張卓新

焦作市中心血站，河南焦作 545000

核酸檢測(cè)（NAT）技術(shù)對(duì)獻(xiàn)血者血液標(biāo)本進(jìn)行篩查，是提高血液安全性的重要舉措。NAT 是使用物理、化學(xué)和生物學(xué)的方法，通過靶核酸擴(kuò)增的方法，將極微量的核酸轉(zhuǎn)變成直觀的光電或可視信號(hào)，從而判斷是否存在病原體[1]。該方法敏感度極高，可檢測(cè)出極微量的核酸，大大縮短了“窗口期”，是血清學(xué)檢驗(yàn)的一項(xiàng)必不可少的補(bǔ)充性檢測(cè)方法。但由于核酸檢測(cè)試劑較為昂貴，提高了血液檢測(cè)的成本，為血站正常運(yùn)營(yíng)增加了較大壓力，因此，只有科學(xué)合理地運(yùn)用才能降低試劑的損耗，提高試劑利用率，降低檢測(cè)成本[2]。如何對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)控，減少試劑的損耗，也是目前亟待解決的問題。

該站作為河南省無償獻(xiàn)血者核酸集中化檢測(cè)單位之一，承擔(dān)了濟(jì)源血站無償獻(xiàn)血者核酸標(biāo)本的檢測(cè)，目前配置了浩源和華益美兩個(gè)廠家的核酸檢測(cè)系統(tǒng)，現(xiàn)就二者的試劑使用情況進(jìn)行分析，對(duì)2018 年1 月—2019 年7 月焦作和濟(jì)源地區(qū)共104 981 份無償獻(xiàn)血者血液核酸標(biāo)本進(jìn)行研究，報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

該站檢測(cè)焦作和濟(jì)源地區(qū)無償獻(xiàn)血者血液核酸標(biāo)本共104 981 份，除了室間質(zhì)評(píng)標(biāo)本、部分單采血小板、環(huán)境監(jiān)測(cè)、追蹤等標(biāo)本進(jìn)行單檢檢測(cè)，其余標(biāo)本均采用8 混樣檢測(cè)，其中用浩源系統(tǒng)檢測(cè)65 739 份，用華益美系統(tǒng)檢測(cè)39 242 份。核酸標(biāo)本采用無菌帶分離膠抗凝（EDTA-K2）核酸檢測(cè)專用真空試管，留取5 mL 全血標(biāo)本供核酸檢測(cè)。

1.2 試劑

HBV-DNA、HCV RNA、HIV-1RNA 核酸檢測(cè)試劑盒（PCR 熒光法）（上海浩源生物科技有限公司）、HBV-DNA、HCV-RNA、HIV-（1+2 型）RNA 核酸檢測(cè)試劑盒（蘇州華益美生物科技有限公司），兩家核酸試劑均有生產(chǎn)廠家提供的出廠質(zhì)量檢驗(yàn)報(bào)告合格證明試劑，均在有效期內(nèi)使用。所有檢測(cè)操作嚴(yán)格參照儀器以及試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 主要儀器

ChiTaS BSS1200 全自動(dòng)核酸純化儀，Ampli STAR STD 全自動(dòng)核酸提取純化儀，ABI7500 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 系統(tǒng)，TDL5B 臺(tái)式大容量低溫離心機(jī)，生物安全柜BSC-1500ⅡB2-X，生物安全柜HR40-ⅡA2，全自動(dòng)加蓋機(jī)APS-C，全自動(dòng)開蓋機(jī)KG-12L 等。

1.4 方法

統(tǒng)計(jì) 2018 年 1 月—2019 年7 月份浩源與華益美核酸試劑各自檢測(cè)人份數(shù)、試劑使用量，將各自的實(shí)際檢測(cè)人份數(shù)與理論檢測(cè)人份數(shù)對(duì)比，可得出試劑利用率，分析兩套核酸檢測(cè)試劑的使用情況。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 18.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料用（±s）表示，采用 t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用百分比（%）表示，采用 χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2018 年1 月—2019 年7 月浩源及華益美核酸試劑檢測(cè)人份數(shù)、試劑使用量、試劑利用率

兩家試劑的利用率大致相近，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 2018 年1 月—2019 年7 月浩源及華益美核酸試劑檢測(cè)情況

2.2 2018 年1 月—2019 年7 月室間質(zhì)評(píng)、單采血小板、環(huán)境監(jiān)測(cè)、追蹤的單檢用量及占總用量百分比

室間質(zhì)評(píng)、單采血小板、環(huán)境監(jiān)測(cè)、追蹤等標(biāo)本直接單檢，所占試劑用量百分比較低，見表2。

表2 2018 年1 月—2019 年7 月兩家試劑用量及占總用量百分比

3 討論

傳統(tǒng)血液篩查方法有一定弊端，因傳統(tǒng)ELISA 方法不僅具有較長(zhǎng)窗口期，同時(shí)靈敏度較低，且很大一部分是單試劑不合格，尤其是在HbsAg 與抗-HIV2 項(xiàng)不合格結(jié)果中，造成了血液安全性低與報(bào)廢率增加的不良結(jié)果[3]。歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家與地區(qū)已經(jīng)將核酸檢測(cè)當(dāng)作常規(guī)的血液篩查，因其靈敏度和特異度均較高，血傳播疾病的傳播率大大降低。國(guó)內(nèi)有關(guān)文獻(xiàn)也報(bào)道，通過NAT 檢測(cè)能縮短窗口期，進(jìn)而降低HBV、HIV 以及HCV 傳播風(fēng)險(xiǎn)，提升血液安全性[4]。而自動(dòng)化NAT 系統(tǒng)其試劑價(jià)格較高，如何在確保檢測(cè)質(zhì)量的前提下降低檢測(cè)成本，提高試劑的利用率，是目前相關(guān)研究人員較為關(guān)注的問題。我國(guó)依據(jù)有關(guān)規(guī)定逐漸開展了核酸檢測(cè)，但受資金和人員等因素影響，暫未納入常規(guī)篩查方法，只有部分國(guó)內(nèi)血站開始試點(diǎn)核酸篩查法，以進(jìn)一步降低輸血風(fēng)險(xiǎn)。只有科學(xué)利用試劑，節(jié)約成本，提升檢測(cè)的利用率，才能確保核酸檢測(cè)更好地開展[5-6]。另外，由于NAT 檢測(cè)對(duì)試劑的存放條件和時(shí)間均有較高的要求，因此掌握試劑未能完全使用的原因，并提出相對(duì)的對(duì)策，在提高試劑利用率方面具有重要意義。

由表1 可以看出，兩家試劑的試劑利用率大致相近（P＞0.05），表2 顯示，室間質(zhì)評(píng)、單采血小板、環(huán)境監(jiān)測(cè)、追蹤等標(biāo)本直接單檢，所占試劑用量百分比較低，除這些單檢造成的試劑用量之外，影響兩家試劑利用率的共同原因，分析主要有以下幾個(gè)方面：①實(shí)驗(yàn)過程中，實(shí)驗(yàn)人員的操作不夠嚴(yán)謹(jǐn)，如擺放耗材時(shí)觀察不細(xì)致，或耗材碰觸到污染區(qū)域，造成耗材的污染；手和胳膊從已開封的試劑上方經(jīng)過，易污染試劑，導(dǎo)致混檢陽性率增高，拆分頻次及數(shù)量增加，試劑利用率下降。②實(shí)驗(yàn)結(jié)束后的消毒滅菌工作不夠細(xì)致，消毒劑的配制偏少，對(duì)儀器表面、實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面、地面的擦拭消毒不夠徹底，75%酒精噴淋不夠密集，對(duì)空氣中的氣溶膠沉降效果差，造成氣溶膠的擴(kuò)散、殘留、集聚，導(dǎo)致隨后的實(shí)驗(yàn)混檢陽性率增高，從而造成試劑的浪費(fèi)[7-8]。③設(shè)備儀器出現(xiàn)故障，造成試劑損耗量增加。

就浩源試劑單獨(dú)來講，影響試劑利用率的還有一個(gè)特殊的因素，就是浩源試劑已預(yù)分裝好，一盒試劑6 條，48 個(gè)測(cè)試，1 條8 個(gè) POOL，實(shí)際工作中，很難做到每次標(biāo)本檢測(cè)量恰好整條，為了保證血液標(biāo)本的檢測(cè)報(bào)告及時(shí)發(fā)布，不可避免地會(huì)浪費(fèi)幾個(gè)POOL 的試劑，導(dǎo)致試劑利用率下降。

華益美試劑是根據(jù)標(biāo)本檢測(cè)量臨用前配制的，從理論上來講試劑有效使用率應(yīng)該會(huì)高，但實(shí)際工作中發(fā)現(xiàn)試劑有效使用率并不是十分理想，分析原因可能為：①為了節(jié)約試劑，實(shí)驗(yàn)后剩余的試劑是要回收的，試劑存在被污染的風(fēng)險(xiǎn)；②華益美檢測(cè)設(shè)備的加樣、磁珠的攪拌混勻、核酸模板提取以及反應(yīng)液的添加都在同一區(qū)域中，節(jié)省了空間，但會(huì)導(dǎo)致局部氣溶膠濃度升高，氣溶膠污染的風(fēng)險(xiǎn)較高；③設(shè)備本身不帶紫外消毒燈，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后的殺菌消毒效果可能不是非常理想，難以對(duì)設(shè)備的各種縫隙進(jìn)行有效的清潔消毒；④華益美核酸檢測(cè)系統(tǒng)是該站第二個(gè)核酸實(shí)驗(yàn)室，空間相對(duì)狹小，空調(diào)出風(fēng)口位于核酸檢測(cè)設(shè)備上方，空調(diào)出風(fēng)可能對(duì)實(shí)驗(yàn)室氣流有一定影響，干擾新風(fēng)系統(tǒng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室空氣的循環(huán)凈化作用，從而造成混檢反應(yīng)率增高，試劑利用率下降。

綜上所述，血站核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室為了控制檢測(cè)成本，減少試劑損耗，在今后的工作過程中應(yīng)在以下幾方面加以改進(jìn)：①加強(qiáng)培訓(xùn)，提高核酸實(shí)驗(yàn)室工作人員的素質(zhì)與技能，提高檢測(cè)人員操作的熟練度和標(biāo)本管理能力。②嚴(yán)格按照消毒滅菌標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程對(duì)實(shí)驗(yàn)室清潔消毒，降低外部污染造成的試劑損耗。③對(duì)于浩源檢測(cè)系統(tǒng)，在不影響獻(xiàn)血者血液檢測(cè)進(jìn)程的情況下，可以盡量湊足整條使用，減少試劑浪費(fèi)損耗。④對(duì)于華益美檢測(cè)系統(tǒng)，實(shí)驗(yàn)室溫濕度適宜的情況下，減少甚至不用空調(diào)，做好日常消毒的同時(shí)，每周用紫外燈消毒車對(duì)儀器內(nèi)部進(jìn)行照射消毒，降低設(shè)備內(nèi)部的氣溶膠集聚粘附的概率。通過以上措施，盡可能避免環(huán)境、人為因素對(duì)檢測(cè)的影響，提高核酸試劑利用率，降低檢測(cè)成本，對(duì)于保障血站正常運(yùn)行具有重要意義。⑤實(shí)驗(yàn)室人員需做好儀器的日常維護(hù)工作，并做好試劑和標(biāo)本的管理工作，例如嚴(yán)格保證標(biāo)本的有效性，避免標(biāo)本質(zhì)量對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，提高檢測(cè)成功率； 常規(guī)檢測(cè)壓力儀能提前預(yù)知到壓力泵問題，避免因壓力泵問題造成的實(shí)驗(yàn)無效。定時(shí)儀器維護(hù)還能有效防止管道堵塞出現(xiàn)。此外，還能阻止灰塵進(jìn)入到機(jī)器中，減少機(jī)器硬件故障出現(xiàn)，減緩儀器老化與各部件損耗[9-10]。⑥深入分析每次試劑損耗的原因，吸取經(jīng)驗(yàn)，并建立起防止類似問題出現(xiàn)的措施，經(jīng)每次全面深入分析，不斷總結(jié)，不斷提高，獲取寶貴經(jīng)驗(yàn)。⑦因NAT檢測(cè)過程非常精密，在檢測(cè)過程中軟件、儀器、工作人員操作等因素均可能導(dǎo)致試劑的浪費(fèi)，故實(shí)際檢測(cè)中還需優(yōu)化工作流程，設(shè)計(jì)好檢測(cè)計(jì)劃，提高試劑的利用率。