皮、肉、核分離后于50℃低溫下烘至恒重，粉碎過40目篩待用。

福林酚（分析純）、蘆?。▋?yōu)級純）和1, 1-苯基-2-三硝基苯肼（DPPH，分析純）（合肥博美生物科技有限責(zé)任公司）；焦性沒食子酸（優(yōu)級純，廣州新建精細(xì)化工廠）；氫氧化鈉、無水碳酸鈉、硫酸亞鐵和水楊酸等（均為分析純，天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司）。

H 1850離心機(jī)（長沙高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)湘儀離心機(jī)儀器有限公司）；HH-S2數(shù)顯恒溫水浴鍋（江蘇金怡儀器科技有限公司）；UV-1800紫外可見分光光度計(jì)（島津儀器（蘇州）有限公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品制備

參考王蓉蓉等[15]的方法，并稍作修改。準(zhǔn)確稱取5 g樣品于50 mL離心管中，加入25 mL體積分?jǐn)?shù)80%甲醇水溶液，在60 ℃下浸提2 h，以6 000 r/min離心10 min，收集上清液，沉淀用同樣方法重復(fù)提取2次，合并上清液后于45 ℃旋轉(zhuǎn)濃縮蒸干，用80%甲醇水溶液定容至25 mL，用于總酚、總黃酮及抗氧化能力的測定。

1.2.2 總酚含量的測定

采用Folin-Ciocalteu法[16]測定總酚含量。取1 mL待測液，依次添加1 mL福林酚試劑和2 mL 10 g/100 mL Na2CO3溶液，定容至25 mL后于室溫黑暗處反應(yīng)2 h，以80%甲醇水溶液代替樣品溶液作為空白對照，在765 nm處測定吸光度。以焦性沒食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品，結(jié)果以每克樣品中所含焦性沒食子酸當(dāng)量毫克數(shù)計(jì)（mg GAE/g）。

1.2.3 總黃酮含量的測定

采用硝酸鋁-亞硝酸鈉比色法[17]測定總黃酮含量。取1 mL已稀釋5倍的待測溶液，加入0.4 mL 5 g/100 mL NaNO2溶液，搖勻靜置5 min后加入0.4 mL 10 g/100 mL的Al(NO3)3溶液，搖勻靜置5 min，加入5 mL 1 mol/L NaOH，定容至10 mL，搖勻，靜置15 min，以80%甲醇水溶液代替樣品溶液作為空白對照，在510 nm處測定吸光度。以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，結(jié)果以每克樣品中所含蘆丁當(dāng)量毫克數(shù)計(jì)（mg RE/g）。

1.2.4 抗氧化能力的測定

1.2.4.1 DPPH·清除能力的測定

參考Vol[18]的方法，并稍作修改。取2 mL待測溶液，加入2 mL 0.1 mmol/L DPPH溶液（80%甲醇溶解），搖勻后于暗處反應(yīng)30 min，在517 nm下測定吸光度（Ai）；分別吸取2 mL DPPH溶液和80%甲醇于試管中，搖勻后于暗處反應(yīng)30 min，在517 nm下測定吸光度（A0）；取2 mL待測溶液，加入2 mL 80%甲醇搖勻后于暗處反應(yīng)30 min，在517 nm下測定吸光度（Aj）。結(jié)果以DPPH·清除率表示。

1.2.4.2 ·OH清除能力的測定

采用水楊酸法[19]測定。分別吸取1 mL FeSO4（3 mmol/L）和水楊酸-乙醇溶液（3 mmol/L）于試管中，加入3 mL待測溶液，搖勻后加入1 mL 3 mmol/L H2O2，于37 ℃反應(yīng)30 min，于510 nm處測定吸光度（Ai）；以去離子水代替待測液，重復(fù)上述步驟測定吸光度（A0）；不加顯色劑H2O2，重復(fù)上述步驟測定樣品溶液的吸光度（Aj）。結(jié)果以·OH清除率表示。

1.2.4.3 還原能力的測定

采用鐵氰化鉀還原法[20]測定。取2 mL待測液，依次加入0.2 mol/L磷酸緩沖液（pH 6.6）和1 g/100 mL K3[Fe(CN)6]溶液各2 mL，搖勻后于50 ℃水浴20 min，再加入2 mL體積分?jǐn)?shù)10%三氯乙酸，振蕩混勻，以6 000 r/min 離心10 min；取2 mL上清液，加2 mL去離子水和0.5 mL 0.1 g/100 mL FeCl3，搖勻后于700 nm測吸光度（A1）；以2 mL去離子水代替1% K3[Fe(CN)6]溶液，按照上述步驟測吸光度（A0）。還原能力=A1-A0，吸光度越大，還原能力越強(qiáng)。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

采用SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，顯著性水平為p＜0.05，結(jié)果使用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示；采用Origin 9.0作圖；相關(guān)性分析采用Pearson法。

2 結(jié)果與分析

2.1 總酚、總黃酮含量對比分析

龍眼/荔枝核、肉、殼總酚含量見圖1（a）。龍眼/荔枝核、肉、殼總酚含量差異顯著（p＜0.05）。龍眼核總酚含量（15.11±0.12 mg/g）顯著高于龍眼肉（14.17±0.05 mg/g）和龍眼殼（8.17±0.13 mg/g）（p＜0.05），表現(xiàn)為：核＞肉＞殼。荔枝肉（16.36±0.08 mg/g）總酚含量顯著高于荔枝核（15.48±0.15 mg/g）和荔枝殼（9.21±0.16 mg/g）（p＜0.05），表現(xiàn)為：肉＞核＞殼。對比分析表明，荔枝核、肉、殼中總酚含量均顯著高于龍眼對應(yīng)部位（p＜0.05），其中荔枝肉中總酚含量最高，龍眼殼中總酚含量最低。

由圖1（b）可知，龍眼/荔枝核、肉、殼總黃酮含量差異顯著（p＜0.05）。龍眼核中的總黃酮含量（3.07±0.06 mg/g）顯著高于龍眼肉（2.57±0.06 mg/g）和龍眼殼（1.91±0.01 mg/g）（p＜0.05），表現(xiàn)為：核＞肉＞殼。荔枝核中的總黃酮含量（4.08±0.08 mg/g）顯著高于荔枝肉（3.28±0.09 mg/g）和荔枝殼（1.86±0.07 mg/g）（p＜0.05），表現(xiàn)為：核＞肉＞殼。對比分析表明，荔枝的核、肉、殼中的總黃酮含量均顯著高于龍眼對應(yīng)部位（p＜0.05），其中荔枝核中總黃酮含量最高，龍眼殼中總黃酮含量最低。

圖1 龍眼/荔枝核、肉、殼的總酚（a）、總黃酮（b）含量

2.2 DPPH·、·OH清除能力和還原能力對比分析

龍眼/荔枝核、肉、殼提取液對DPPH·清除率如圖2（a）所示。龍眼核、荔枝核和荔枝肉提取液對DPPH·清除率最高，且無顯著性差異（p＞0.05）；龍眼肉的次之；龍眼殼和荔枝殼的最小，且差異不顯著（p＞0.05）。龍眼核對DPPH·清除率（62.11%±1.71%）顯著高于龍眼肉（56.59%±0.90%）和龍眼殼（35.18%±0.88%）（p＜0.05），表現(xiàn)為：核＞肉＞殼。荔枝核對DPPH·清除率（64.42%±2.29%）高于荔枝肉（63.49%±1.11%）和荔枝殼（37.58%±1.10%），表現(xiàn)為：核＞肉＞殼。對比分析表明，荔枝肉對DPPH·清除率顯著高于龍眼肉（p＜0.05），而荔枝核、殼對DPPH·清除率與龍眼對應(yīng)部位相當(dāng)。

龍眼/荔枝核、肉、殼對·OH清除率如圖2（b）所示。荔枝核、龍眼肉、龍眼殼和荔枝殼提取液對·OH清除率差異顯著（p＜0.05）；龍眼核和荔枝肉提取液對·OH清除率差異不顯著（p＞0.05）。龍眼核對·OH清除率（55.77%±0.72%）顯著大于龍眼肉（54.27%±0.46%）和龍眼殼（28.06%±0.43%）（p＜0.05），表現(xiàn)為：核＞肉＞殼。荔枝核對·OH清除率（61.42%±0.79%）顯著大于荔枝肉（55.90%±0.86%）和荔枝殼（22.25%±0.93%）（p＜0.05），表現(xiàn)為：核＞肉＞殼。對比分析表明，荔枝核、肉對·OH清除率均顯著高于龍眼對應(yīng)部位（p＜0.05），而荔枝殼對·OH的清除能力顯著小于龍眼殼（p＜0.05）。

龍眼/荔枝核、肉、殼提取液的還原能力如圖2（c）所示。荔枝/荔枝核、殼提取液的還原能力差異顯著（p＜0.05）；龍眼肉和荔枝肉提取液的還原能力差異不顯著（p＞0.05）。龍眼核的還原能力（A700nm=0.445±0.025）顯著高于龍眼肉（A700nm=0.414±0.010）與龍眼殼（A700nm=0.176±0.012）（p＜0.05），表現(xiàn)為：核＞肉＞殼。荔枝核的還原能力（A700nm=0.504±0.007）顯著大于荔枝肉（A700nm=0.416±0.008）與荔枝殼（A700nm=0.221±0.115）（p＜0.05），表現(xiàn)為：核＞肉＞殼。對比分析表明，荔枝的核和殼的還原能力均顯著高于龍眼對應(yīng)部位（p＜0.05），龍眼/荔枝肉的還原能力無顯著性差異（p＞0.05）。

龍眼/荔枝組織的3個抗氧化指標(biāo)（DPPH·清除率、·OH清除率和還原能力）均表現(xiàn)為核＞肉＞殼，說明龍眼/荔枝核在抗氧化方面具有較強(qiáng)的應(yīng)用價值，其中荔枝核抗氧化能力強(qiáng)于龍眼核，荔枝肉強(qiáng)于龍眼肉，龍眼/荔枝殼的抗氧化能力較弱。

2.3 活性成分含量與抗氧化能力的相關(guān)性分析

為了解荔枝/龍眼組織中活性物質(zhì)含量與抗氧化能力的關(guān)系，對荔枝/龍眼核、肉、殼中總酚、總黃酮含量與DPPH·清除率、·OH清除率、還原能力進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析，結(jié)果見表1。由表1可知，總黃酮含量與DPPH·清除率和還原能力呈極顯著正相關(guān)關(guān)系（p＜0.01），與·OH清除率呈顯著正相關(guān)關(guān)系（p＜0.05）；總酚含量與3個抗氧化指標(biāo)（DPPH·清除率、·OH清除率和還原能力）均呈極顯著正相關(guān)關(guān)系（p＜0.01）；說明荔枝/龍眼組織的抗氧化活性與總酚和總黃酮含量相關(guān)，多酚和黃酮可能是龍眼/荔枝組織抗氧化活性的物質(zhì)基礎(chǔ)，其結(jié)構(gòu)中的鄰位酚羥基易被氧化，且可捕捉活性氧等自由基，進(jìn)而具有較強(qiáng)的抗氧化性，其含量越高，抗氧化性越強(qiáng)[21-22]。王友升等[23]的研究發(fā)現(xiàn)桃果實(shí)中酚類、黃酮類物質(zhì)與抗氧化能力呈顯著正相關(guān)性效應(yīng)，與試驗(yàn)結(jié)果一致。

圖2 龍眼/荔枝核、肉、殼對DPPH·（a）、·OH（b）清除率和還原能力（c）

表1 活性成分含量與抗氧化能力的相關(guān)性分析

2.4 主成分分析

圖3 活性成分含量與抗氧化能力的主成分分析

主成分分析（PCA）可分析解釋多維樣品之間差異，進(jìn)一步獲取樣品的主要影響因素及其相似變量[24]。由圖3可知，第一主成分PC1、第二主成分PC2的貢獻(xiàn)率分別為96.13%和2.52%，累計(jì)貢獻(xiàn)率為98.65%，可代表原始數(shù)據(jù)的信息特征[25]。根據(jù)6種樣品和相關(guān)指標(biāo)在PCA分析圖上的位置可知，荔枝/龍眼肉、核與總酚、總黃酮含量和3個抗氧化指標(biāo)位置相近，分布在第一、第四象限，而荔枝/龍眼殼與活性物質(zhì)含量和3個抗氧化指標(biāo)的位置分布較遠(yuǎn)，表明荔枝/龍眼肉、核與總酚、總黃酮含量和抗氧化性之間具有較強(qiáng)的相關(guān)性，龍眼/荔枝殼與總酚、總黃酮含量和抗氧化性之間相關(guān)性低，這與2.1和2.2研究得出的龍眼/荔枝肉、核的總酚、總黃酮含量較高，抗氧化性較強(qiáng)，龍眼/荔枝殼的總酚、總黃酮含量較低，抗氧化性較差的結(jié)果一致。另外，總酚和總黃酮與抗3個抗氧化性指標(biāo)位置相近，說明樣品中的總酚和總黃酮含量與抗氧化性之間具有較高相關(guān)性，這與Pearson相關(guān)性分析結(jié)果一致。

3 結(jié)論

龍眼/荔枝組織中總酚、總黃酮含量差異顯著（p＜0.05）。龍眼組織的總酚含量表現(xiàn)為核＞肉＞殼，荔枝組織的總酚含量表現(xiàn)為肉＞核＞殼，其總酚含量順序?yàn)槔笾θ猓纠笾耍君堁酆耍君堁廴猓纠笾ぃ君堁蹥?。龍?荔枝組織的總黃酮含量均表現(xiàn)為核＞肉＞殼，其中荔枝核總黃酮含量最高，荔枝肉和龍眼核次之，龍眼殼最低。龍眼/荔枝組織的3個抗氧化指標(biāo)（DPPH·清除率、·OH清除率和還原能力）均表現(xiàn)為核＞肉＞殼，其中荔枝核、肉、殼的抗氧化能力均高于龍眼對應(yīng)部位?？偡?總黃酮含量與3個抗氧化指標(biāo)均呈顯著正相關(guān)關(guān)系（p＜0.05），說明多酚和黃酮可能是龍眼/荔枝組織抗氧化活性的物質(zhì)基礎(chǔ)。

龍眼/荔枝核、肉中總酚、總黃酮含量較高，且具有較強(qiáng)的抗氧化能力，龍眼/荔枝殼亦具有一定的抗氧化活性。為綜合利用龍眼/荔枝資源，可向以龍眼/荔枝核、肉、殼為原料生產(chǎn)抗氧化抗衰老的保健品方向拓展，為龍眼/荔枝核、殼大量浪費(fèi)，果肉開發(fā)渠道單一的現(xiàn)狀提供思路。