周鵬宇，劉 霄，唐恩應(yīng)，胡映開，鐘紹麗，楊國榮，尹革芬， 開興

（1. 云南農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650201；2. 瑞麗市畜牧站，云南 瑞麗 678600；3. 云南省肉牛工程技術(shù)研究中心，云南昆明 650212；4. 云南省草地動(dòng)物科學(xué)研究院，云南昆明 650212）

牛奶是營養(yǎng)比較全面、最容易被人體所吸收的食品之一，但近年來牛奶污染事件頻發(fā)，牛奶制品中的抗生素殘留問題也逐漸成為全社會(huì)共同關(guān)注的公共衛(wèi)生問題。牛奶抗生素殘留是指在對奶牛使用藥物治療后或者以其他方式造成鮮奶的抗生素污染，導(dǎo)致抗生素以藥物原型的形式在牛奶中出現(xiàn)。長期飲用含有低劑量抗生素的牛奶對人體的危害是多方面，例如動(dòng)物機(jī)體在反復(fù)接觸某一類抗生素后，體內(nèi)的敏感菌株將受到選擇性抑制，細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性，使疾病治療變得困難，也能引起大腸桿菌耐藥菌株的產(chǎn)生。經(jīng)常食用一些含低劑量抗生素的牛奶還能使過敏性個(gè)體出現(xiàn)過敏反應(yīng)，這些藥物包括青霉素、四環(huán)素，以及某些氨基糖苷類抗生素等，嚴(yán)重者引起休克、喉頭水腫、呼吸困難等嚴(yán)重癥狀，而青霉素引起的變態(tài)反應(yīng)，輕者表現(xiàn)為接觸性皮炎和皮膚反應(yīng)，嚴(yán)重者表現(xiàn)為致死性過敏性休克；鏈霉素對腦神經(jīng)有明顯毒性作用，易引起耳聾。

為保證上市食用牛奶的質(zhì)量，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部于2003 年5 月發(fā)布《獸藥停藥期規(guī)定》對牛使用的停藥期分別為土霉素7 d，棄奶期3 d；四環(huán)素12 d，產(chǎn)奶期禁用注射用青霉素鈉，棄奶期3 d；磺胺二甲基嘧啶注射液28 d。牛奶中抗生素殘留主要原因有4 個(gè)：①非治療目的用藥；②治療目的用藥；③非法人為摻雜；④擠奶器械污染[1]。不同給藥途徑和劑量會(huì)造成不同程度的抗生素殘留[2]，為確保原料乳和乳制品中抗生素殘留量符合抗生素最大殘留限制要求，乳牛場、乳制品廠、政府監(jiān)督部門都在努力探索準(zhǔn)確可行的抗生素檢測方法，許多大型化學(xué)試劑和儀器公司也致力于開發(fā)抗生素殘留量的檢測方法和儀器。牛奶中抗生素殘留的檢測方法主要有微生物檢測法、理化檢測法、免疫學(xué)分析法[3-5]。實(shí)際上，通常應(yīng)根據(jù)測定目標(biāo)來選擇不同的方法[6-10]，Delvotest為最著名的微生物抑制法測定抗生素檢測法，為了使此類試驗(yàn)更加操作易行，荷蘭Gist-brocades BV 公司開發(fā)了Delvotest-P，Delvotest-SP，Del-votest cowtest，Delvotest-MCS 檢測系列，而Delvotest cowtest適合奶牛場水平使用。為了解昆明市鮮牛奶中抗生素殘留情況，試驗(yàn)采用價(jià)格低廉、操作簡單、靈敏度高、重復(fù)性好的Delvotest SP 試劑盒對奶牛場現(xiàn)采鮮乳進(jìn)行抗生素殘留檢測，促進(jìn)昆明地區(qū)奶牛養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，利于促進(jìn)消費(fèi)者健康和奶制品生產(chǎn)安全具有現(xiàn)實(shí)的社會(huì)意義。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供測奶樣

試驗(yàn)于2016—2017 年3 次對昆明市3 家規(guī)?；膛ｐB(yǎng)殖場和3 家合作奶牛養(yǎng)殖場進(jìn)行了現(xiàn)場采鮮乳的抗生素殘留檢測。

供測奶樣來源見表1。

表1 供測奶樣來源/個(gè)

1.1.2 儀器和設(shè)備

采樣管、冰箱、立式高壓蒸汽滅菌器、數(shù)顯恒溫水浴鍋等。

1.1.3 試劑

戴爾沃特快速檢測試劑盒（Delvotest SP NT），荷蘭DSM Gist-brocades 公司提供。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 調(diào)查問卷制作

通過前期對文獻(xiàn)的查閱與實(shí)地考察，確定調(diào)查問卷項(xiàng)目主要包括飼養(yǎng)管理人員受教育程度、奶牛場常用抗生素種類、患病奶牛的管理和治療期奶牛乳汁的處理等。

1.2.2 鮮牛奶中抗生素殘留的檢測

（1） 樣品采集。要求著裝為消毒服裝；如果奶缸沒有專用的攪拌機(jī)器，用專用清潔的奶耙上下攪動(dòng)25 次以上，使罐內(nèi)牛奶充分混合均勻，通過專用取樣勺取奶罐中部奶樣。

取奶樣時(shí)先用牛奶將采樣杯潤洗2 次，再取樣250 mL。對規(guī)?；膛ｐB(yǎng)殖場從奶缸中取1 份樣品，對奶牛合作養(yǎng)殖場每戶取1 份奶樣，共計(jì)采樣333 份。

（2） 樣品檢測與結(jié)果判定。采用戴爾沃快速檢測法，檢測原理是利用微生物-嗜熱芽孢菌在64 ℃條件下培養(yǎng)2.5～3.0 h 后會(huì)產(chǎn)酸，酸引起指示劑BCP（溴甲酚紫） 變?yōu)辄S色；若牛奶樣品中不含抗生素，培養(yǎng)后樣品呈黃色，如樣品中含有抗生素，嗜熱芽孢菌生長受到抑制而無法產(chǎn)酸，指示劑不會(huì)變色。按試劑說明書進(jìn)行操作和結(jié)果判定：在白色背景前觀察，如果底部2/3 固體介質(zhì)是黃色，則為陰性；如果底部2/3 固體介質(zhì)是紫色，則為陽性；最終判定結(jié)果時(shí)與陰性、陽性對照管顏色作對比，如果陰性、陽性管顯色不吻合，需重新檢測。

1.3 數(shù)據(jù)分析與處理

采用SPSS 16.0 軟件中t 檢驗(yàn)和x2檢驗(yàn)對試驗(yàn)數(shù)據(jù)作分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 問卷調(diào)查統(tǒng)計(jì)與分析

調(diào)查共走訪3 個(gè)規(guī)?；膛ｐB(yǎng)殖場和99 個(gè)合作社奶牛養(yǎng)殖場生產(chǎn)管理人員共102 人。

規(guī)模化奶牛養(yǎng)殖場調(diào)查問卷見表2，合作奶牛養(yǎng)殖場調(diào)查問卷見表3。

由表2 和表3 看出，規(guī)?；膛錾a(chǎn)管理人員均接受過專業(yè)教育，具備一定的專業(yè)知識(shí)，在藥物使用及患病動(dòng)物管理等方面處理措施相對合理；而合作社生產(chǎn)管理人員受教育程度多為初中以下，基本未接受過專業(yè)技能教育，生產(chǎn)管理多憑經(jīng)驗(yàn)，在用藥和病畜處理等方面缺乏系統(tǒng)管理。

2.2 抗生素殘留

2016—2017 年分3 次對昆明地區(qū)3 家規(guī)?；膛龊? 家奶牛合作社養(yǎng)殖場進(jìn)行生鮮牛乳的抗生素殘留檢測，3 家規(guī)?；膛ｐB(yǎng)殖場3 次共抽檢樣品36 份，均未檢測出抗生素殘留，陽性率為0。

規(guī)模化奶牛場抗生素殘留見表4。

3 家合作社奶牛養(yǎng)殖場3 次共抽檢297 份，除合作社D 第1 次未檢測出抗生素殘留外，其余均檢出抗生素殘留。合作社D，E，F(xiàn) 陽性率分別為22.67%，18.52%和10.12%，平均陽性率為14.81%。

表2 規(guī)?；膛ｐB(yǎng)殖場調(diào)查問卷

表3 合作奶牛養(yǎng)殖場調(diào)查問卷

表4 規(guī)模化奶牛場抗生素殘留

合作社奶牛場抗生素殘留見表5。

2.3 不同飼養(yǎng)管理方式對鮮牛乳抗生素殘留的影響

3 家規(guī)模化奶牛養(yǎng)殖場共計(jì)36 份樣品中未檢測到抗生素陽性樣本，陽性率為0%，3 家奶牛養(yǎng)殖合作社共計(jì)297 份樣品中有44 份抗生素陽性，陽性率為14.81%。不同養(yǎng)殖模式下抗生素殘留情況差異明顯，3 次規(guī)?；瘓鰴z出率為0%，嚴(yán)格遵照國家休藥期規(guī)定、抗生素殘留未檢出陽性樣品。

不同飼養(yǎng)管理方式對鮮乳中抗生素殘留的影響見表6。

表5 合作社奶牛場抗生素殘留

3 討論

（1） 通過問卷調(diào)查發(fā)現(xiàn)，合作社生產(chǎn)管理人員受教育程度多為初中以下，基本未接受過專業(yè)技能教育和培訓(xùn)，生產(chǎn)管理多憑經(jīng)驗(yàn)，在用藥和病畜處理等方面缺乏系統(tǒng)管理；奶牛群得不到良好的管理，導(dǎo)致奶牛疾病頻發(fā)；由于不具備良好的藥理藥物知識(shí)，對休藥期把握不準(zhǔn)，對國家獸藥方面的法規(guī)基本不了解，飼養(yǎng)管理僅憑經(jīng)驗(yàn)。規(guī)?；膛ｐB(yǎng)殖場生產(chǎn)管理人員均接受過專業(yè)教育，具備一定的專業(yè)知識(shí)，在藥物使用及患病動(dòng)物管理等方面處理措施相對合理，能嚴(yán)格遵照國家抗生素休藥期規(guī)定、抗生素殘留未發(fā)現(xiàn)陽性樣品。

表6 不同飼養(yǎng)管理方式對鮮乳中抗生素殘留的影響

（2） 奶牛養(yǎng)殖合作社多為近些年來發(fā)展起來的農(nóng)村養(yǎng)殖集體，為多個(gè)養(yǎng)殖戶集中養(yǎng)殖，各養(yǎng)殖戶各自為陣、管理比較混亂。一些農(nóng)戶存欄頭數(shù)較少，自身抵抗風(fēng)險(xiǎn)的能力低，在奶牛發(fā)病后，沒有承受將“有抗奶”棄掉的經(jīng)濟(jì)能力，仍將奶牛牽去集中擠奶交售；有時(shí)擠奶缸清洗不干凈，也會(huì)導(dǎo)致抗生素殘留或交互污染。規(guī)?；膛瞿膛４鏅跀?shù)較多，飼養(yǎng)員或獸醫(yī)會(huì)將患病奶牛分圈飼養(yǎng)，并做好治療記錄。在擠奶時(shí)首先將全部健康牛擠完后，治療期奶牛才上機(jī)擠奶，并且進(jìn)入一個(gè)專門的有抗奶缸，再由擠奶工仔細(xì)清洗并消毒擠奶設(shè)備，有效杜絕了“有抗奶”。

（3） 從不同城市牛奶抗生素殘留調(diào)查看，不管是市售生鮮奶還是巴氏消毒牛奶，抗生素殘留情況都比較嚴(yán)重。寧鵬[11]利用TTC 法對抗生素殘留檢測，西寧市個(gè)體飼養(yǎng)奶牛的鮮牛奶陽性率為6.15%（15/244）。馬群飛等人[12]報(bào)道福建省鮮奶抗生素殘留檢出率陽性率為19.77%（17/86）。楊慶文等人[13]檢測發(fā)現(xiàn)昆明市零售點(diǎn)市售不同包裝的鮮乳抗生素殘留陽性率為16.67%（18/108），而227 mL 小包裝消毒鮮牛乳較高，為38.46%（15/39）。趙杰等人[14]對貴陽市超市袋裝奶和市郊散賣牛奶的檢出陽性率為1.67%（1/60）。鄧斌等人[8]對云南省市售鮮牛奶和巴氏消毒奶作調(diào)查，檢出率最高的是頭孢氨芐45.31%，其次是青霉素達(dá)35.94%。從超標(biāo)的情況看，超標(biāo)率達(dá)10%以上的藥物有10 種，超標(biāo)率20%以上的藥物有8 種。牛奶中殘留的抗生素主要為青霉素和磺胺類藥物，其中頭孢氨芐和青霉素殘留最為嚴(yán)重。因此，加強(qiáng)鮮牛奶和乳制品的監(jiān)管應(yīng)該更細(xì)化，精確到各類抗生素，確保乳品安全[15]。

4 結(jié)論

（1） 奶牛養(yǎng)殖合作社相對規(guī)模化奶牛養(yǎng)殖場管理混亂，生產(chǎn)管理人員文化水平偏低，各戶各自為政，難以有效防止抗生素殘留。

（2） 昆明市鮮乳存在抗生素殘留，檢出率13.21%，不同飼養(yǎng)管理模式對抗生素殘留具有明顯影響，抗生素殘留主要來自于奶牛合作社，規(guī)模化養(yǎng)殖場較為規(guī)范，調(diào)查中未發(fā)現(xiàn)陽性乳。