楊 建, 何 倩, 馬曉麗, 劉照勝, 阿吉艾克拜爾·艾薩

(1新疆醫(yī)科大學藥學院；2中國科學院大學新疆理化技術研究所，烏魯木齊 830011)

毛菊苣(CichoriumglandulosumBoissetHout)為菊科(Compositae)菊苣屬(Cichorium)植物,主要生長于我國新疆[1-2]。研究表明毛菊苣主要化學成分為倍半萜類[3]、黃酮類[4]、香豆素類[5]、三萜類[6]、生物堿[7]、甾醇[8]等，具有較強的生物活性和藥用價值[9-10]。毛菊苣的根、莖、種子均可入藥[11]，具有利尿消腫、清肝利膽、健胃消食等功效[12-15]。研究發(fā)現毛菊苣中的山萵苣素、山萵苣苦素等倍半萜內酯類成分具有良好的保肝和抗腫瘤活性[16-18]。本研究采用高效液相色譜(HPLC)法測定毛菊苣不同藥用部位中山萵苣素和山萵苣苦素的含量，現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器Waters-e2695型高效液相色譜儀(美國Waters公司)，R1001-VN型旋轉蒸發(fā)儀(鄭州長城科工貿有限公司)，SHB-A型真空泵(鄭州長城科工貿有限公司)，KQ3200DE型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，Model AB-135s型分析天平(瑞士METTLER TOLEDO公司)。

1.2 試藥毛菊苣藥材2017年3月購買于新疆和田地區(qū)墨玉縣，經新疆醫(yī)科大學藥學院天藥教研室胡君萍教授鑒別為菊科(Compositae)菊苣屬(Cichorium)植物毛菊苣(CichoriumglandulosumBoissetHout)的全草，標本保存于中國科學院新疆理化技術研究所。山萵苣素對照品、山萵苣苦素對照品(中國科學院新疆理化技術研究所提供，純度>95%,)，甲醇(美國Sigma公司，色譜純), 甲酸為分析純試劑, 蒸餾水(屈臣氏), 超純水(艾柯超純水)。

2 方法與結果

2.1 樣品溶液的制備分別稱取過40目篩的毛菊苣根莖和種子粉末4.0 g，置于具塞錐形瓶中，加入甲醇40 mL，超聲提取 30 min(功率100 W，頻率50 KHz)，3 000 r/min離心10 min，收集上清液，殘渣按上述方法重復提取1 次，合并2次提取液，減壓濃縮，用甲醇溶解定容至100 mL，即得樣品溶液。

2.2 對照品溶液的制備稱取山萵苣素、山萵苣苦素標準品適量，分別置于5 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到濃度為31.8 μg/mL山萵苣素和濃度為29.4 μg/mL山萵苣苦素對照品溶液，置于4℃冰箱冷藏，備用。

2.3 色譜條件采用Inertial ODS-SP色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動相：甲醇(A)-0.2%甲酸(B)，洗脫梯度：0～10 min，30% A～40% A; 10～20 min，40%～50% A;20～40 min，50%～70% A，流速1.0 mL/min，柱溫30℃，檢測波長254 nm，進樣量10 μL。

2.4 系統(tǒng)適應性實驗按“2.3”項下色譜條件，山萵苣素和山萵苣苦素的保留時間分別為7.25 min 和24.15 min，兩個峰的理論塔板數均>3 000，供試品中兩個色譜峰與其他相鄰峰分離度>1.5，無干擾，表明本色譜條件系統(tǒng)適應性良好，見圖1～3。

圖1 山萵苣素對照品HPLC色譜圖

圖2 山萵苣苦素對照品HPLC色譜圖

圖3 樣品HPLC色譜圖

2.5 回歸方程建立分別吸取“2.2”項下山萵苣素、山萵苣苦素對照品溶液適量，置于 10 mL 量瓶中，用甲醇定容至刻度，分別得到3.18、6.36、15.91、31.81、47.70 μg/ mL系列濃度的山萵苣素溶液和2.94、5.88、7.35、14.70、44.11、73.52 μg/mL系列濃度的山萵苣苦素溶液。按“2.3”項下色譜條件進行測定，記錄峰面積，以峰面積(X)對對照品濃度(Y)進行線性回歸，得到山萵苣素的回歸方程為：Y=18 472X-8 443.9，r=0.999 8，山萵苣素的濃度范圍在3.18～47.70 μg/mL線性關系良好；山萵苣苦素的線性回歸方程為：Y=10 753X-11 112，r=0.999 9, 山萵苣苦素的濃度范圍在2.94～73.50 μg/mL,線性關系良好。

2.6 精密度試驗吸取“2.2”項下山萵苣素、山萵苣苦素對照品溶液各10 μL，按照“2.3”項色譜條件連續(xù)進樣6次，以山萵苣素和山萵苣苦素峰面積進行計算，山萵苣素的RSD為1.2%，山萵苣苦素的 RSD為1.6%，表明本方法精密度良好。

2.7 重復性試驗取同一樣品按“ 2.1” 項方法平行制備6份樣品溶液，按“2.3”項下色譜條件測定，經計算樣品中山萵苣素含量變化的RSD為1.2%，山萵苣苦素含量變化的RSD為1.6%，表明本法重復性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗分別吸取“2.1”項下樣品溶液10 μL，按“2.3”項下色譜條件分別在0、2、4、6、12 h時測定樣品中山萵苣素、山萵苣苦素的含量，以峰面積計，經計算樣品中山萵苣素RSD為3.1%，山萵苣苦素RSD為2.6%，表明樣品在12 h內穩(wěn)定性良好。

2.9 加樣回收率試驗稱取同一批已知含量的毛菊苣藥材9份，分別加入高、中、低劑量的對照品溶液，按“2.1”項下方法制備樣品溶液，按“2.3”項下色譜條件測定山萵苣素、山萵苣苦素含量，經計算山萵苣素和山萵苣苦素的平均回收率分別為100.8%和97.3%，RSD分別為2.5%和3.1%，表明方法準確度良好，見表1、2。

表1 山萵苣素加樣回收率實驗結果

2.10 含量測定分別稱取毛菊苣樣品按“2.1”項下方法制備樣品溶液，按“2.3”項下色譜條件測定，毛菊苣根莖部位中山萵苣素、山萵苣苦素含量分別為0.378 0、0.172 0 mg/g，種子部位中山萵苣素、山萵苣苦素含量0.381 5、0.331 8 mg/g。

表2 山萵苣苦素加樣回收率實驗結果

3 討論

本研究建立了一種HPLC法測定新疆毛菊苣中山萵苣素、山萵苣苦素含量的方法，系統(tǒng)適應性和方法學考察表明，該方法準確、靈敏、重現性好。對新疆毛菊苣根莖及種子部位中山萵苣素、山萵苣苦素進行提取及含量測定，結果表明 2種成分在毛菊苣不同部位中的含量存在差異，山萵苣苦素多存在于毛菊苣的種子中，山萵苣素多存在于毛菊苣的根莖部位，說明毛菊苣不同部位中山萵苣素、山萵苣苦素會隨著生長差異發(fā)生變化，應根據這兩種成分的藥理活性加以區(qū)別,為毛菊苣合理利用及質量評價提供科學依據。