魏巍 曲熙喬 張國梁

(1佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院口腔科，黑龍江 佳木斯 154003;2大興安嶺職業(yè)學(xué)院口腔系；3佳木斯大學(xué)附屬第二醫(yī)院頜面外科)

頭頸部鱗狀細(xì)胞癌(HNSCC)主要出現(xiàn)在口腔、口咽、喉部等部位，是常見癌癥之一，占所有頭部和頸部癌癥的90%以上，主要病因是吸煙、飲酒、吃檳榔和人乳頭狀瘤病毒等相關(guān)的感染〔1〕。全世界每年確診為HNSCC的病例約65萬例，由于該病會(huì)發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，甚至侵犯周圍組織器官，其侵襲性強(qiáng)，因此，只有40%～50% 的患者幸存，且存活率僅為5年〔2〕。常規(guī)療法是手術(shù)切除及術(shù)后的放、化療，免疫新療法在提高生存率方面已經(jīng)備受關(guān)注〔3〕。本研究探討老年口腔鱗狀細(xì)胞癌病理特征與組織細(xì)胞凋亡相關(guān)基因蛋白表達(dá)的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1一般資料 回顧性選取2018年11月至2019年7月佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院老年口腔鱗狀細(xì)胞癌患者124例的手術(shù)切除標(biāo)本為病例組，其中男64例，女60例；年齡61～79歲，平均(69.2±10.4)歲。在病理類型方面，牙齦癌78例，口底癌22例，舌癌12例，口唇癌8例，軟腭癌4例；在病理分級(jí)方面，Ⅰ級(jí)56例，Ⅱ級(jí)50例，Ⅲ級(jí)18例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移26例，無98例。另回顧性選取同期正?？谇火つそ】等巳?2例作為健康組，其中男7例，女5例，年齡62～79歲，平均(70.0±10.6)歲。兩組一般資料比較差異均不顯著(P>0.05)。

1.2納入和排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)年齡≥60歲；(2)均經(jīng)術(shù)后病理檢查確診為口腔鱗狀細(xì)胞癌；(3)均符合口腔鱗狀細(xì)胞癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)〔4〕。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并其他惡性腫瘤；(2)具有較差的依從性；(3)缺乏清晰的意識(shí)。

1.3試劑 購買Santa Cruz Biotechnology公司生產(chǎn)的Bax、Bcl-2單克隆抗體，DAKO公司生產(chǎn)的P53(DO-1)，Vector生產(chǎn)的免疫組織化學(xué)染色(LSAB)試劑盒。

1.4LSAB法免疫組化 切片厚4 μm，Bax、Bcl-2、P53單抗工作濃度均為1∶40，陽性對(duì)照分別為口腔鱗狀細(xì)胞癌組織、涎腺腺樣囊性癌組織、口腔鱗狀細(xì)胞癌組織，陰性對(duì)照均為磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗。

1.5結(jié)果判定 Bax、Bcl-2陽性標(biāo)準(zhǔn)為有棕黃色顆粒出現(xiàn)在胞質(zhì)中，散在分布或呈巢狀、片狀。依據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)、顯色情況分為2個(gè)等級(jí)，如果陽性細(xì)胞數(shù)在3%及以上，則評(píng)定為陽性；如果陽性細(xì)胞數(shù)在3%以下或無陽性細(xì)胞，則評(píng)定為陰性。P53陽性標(biāo)準(zhǔn)為有棕黃色顆粒出現(xiàn)在細(xì)胞核中，陰性標(biāo)準(zhǔn)為無棕黃色顆粒出現(xiàn)在細(xì)胞核中〔5〕。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)和χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

健康組口腔黏膜中有散在陽性細(xì)胞出現(xiàn)在基底層細(xì)胞8例(66.7%)。病例組Bax陽性60例(48.4%)，Ⅰ級(jí)、Ⅲ級(jí)患者的Bax陽性率均顯著低于Ⅱ級(jí)患者(P<0.05)，但Ⅰ級(jí)、Ⅲ級(jí)患者的Bax陽性率之間的差異不顯著(P>0.05)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的Bax陽性率顯著低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者(P<0.05)。病例組Bcl-2陽性60例(48.4%)，Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)患者的Bcl-2陽性率均顯著高于Ⅲ級(jí)患者(P<0.05)，但Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)患者的Bcl-2陽性率之間的差異不顯著(P>0.05)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的Bcl-2陽性率顯著低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者(P<0.05)。病例組P53陽性40例(32.3%)，Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)患者的P53陽性率逐漸升高(P<0.05)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的P53陽性率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者(P<0.05)。見表1。

表1 老年口腔鱗狀細(xì)胞癌患者病理特征與Bax、Bcl-2、p53陽性表達(dá)〔n(%)〕

與Ⅱ級(jí)比較：1)P<0.05；與Ⅲ級(jí)比較：2)P<0.05；與無轉(zhuǎn)移比較：3)P<0.05

3 討 論

細(xì)胞增殖速率、細(xì)胞凋亡相對(duì)比率均決定著腫瘤的發(fā)生發(fā)展。Bax、Bcl-2、P53參與細(xì)胞凋亡的基因調(diào)控。Bax歸屬于Bcl-2家族，在細(xì)胞中能夠和Bcl-2促進(jìn)異二聚體的形成。在信號(hào)刺激細(xì)胞后存活情況的影響因素中，Bax/Bcl-2比值發(fā)揮著關(guān)鍵的決定性作用，細(xì)胞在Bax過度表達(dá)的情況下死亡，在Bcl-2過度表達(dá)的情況下存活，因此臨床普遍認(rèn)為，Bax屬于一種細(xì)胞凋亡促進(jìn)因子。研究表明〔6〕，和異常增生組織相比，口腔鱗癌組織中具有較弱的Bax蛋白表達(dá)。研究表明〔7〕，老年口腔鱗癌組織中Bax陽性率為53.2%，和Bcl-2無相關(guān)性。本研究結(jié)果和上述相關(guān)研究結(jié)果一致，需要臨床進(jìn)一步研究其確切價(jià)值。

Bcl-2屬于一種原癌基因，其基因產(chǎn)物能夠?qū)⒓?xì)胞程序性死亡阻斷，而不對(duì)細(xì)胞增殖造成影響。正常細(xì)胞會(huì)攜帶Bcl-2，增強(qiáng)其表達(dá)的途徑為基因移位或變更。研究表明〔8〕，正?？谇火つど掀せ准?xì)胞中Bcl-2呈散在陽性，口腔鱗癌分化程度和Bcl-2表達(dá)呈顯著的正相關(guān)關(guān)系，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者具有較高的Bcl-2表達(dá)。本研究結(jié)果表明在腫瘤發(fā)生中，Bcl-2基因過度表達(dá)可能是早期事件，Bcl-2表達(dá)對(duì)早期口腔鱗癌細(xì)胞凋亡過程進(jìn)行了抑制。

在對(duì)細(xì)胞凋亡進(jìn)行調(diào)控的基因中，P53基因占有重要地位。野生型P53能夠?yàn)榧?xì)胞凋亡提供良好的前提條件，突變型P53則對(duì)細(xì)胞凋亡進(jìn)行抑制。突變型P53會(huì)將Bcl-2表達(dá)下調(diào)，對(duì)Bcl-2來說是一個(gè)調(diào)控因子。P53過度表達(dá)一方面能夠在蛋白上將Bcl-2表達(dá)下調(diào)，另一方面還能夠在mRNA上將Bcl-2表達(dá)下調(diào)，說明野生型P53能夠在轉(zhuǎn)錄水平上對(duì)Bcl-2進(jìn)行抑制。研究表明〔9〕，正?？谇火つぶ蠵53呈陰性，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、中低分化患者較為常見，P53表達(dá)和Bcl-2表達(dá)呈顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系。研究表明〔10〕，老年口腔鱗癌的發(fā)生、生物學(xué)行為和細(xì)胞凋亡相關(guān)基因Bax、Bcl-2、P53相關(guān)。本研究結(jié)果表明，腫瘤生物學(xué)行為、惡性表型和P53水平呈顯著的正相關(guān)關(guān)系，在老年口腔鱗癌患者預(yù)后的判定中，P53過度表達(dá)可作為預(yù)后不良的腫瘤標(biāo)志物。

綜上，老年口腔鱗狀細(xì)胞癌病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與組織細(xì)胞凋亡相關(guān)基因蛋白表達(dá)密切相關(guān)。