閆曉娟 班永剛

(1.陜西省商洛市中心血站檢驗(yàn)科，陜西 商洛 726000；2.陜西省榆林市中心血站質(zhì)管科，陜西 榆林 719000)

乙型病毒性肝炎主要是由乙型肝炎病毒感染所引起，最終會(huì)導(dǎo)致肝臟細(xì)胞壞死以及纖維化，部分病患還可出現(xiàn)肝硬化以及肝癌[1-2]。慢性乙肝病患、急性乙肝病患以及乙型肝炎病毒攜帶者為主要傳染源，血站對(duì)所有采集的血液進(jìn)行乙肝表面抗原的酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)和核酸檢測(cè),防止受血者出現(xiàn)乙肝病毒感染情況[3-4]。本研究分析血站乙肝病毒采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)以及核酸檢測(cè)效果差異，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2018年1月至2019年1月本血站血液標(biāo)本乙肝病毒篩查的獻(xiàn)血者22 456例。獻(xiàn)血者中男11 230例，女11 226例；年齡30～50歲，平均(40.22±5.16)歲。

1.2方法 獻(xiàn)血者均與采集的血液同源留取兩管血液標(biāo)本，各5 mL,其中一管為EDTA.K2抗凝真空管,用于酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)；一管為分離膠抗凝真空管,用于核酸檢測(cè)。所有標(biāo)本采集后檢測(cè)前均需保存在2～8 ℃的冰箱內(nèi)，核酸標(biāo)本需在4 h內(nèi)離心，72 h內(nèi)完成檢測(cè)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)乙肝表面抗原，室內(nèi)質(zhì)控品使用康徹思坦生物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。初檢使用北京萬(wàn)泰試劑，使用TECAN Freedom EVO clinical全自動(dòng)加樣系統(tǒng)進(jìn)行酶免加樣，西門子BEPⅢ全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)。復(fù)檢使用廈門新創(chuàng)試劑，使用TECAN Freedom EVO clinical全自動(dòng)加樣系統(tǒng)進(jìn)行酶免加樣，F(xiàn)AME 24/20全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)。酶免試驗(yàn)兩遍檢測(cè)均無(wú)反應(yīng)性標(biāo)本，進(jìn)行核酸檢測(cè)。核酸檢測(cè)乙肝病毒，試劑與設(shè)備使用羅氏cobas s 201核酸檢測(cè)系統(tǒng)，采用6混樣的檢測(cè)模式?；鞓佑蟹磻?yīng)性標(biāo)本進(jìn)行拆分檢測(cè)，拆分有反應(yīng)性標(biāo)本判定為有反應(yīng)性。室內(nèi)質(zhì)控品使用康徹思坦生物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。所有試驗(yàn)操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)。酶聯(lián)免疫檢測(cè)和核酸檢測(cè)項(xiàng)目均參加了國(guó)家衛(wèi)健委臨檢中心室間質(zhì)評(píng)，且室間質(zhì)評(píng)結(jié)果均合格。

1.3觀察指標(biāo) (1)觀察酶聯(lián)免疫吸附法以及核酸檢測(cè)法陽(yáng)性檢出率。(2)比較兩種檢查方式窗口期以及漏診率。

2 結(jié) 果

2.1陽(yáng)性率比較 22 456例獻(xiàn)血者經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)后117例為乙肝表面抗原陽(yáng)性，診斷陽(yáng)性率0.52%；核酸檢測(cè)顯示149例診斷為HBV-DNA陽(yáng)性，診斷陽(yáng)性率0.66%；兩種檢測(cè)方式乙肝病毒陽(yáng)性診斷率存在顯著差異(χ2=3.873，P<0.05)。

2.2窗口期以及漏診率比較 酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)表面抗原窗口期是(30.89±1.06)d，核酸檢測(cè)法檢測(cè)乙肝病毒窗口期是(25.21±1.01)d，兩種檢查方式窗口期比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=581.343，P<0.05)。酶聯(lián)免疫吸附法漏診率是0.07%(15/22 456)，核酸檢測(cè)法漏診率是0.02%(5/22 456)，兩種檢查方漏診率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.002，P<0.05)。

3 討 論

乙肝病毒DNA是乙肝病毒的脫氧核糖核酸，是乙肝病毒感染最直接、敏感度高以及特異性腔的指標(biāo)，若檢測(cè)結(jié)果顯示乙肝病毒DNA呈陽(yáng)性，則表示乙肝病毒可復(fù)制，且具有傳染性，并且乙肝病毒DNA水平越高則代表病患復(fù)制速度越快，傳染性越強(qiáng)[5]。酶聯(lián)免疫吸附法主要是通過(guò)將相應(yīng)抗原或抗體固定在某一載體表面，并且可長(zhǎng)期保持其蛋白免疫活性，再將某種特定酶置于抗體或抗原上，一方面可保持抗體或抗原活性，另一方面也可保留酶特定生物活性[6]。研究[7]認(rèn)為對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者聯(lián)合使用酶聯(lián)免疫吸附法以及核酸檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，可提升乙肝病毒篩查效果，從而避免通過(guò)血液傳播乙肝病毒。

采用酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行表面抗原檢測(cè)，可發(fā)揮一定診斷效果，但酶聯(lián)免疫吸附法操作方法較復(fù)雜，反復(fù)操作性較差，并且大多數(shù)酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒僅可實(shí)施定性檢測(cè)，若需實(shí)施定量檢測(cè)則成本較高，并且其窗口期較長(zhǎng)，不利于臨床篩查[8]。核酸是病毒基因存儲(chǔ)部位，病毒主要通過(guò)核酸進(jìn)行復(fù)制。核酸檢測(cè)是目前臨床準(zhǔn)確性最高以及靈敏度最高的檢測(cè)方式，可通過(guò)觀察熒光信號(hào)收集檢測(cè)結(jié)果，有效避免酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)局限性，從而降低漏診率。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，核酸檢測(cè)檢測(cè)陽(yáng)性率高于酶聯(lián)免疫吸附法(χ2=3.873，P<0.05)。核酸檢測(cè)法窗口期、漏診率低于酶聯(lián)免疫吸附法(P<0.05)。核酸檢測(cè)主要是對(duì)人體病毒的核酸進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)環(huán)境以及檢測(cè)者技術(shù)水平要求較高，并且為避免出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果，對(duì)血液樣本的保存條件以及處理措施也同樣有較高要求[9]。觀察其檢測(cè)結(jié)果可直接、有效反應(yīng)被檢測(cè)者是否存在乙肝病毒感染情況，同時(shí)還可了解乙肝病毒病患血清中病毒量，為臨床治療方案的制定以及治療效果的判斷提供數(shù)據(jù)支持[10]。