楊楠 王藝媛 黃曉燕 趙小麗 張曉晶 張曉萍

甘肅省人民醫(yī)院，甘肅 蘭州730000

外周血造血干細(xì)胞移植（peripheral blood hematopoietic stem cell trans plantation，PBSCT）因其外周血干細(xì)胞采集、凍存方便，安全性高［1-2］，移植后患者免疫和造血系統(tǒng)功能重建較快，移植相關(guān)的死亡率低，已成為治療惡性血液病及免疫性疾病的重要手段［3-4］。外周血造血干細(xì)胞（peripheral blood hematopoietic stem cell，PBSC）的質(zhì)量和數(shù)量是影響PBSCT成功的關(guān)鍵因素之一。目前，國內(nèi)外對(duì)不同血細(xì)胞分離機(jī)PBSC采集效果的報(bào)道較多，但對(duì)COBE Spectra血細(xì)胞分離機(jī)MNC和Auto PBSC程序采集效果的報(bào)道并不多見。本研究回顧了我院2017年1月～2019年12月應(yīng)用COBE Spectra血細(xì)胞分離機(jī)兩種采集程序?qū)?6例患者進(jìn)行149次PBHSC采集，對(duì)采集效果、采集前后部分血常規(guī)指標(biāo)的變化和采集過程中發(fā)生的不良反應(yīng)進(jìn)行了回顧性分析評(píng)估，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料和方法

1.1 一般資料 選擇2017年1月至2019年12月，利用COBE Spectra血細(xì)胞分離機(jī)的MNC和Auto PBSC程序采集我院血液科患者外周血自體干細(xì)胞66例（共149人次），年齡17～66歲，平均（43.5±9.19）歲，其中男性38例，女性28例，多發(fā)性骨髓瘤（Multiplem yeloma，MM）19例，非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin lymphoma，NHL）15例，霍奇金淋巴瘤（Hodgkin lymphoma，HL）4例，急性髓系白血?。╝cute myelocytic leukemia，AML）23例，急性淋巴細(xì)胞白血病（acute lymphoblastic leukemia，ALL）5例。按照COBE Spectra血細(xì)胞分離機(jī)采集程序的不同分為Auto PBSC組和MNC PBSC組。兩種采集程序的患者在年齡、性別和疾病種類方面均無顯著性差異。見表1。

表1 兩種采集程序患者臨床特征

1.2 采集前準(zhǔn)備 患者化療結(jié)束后每日檢測(cè)血常規(guī)，當(dāng)白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）下降至最低點(diǎn)后每日皮下注射粒細(xì)胞集落刺激因子（G-CSF）5～10μg/（kg·d），連續(xù)5d動(dòng)員造血干細(xì)胞，當(dāng)WBC達(dá)到2～5×1010/L后開始采集PBHSC，具體情況遵循醫(yī)囑。

1.3 采集方法 COBE Spectra Auto PBSC程序（以下簡(jiǎn)稱Auto程序），COBE Spectra MNC程序（以下簡(jiǎn)稱MNC程序）。不同程序的采集方法按照COBE Spectra血細(xì)胞分離機(jī)操作說明書進(jìn)行操作，儀器完成初始化管路預(yù)沖后根據(jù)患/供者性別、身高、體重、紅細(xì)胞壓積、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、淋巴及單核細(xì)胞比例等參數(shù)進(jìn)行分離機(jī)不同程序參數(shù)的設(shè)置。其中Auto PBSC程序采集的收獲量為3～5mL，追趕量為3～5mL，最終產(chǎn)物體積=（收獲量+追趕量）×收獲次數(shù)；COBE Spectra血細(xì)胞分離機(jī)MNC程序基本步驟同Auto PBSC程序，但需要通過目測(cè)比色法調(diào)節(jié)血漿泵的流速進(jìn)行外周血造血干細(xì)胞的采集，最終產(chǎn)物體積=采集界面建立后至總循環(huán)血量結(jié)束所需時(shí)間對(duì)應(yīng)的毫升數(shù)。一般均連續(xù)采集2～3次，以達(dá)到預(yù)期PBSC為準(zhǔn)。所有患者采集的單個(gè)核細(xì)胞計(jì)數(shù)（MNC）數(shù)大于4×108/kg為達(dá)標(biāo)，停止繼續(xù)采集。

患者一般采取雙側(cè)肘靜脈進(jìn)行穿刺建立閉合雙針連續(xù)循環(huán)通路，部分患者采取深靜脈置管建立循環(huán)通路采集外周血造血干細(xì)胞。采集前患者均給予口服10%葡萄糖酸鈣20mL或靜脈滴注葡萄糖酸鈣，防止枸櫞酸鈉引起的低鈣反應(yīng)，嚴(yán)密觀察患者精神狀態(tài)、血壓、心率等指標(biāo)變化以及手口麻木情況，根據(jù)患者出現(xiàn)的情況及時(shí)進(jìn)行相應(yīng)處理。

1.4 觀察指標(biāo) 全血處理量、采集時(shí)間、抗凝劑用量、采集前后部分血常規(guī)指標(biāo)的變化、采集過程中出現(xiàn)的不良反應(yīng)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，一般信息和臨床特征應(yīng)用描述性統(tǒng)計(jì)進(jìn)行總結(jié)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同程序?qū)BHSC采集結(jié)果的影響 Auto程序與MNC程序相比，兩者總循環(huán)血量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；使用Auto程序采集結(jié)束后，采集物體積比使用MNC程序減小約53.1%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；抗凝劑用量比使用MNC程序增加約30.1%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；采集時(shí)間比使用MNC程序增加約15.5%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；采集物MNC數(shù)比使用MNC程序減少約15.0%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

2.2 不同程序采集干細(xì)胞后患者部分血常規(guī)指標(biāo)的變化 所有患者每次PBSC采集結(jié)束后監(jiān)測(cè)血常規(guī)。兩種程序采集結(jié)束后，與正常血常規(guī)相比，患者白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）均有所升高，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；血紅蛋白（Hb）均小幅度減少，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；紅細(xì)胞壓積（HCT）均小幅度減少，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；血小板計(jì)數(shù)（PLT）均有所降低，但Auto程序采集后PLT的降低程度小于MNC程序，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)（LY）均小幅度增加，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)（NEUT）均有所增加，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表3。

表2 不同程序采集效果

表3 不同程序采集結(jié)束后部分血常規(guī)指標(biāo)的變化值

2.3 不良反應(yīng)情況觀察 66例患者在PBSC采集過程中，均未出現(xiàn)嚴(yán)重的不良反應(yīng)；其中5例出現(xiàn)程度不一的低鈣反應(yīng)，表現(xiàn)為口唇、面部麻木，給予口服或靜脈滴注10%葡萄糖酸鈣后癥狀緩解或消失，所有患者均順利采集完成。兩種采集程序的不良反應(yīng)的發(fā)生率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。

3 討論

采集物中的單個(gè)核細(xì)胞計(jì)數(shù)MNC和CD34+細(xì)胞計(jì)數(shù)是判斷采集效果的重要指標(biāo)，但有研究表明，CD34+細(xì)胞的計(jì)數(shù)受流式細(xì)胞儀操作人員和不同檢測(cè)機(jī)構(gòu)檢測(cè)水平的影響較大，對(duì)同一樣本的檢測(cè)結(jié)果可能存在較大偏差［5］。因此，本研究中主要以單個(gè)核細(xì)胞計(jì)數(shù)MNC是否達(dá)標(biāo)作為采集結(jié)束的標(biāo)志。目前臨床上用于采集PBSC的血細(xì)胞分離機(jī)主要有COBE Spectra、Spectra Optia、Baxter CS3000和Haemonetics MCS+［6］，而國內(nèi)目前COBE Spectra和Spectra Optia血細(xì)胞分離機(jī)最為常見。有研究表明不同血細(xì)胞分離機(jī)對(duì)PBSC的采集效果存在一定的差異［7-8］。目前對(duì)COBE Spectra血細(xì)胞分離機(jī)不同采集程序?qū)BHSC的采集效果、不良反應(yīng)發(fā)生率和對(duì)血常規(guī)部分指標(biāo)影響的報(bào)道并不多見。本研究回顧性分析了66例患者149次PBSC的采集效果。結(jié)果顯示：在采集效果方面COBE Spectra血細(xì)胞分離機(jī)的Auto程序與MNC程序在PBHSC的采集過程中，兩者的血液總循環(huán)量基本在12500mL左右，無顯著性差異。但Auto程序采集后相比MNC程序，終產(chǎn)物體積減小約53.1%；抗凝劑用量增加約30.1%；采集時(shí)間延長約15.5%；MNC數(shù)減少約15.0%，這與曾豐等［9］的研究結(jié)果一致。單從采集效果方面來看，MNC程序抗凝劑用量少，可以減少患者因枸櫞酸鹽引起低鈣反應(yīng)的概率；采集時(shí)間較短，可以減少患者因長時(shí)間保持一個(gè)姿勢(shì)采集而引起的肌肉酸痛或煩躁焦慮等情況；MNC計(jì)數(shù)較多，增加了PBSC采集的有效率，減少了因采集量不夠而繼續(xù)采集的頻率；終產(chǎn)物體積雖然是Auto程序采集后體積的兩倍，但是我科在凍存干細(xì)胞過程中采用低溫離心濃縮技術(shù)，去除了多余的血漿，兩種采集程序采集的PBSC經(jīng)過離心濃縮后終體積只與MNC計(jì)數(shù)相關(guān)。MNC程序采集后經(jīng)過低溫離心完全可以避免因凍存劑（二甲基亞砜）過量導(dǎo)致的不良反應(yīng)。因此，從PBSC的采集效果來看，MNC程序要優(yōu)于Auto程序，但是需要工作人員目測(cè)比色，隨時(shí)調(diào)節(jié)血漿泵流速控制采集效果，對(duì)采集人員的技術(shù)和經(jīng)驗(yàn)要求較高。

從對(duì)患者血常規(guī)部分指標(biāo)的影響來看：采用Auto程序和MNC程序采集結(jié)束后，患者白細(xì)胞計(jì)數(shù)小幅度升高，血紅蛋白小幅度減少，紅細(xì)胞壓積小幅度減少，淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)小幅度增加，中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)小幅度增加，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；表明兩種采集程序在采集和回輸過程中紅細(xì)胞沒有明顯的損失，在后續(xù)采集過程中，參數(shù)WBC、Hb、HCT、LY和NEUT的設(shè)置沒有大幅度的波動(dòng)，采集結(jié)果相對(duì)穩(wěn)定。但使用MNC程序采集后，患者PLT的降低程度明顯高于Auto程序，血小板丟失率高，表明Auto程序更適合于采集血小板較低患者的PBSC，可以避免因血小板的過度丟失而引起的繼發(fā)性出血威脅患者生命。

從發(fā)生不良反應(yīng)的情況來看：66例患者在PBSC采集過程中，均未出現(xiàn)嚴(yán)重的不良反應(yīng)；對(duì)少數(shù)患者出現(xiàn)的低鈣反應(yīng)給予口服或靜脈滴注10%葡萄糖酸鈣后癥狀緩解或消失，所有患者均能夠順利完成采集，兩種采集程序的不良反應(yīng)的發(fā)生率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

血液科患者多數(shù)為貧血或血小板計(jì)數(shù)低，因此在選擇管路時(shí)需要綜合考慮患者血小板的計(jì)數(shù)的高低、患者可能耐受的采集時(shí)間以及工作人員的實(shí)際情況等多方面的因素，盡可能為不同的患者選擇最合適的采集程序，在保證采集效果和患者安全的條件下，優(yōu)化采集次數(shù)，降低患者經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，為不同的患者選擇合適的采集程序，以達(dá)到最佳采集結(jié)果。本研究不足是病例數(shù)據(jù)較少，還需要我們收集更多資料，進(jìn)行前瞻性研究，為優(yōu)化PBSC的采集提供一定的數(shù)據(jù)支持。