袁 靜，閆晨靜，周 茜，牛佳卉，吳夢穎，王亞旭，王 頡，趙 文*

（河北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院，河北省農(nóng)產(chǎn)品加工工程技術(shù)中心，河北 保定 071001）

抑郁癥主要表現(xiàn)為心境持久低落，思維遲鈍，食欲缺乏和體質(zhì)量減輕，意志行為減少，嚴重者出現(xiàn)自殺企圖或行為[1-2]，是一種在世界上廣泛流行的精神疾患[3]，全球各年齡層共有約3億 人患有抑郁癥。根據(jù)世界衛(wèi)生組織的預(yù)測，抑郁癥的發(fā)病率每年增加113%，預(yù)計到2020年成為世界第二大疾病負擔(dān)[4]。但目前廣泛使用的抗抑郁藥物具有很大局限性，且長期使用會對人體產(chǎn)生一定的毒副作用，開發(fā)安全有效的預(yù)防抑郁癥藥物或通過營養(yǎng)干預(yù)緩解抑郁癥是當(dāng)今社會亟待解決的問題。研究表明，從食物中提取的營養(yǎng)物質(zhì)，比如乳源活性肽[5]、桔梗[6]、茯苓多糖[7]、小分子化合物（CXZ-123）[8]等都對抑郁癥有緩解作用。

?；撬嶙鳛轶w內(nèi)含量最豐富的含硫氨基酸，以游離狀態(tài)存在[9]，是人體正常生理活動所必需的活性物質(zhì)，牛磺酸不僅參與維持機體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)，而且在神經(jīng)、心血管、免疫和內(nèi)分泌等系統(tǒng)生理功能的正常發(fā)揮起著重要的調(diào)節(jié)作用[10]。?；撬嶙鳛橐环N機體的內(nèi)源性抗損傷物質(zhì)，已發(fā)現(xiàn)具有多種生理功能，但對其抑郁癥的干預(yù)作用鮮有研究，Wu Gaofeng等[11]對?；撬岬目挂钟糇饔眠M行研究，通過慢性溫和不可預(yù)知應(yīng)激（CUMS）抑郁模型證明了?；撬峋哂锌挂钟糇饔谩Ｔ谀壳暗目挂钟粞芯恐?，抑郁癥的動物模型建立方法主要包括應(yīng)激模型和藥物誘導(dǎo)模型兩大類，本實驗利用兩種常用的抑郁模型——小鼠行為絕望模型和利血平誘導(dǎo)急性抑郁模型來探討?；撬岬目挂钟糇饔?，為?；撬峥挂钟糇饔脵C制的研究具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 動物、材料與試劑

ICR小鼠，SPF級，雄性，18～22 g，購于北京華阜康實驗動物技術(shù)有限公司，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（京）2009-0004。動物自然節(jié)律光照，適應(yīng)3 d后進行實驗。

?；撬幔兌取?9.9%） 上?？刀∩锟萍加邢薰?；5-羥色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）酶聯(lián)免疫吸附分析試劑盒、多巴胺（dopamine，DA）酶聯(lián)免疫吸附分析試劑盒、去甲腎上腺素（norepinephrine，NE）酶聯(lián)免疫吸附分析試劑盒、單胺氧化酶（monoamine oxidase，MAO）酶聯(lián)免疫吸附分析試劑盒、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（brain derived neurotrophic factor，BDNF）酶聯(lián)免疫吸附分析試劑盒、促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子（corticotropin-releasing factor，CRF）酶聯(lián)免疫吸附分析試劑盒、促腎上腺皮質(zhì)激素（adreno-cortico-tropichormone，ACTH）酶聯(lián)免疫吸附分析試劑盒、皮質(zhì)醇（cortisol，COR）酶聯(lián)免疫吸附分析試劑盒 上海源葉生物技術(shù)有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Scientz-ⅡD型超聲細胞破碎儀 寧波新芝生物科技股份有限公司；1500-823型全波長掃描酶標儀 美國Thermo Scientific公司；SPX-250B型生化培養(yǎng)箱 北京鑫骉騰達儀器設(shè)備有限公司；3-18R型低溫（0～4 ℃）高速離心機 湖南恒諾儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 行為絕望小鼠模型

小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d，隨機分成6 組：陰性對照組（蒸餾水）、氟西汀對照組（氟西汀10 mg/kgmb）、?；撬岬汀⒅?、高劑量組（天然?；撬?.5、1、2 g/kgmb），每組10 只。連續(xù)灌胃至第8天進行懸尾實驗，第9天進行強迫游泳實驗，第10天進行曠場實驗[12]。

1.3.2 利血平誘導(dǎo)的抑郁小鼠模型

小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d，動物分組與劑量設(shè)計同1.3.1節(jié)。連續(xù)灌胃14 d，最后一次灌胃30 min后陰性對照組小鼠腹腔注射生理鹽水，其余各組腹腔注射利血平（2.5 mg/kgmb），1 h后觀察小鼠眼瞼下垂情況（分級判斷下垂度），3 h后測肛溫、出圈率[13]。

記錄小鼠體質(zhì)量，摘眼球取血，頸椎脫臼處死動物，冰臺取腦組織并稱質(zhì)量。分離血清、血漿，制備腦勻漿，測定血清ATCH、BDNF、血漿COR、腦勻漿5-HT、NE、DA、MAO、CRF水平。

1.3.3 行為學(xué)指標

1.3.3.1 眼瞼下垂

判斷眼瞼下程度。0 度：正常睜眼；1 度：眼瞼下垂1/4；2 度：眼瞼下垂1/2；3 度：眼瞼下垂：3/4；4 度：眼瞼完全閉合[14]。

1.3.3.2 肛溫

小鼠肛溫計探頭涂抹甘油后插入小鼠肛門1 cm處測量肛溫。

1.3.3.3 出圈率

將小鼠放入直徑7.5 cm的白紙圓圈內(nèi)觀察15 s，計算每組小鼠的出圈率。

1.3.3.4 懸尾實驗

末次給藥60 min后，用醫(yī)用膠布將小鼠尾（在距尾尖1 cm處）[15]粘在高出桌面15 cm的橫桿上，使其呈倒立狀態(tài)，四周以板隔離小鼠視線。小鼠為了克服不正常體位而掙扎活動，但活動一段時間后出現(xiàn)間隙性靜止，即顯示失望狀態(tài)。適應(yīng)1 min后，記錄5 min內(nèi)小鼠的累計不動時間。

1.3.3.5 強迫游泳實驗

末次給藥60 min后，將小鼠置于水溫20～25 ℃，水深10 cm的游泳水槽中，強迫游泳6 min，觀察并記錄后4 min內(nèi)小鼠靜止時間。當(dāng)小鼠呈漂浮狀態(tài)停止掙扎時記錄游泳不動時間（小鼠僅做輕微動作以保持頭部浮于水面上也視為游泳不動）[16]。

1.3.3.6 曠場實驗

采用紙質(zhì)敞箱（50 cmh50 cmh50 cm），底面劃分為面積相等的25 個白色方格（10 cmh10 cm）。給藥60 min后將小鼠置于曠場內(nèi)，觀察5 min內(nèi)小鼠的活動情況，包括水平運動次數(shù)（三爪以上跨入鄰格次數(shù)）、垂直運動次數(shù)（兩前肢離地1 cm以上的次數(shù)，包括直立及攀附墻體）[17-18]。

1.4 數(shù)據(jù)處理

實驗數(shù)據(jù)以平均值±標準偏差表示，采用單因素方差分析及t檢驗對行為學(xué)觀測指標進行統(tǒng)計分析，本實驗所有統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)差異的操作均用SPSS19.0統(tǒng)計軟件完成。組間比較采用單因素方差分析法：P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 ?；撬釋π袨榻^望小鼠干預(yù)作用

圖 1 ?；撬釋π袨榻^望小鼠干預(yù)作用的影響（n＝ 10）Fig. 1 Interventional effect of taurine on behavioral despair in mice (n = 10)

由圖1a可知，與陰性對照組相比，?；撬? 個劑量組懸尾不動時間分別降低了17.06%、47.22%、55.72%，其中低劑量組差異顯著（P＜0.05），中、高劑量組差異極顯著（P＜0.01），且效果略優(yōu)于氟西?。ń档?4.72%）；圖1b中與陰性對照組相比，氟西汀組小鼠強迫游泳不動時間縮短17.85%（P＞0.05）。?；撬嶂袆┝拷M顯著降低21.69%（P＜0.05），高劑量組極顯著降低49.17%（P＜0.01）；小鼠曠場實驗圖1c中，與陰性對照組相比，?；撬嶂袆┝拷M水平運動次數(shù)顯著升高21.45%（P＜0.05），高劑量組極顯著性升高28.41%（P＜0.01）；與氟西汀對照組相比，低、中劑量組豎直運動次數(shù)分別降低26.79%（P＜0.01）、18.96%（P＜0.05），表明?；撬嵩谔岣咝∈笞灾鬟\動水平上與氟西汀對照組相似。

2.2 ?；撬釋秸T導(dǎo)抑郁模型小鼠體質(zhì)量、腦質(zhì)量的影響

表 1 ?；撬釋π∈篌w質(zhì)量和腦質(zhì)量的影響（n＝ 10）Table 1 Effect of taurine on body mass and brain mass in mice (n= 10)

由表1可知，陰性對照組、模型組、氟西汀對照組小鼠相比，體質(zhì)量、腦質(zhì)量均無顯著性差異，表明抑郁對小鼠體質(zhì)量、腦質(zhì)量影響不大。表明?；撬釋秸T導(dǎo)的抑郁模型小鼠體質(zhì)量、腦質(zhì)量無明顯影響。

2.3 ?；撬釋秸T導(dǎo)抑郁模型小鼠眼瞼下垂度、體溫、出圈率的影響

表 2 ?；撬釋π∈笱鄄€下垂度、體溫、出圈率的影響（n＝ 10）Table 2 Effect of taurine on ptosis, body temperature and escape rate of mice (n= 10)

由表2可知，與陰性對照組相比，模型組小鼠眼瞼下垂度、體溫均顯示出極顯著性差異（P＜0.01），表明抑郁模型建模成功。與模型組相比，?；撬峤M眼瞼下垂度無顯著性差異（P＞0.05），且?；撬釋σ钟粜∈篌w溫?zé)o顯著性影響。與模型組相比，氟西汀對照組眼瞼下垂度、體溫顯示出極顯著性差異（P＜0.01），表明陽性藥物可以緩解利血平誘導(dǎo)的抑郁小鼠的抑郁表象特征。

2.4 ?；撬釋秸T導(dǎo)抑郁模型小鼠5-HT、DA、NE的影響

圖 2 ?；撬釋π∈竽X組織5-HT（a）、DA（b）和NE（c）含量的影響（n＝ 10）Fig. 2 Effect of taurine on 5-HT (a), DA (b) and NE (c) contents in brain tissues of mice (n = 10)

由圖2可知，與陰性對照組相比，模型組小鼠5-HT、DA、NE均分別極顯著下降（P＜0.01），表明造模成功。與模型組相比，?；撬嶂袆┝拷MDA、NE分別顯著上升20.46%、24.85%（P＜0.05），高劑量5-HT顯著上升19.09%（P＜0.05），DA、NE分別極顯著上升27.03%、30.66%（P＜0.01）。表明?；撬峋哂猩咭钟粜∈竽X組織5-HT、DA、NE的作用。與氟西汀對照組比較，牛磺酸高劑量組與陽性藥物效果相當(dāng)。

2.5 ?；撬釋秸T導(dǎo)抑郁模型小鼠MAO活力和BDNF含量的影響

圖 3 牛磺酸對小鼠MAO活力（a）、BDNF含量（b）的影響（n＝ 10）Fig. 3 Effect of taurine on MAO (a) and BDNF (b) contents in mice (n = 10)

如圖3所示，與陰性對照組相比，模型組小鼠MAO活力極顯著上升39.87%，BDNF含量極顯著下降33.97%（P＜0.01），表明造模成功。與模型組相比，?；撬岬?、中、高劑量組MAO活力分別極顯著下降了9.42%、13.82%、16.77%（P＜0.01）。表明?；撬嵊薪档鸵钟粜∈驧AO活力，并升高BDNF含量的作用，且高劑量組與氟西汀組接近。

2.6 ?；撬釋秸T導(dǎo)抑郁模型小鼠CRF、ACTH、COR含量的影響

圖 4 ?；撬釋π∈笱錍RF含量（a）、ACTH含量（b）和血漿COR含量（c）的影響（n＝ 10）Fig. 4 Effect of taurine on CRF (a), ACTH (b) and COR (c) content in serum of mice (n = 10)

如圖4所示，與陰性對照組相比，模型組小鼠CRF、ACTH、COR含量均極顯著上升（P＜0.01），表明造模成功。與模型組相比，牛磺酸低劑量組ACTH、COR含量分別顯著下降17.05%、20.90%（P＜0.05），中劑量組CRF、ACTH、COR含量分別極顯著下降11.07%、25.14%、25.49%，高劑量組CRF、ACTH、COR含量分別極顯著下降19.52%、27.40%、33.14%（P＜0.01）。表明?；撬峥梢越档鸵钟粜∈驝RF、ACTH、COR水平，與氟西汀對照組比較，高劑量組?；撬崤c其相似。

3 討 論

懸尾實驗和強迫游泳實驗是通過觀察實驗動物行為表現(xiàn)而對抗抑郁藥物進行篩選和評價。曠場實驗通過觀察記錄小鼠自主活動情況，提高了抗抑郁藥物篩選的可靠性。3 種行為學(xué)實驗綜合進行有利于全面考察抗抑郁藥的作用效果，被廣泛用于抗抑郁藥物的初篩。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，?；撬幔?、2 g/kgmb）能夠顯著降低小鼠懸尾不動時間和強迫游泳不動時間，并增加小鼠自主運動水平，發(fā)現(xiàn)與氟西汀對照組的效果相當(dāng)，且具有劑量相關(guān)性，說明?；撬峥梢杂行Эs短小鼠行為絕望時間，初步確定其可能具有一定的干預(yù)抑郁功效。

進一步采用對藥物誘發(fā)的抑郁動物模型的實驗研究，根據(jù)已知抗抑郁藥的基本藥理作用，建立藥物誘導(dǎo)作用的動物模型。通過藥物相互作用的抑郁動物模型，并對?；撬岬目挂钟糇饔眯再|(zhì)進一步進行探討。利血平是一種吲哚型生物堿，研究發(fā)現(xiàn)，利血平具有鎮(zhèn)靜中樞神經(jīng)的作用，長期使用利血平可引起單胺類神經(jīng)遞質(zhì)5-HT、DA、NE的耗竭，同時伴隨眼瞼下垂、體溫降低、身體僵直等臨床癥狀，與抑郁癥癥狀相同[19-21]。利血平誘導(dǎo)抑郁模型具有造模時間短、減少動物的痛苦和造模過程簡單的優(yōu)點，是最早發(fā)展的抑郁動物模型[22]，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于抑郁模型的建立。本實驗通過研究?；撬釋秸T導(dǎo)小鼠急性抑郁模型影響，發(fā)現(xiàn)牛磺酸對小鼠眼瞼下垂、體溫下降、運動不能癥狀具有緩解作用。

抑郁產(chǎn)生機制十分復(fù)雜，目前為止，主要概括為以下幾種學(xué)說[23-25]：1）單胺類神經(jīng)遞質(zhì)假說：該假說認為抑郁癥是由于患者腦內(nèi)中樞神經(jīng)系統(tǒng)突出間隙DA、NE、5-HT等單胺類神經(jīng)遞質(zhì)濃度水平或功能下降所致[25-26]；2）受體假說：腦中單胺神經(jīng)遞質(zhì)受體敏感性增高引發(fā)抑郁癥，以5-HT受體功能改變?yōu)橹鱗27-29]；3）神經(jīng)內(nèi)分泌假說：該假說包括下丘腦-垂體-腎上腺素軸（HPA）學(xué)說，主要表現(xiàn)為CRF含量升高，ACTH分泌增強，致使COR過度分泌，負反饋調(diào)節(jié)機制被破壞，進而引起前額皮質(zhì)和海馬區(qū)神經(jīng)元的凋亡，導(dǎo)致認知能力下降[30]；4）腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）假說：該假說表明壓力會減少前額皮層和海馬區(qū)的BDNF的表達和功能，致使神經(jīng)元萎縮，也會少抑郁癥患者血液中的BDNF水平[31-32]。單胺類神經(jīng)遞質(zhì)假說是目前最為公認的抑郁機制學(xué)說，該假說認為抑郁癥是由于患者腦內(nèi)中樞神經(jīng)系統(tǒng)突出間隙5-HT、DA、NE等單胺類神經(jīng)遞質(zhì)濃度水平或功能下降所致，研究報道可知5-HT是色氨酸代謝產(chǎn)物之一，對情緒與認知的調(diào)控起重要作用[33]。因此可通過測定單胺遞質(zhì)水平直接判定抑郁程度。HPA亢進學(xué)說主要表現(xiàn)為CRF、ACTH、COR的過度分泌，負反饋調(diào)節(jié)機制被破壞，產(chǎn)生抑郁癥狀。而BDNF水平的下降也與神經(jīng)元萎縮密切相關(guān)，是抑郁癥的重要檢測指標之一。本研究發(fā)現(xiàn)?；撬峥蓪估秸T導(dǎo)的急性抑郁模型小鼠5-HT、DA、NE含量下降，降低MAO活性與CRF、ACTH、COR的過渡分泌，升高BDNF水平的作用，推測?；撬岣深A(yù)抑郁作用機制與神經(jīng)單胺遞質(zhì)假說、神經(jīng)內(nèi)分泌假說和腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子假說密切相關(guān)，?；撬峥挂钟舻淖饔脵C制還不能完全闡明，對哪些信號通路具有干預(yù)作用，這些信號通路之間又是怎樣相互作用和相互聯(lián)系的需要進一步深入研究。

4 結(jié) 論

本研究發(fā)現(xiàn)?；撬峥梢杂行Эs短小鼠行為絕望時間，具有一定的干預(yù)抑郁功效。此外，?；撬嵋欢▌┝織l件下還能夠緩解利血平誘導(dǎo)的小鼠抑郁，并明顯升高小鼠腦組織5-HT、DA、NE水平，降低MAO活性，并升高BDNF含量，同時抑制CRF、ACTH、COR的過度分泌，表明牛磺酸作為預(yù)防抑郁癥的膳食補充劑有良好的開發(fā)前景。