劉曉東

（松原市食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 松原）

0 引言

珍菊降壓片是由野菊花膏粉、珍珠層粉、鹽酸可樂定、氫氯噻嗪、蘆丁五味藥制成的復(fù)方制劑[1]，該藥具有降壓作用，是治療高血壓病的常用藥物之一。目前，該藥現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)的鑒別項(xiàng)目只是針對其中一些成分的，沒有方法進(jìn)行含量的測量。盡管有研究指出對于其中所含成分的含量[2,3]可應(yīng)用HPLC方法[4]進(jìn)行測定，但是應(yīng)用雙波長法同時對兩種成分的含量進(jìn)行測定的方法還沒有研究發(fā)現(xiàn)。本次研究中，對氫氯噻嗪和綠原酸的含量應(yīng)用HPLC雙波長法同時進(jìn)行測定，該方法簡單方便、快速準(zhǔn)確，具有較好的重復(fù)性[5,6]，在該制劑的質(zhì)量控制中非常適用。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀（SHIMADZU LC-2010AHT）。

1.2 試藥

氫 氯 噻 嗪（批 號：100309-201103）、綠 原 酸（批 號：110753-201314），以上兩種對照品均購于中國食品藥品檢定研究院；珍菊降壓片（亞寶藥業(yè)集團(tuán)集團(tuán)股份有限公司，批號：140514），自制兩批（批號：20140809 ，批號：20140810）；陰性樣品自制，甲醇為分析純，磷酸為分析純，乙腈為色譜純，水為重蒸水（自制）。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備

分別精密稱取干燥至恒重的綠原酸、氫氯噻嗪對照品10.12mg、11.62mg，分別置50ml和25ml量瓶中，分別加（甲醇∶水∶乙腈）（45∶50∶5）稀釋至刻度，搖晃均勻，即得（綠原酸和氫氯噻嗪對照品溶液，濃度分別為0.2024mg/ml、0.4648mg/mL）。

2.2 供試品溶液的制備

取10片樣品，將薄膜衣去除，精密稱定，研細(xì)，稱取大約0.52g的細(xì)粉，精密稱定，在具塞錐形瓶中放置，精密加入（甲醇∶水∶乙腈）（45∶50∶5）25ml，對重量進(jìn)行稱定，搖晃，超聲提取30min，將減少的重量補(bǔ)足，在室溫下放置，取上清液，濾過，即得。

2.3 陰性對照溶液的制備

按照一樣的處方比例，制得陰性樣品，其中不含野菊花膏粉、氫氯噻嗪，參照供試品溶液的制備方法對陰性對照溶液進(jìn)行制備。

2.4 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

色 譜 柱：shim-pack VP-ODS C18（250 mm×4.6 mm,5μm批號：3082427）；流動相：乙腈-0.4%磷酸溶液（10:90）；進(jìn)樣量：10μl；流速1.0 ml/min；檢測器：紫外檢測器。各主成分和相鄰峰間的分離度大于1.5，分離度良好（色譜條件見表1）。

表1 色譜條件

使用高效液相色譜儀進(jìn)行測定，分別向其中注入對照品、供試品和陰性對照溶液。結(jié)果顯示陰性對照液在相應(yīng)峰位置無任何峰出現(xiàn)，說明該制劑中其他成分無干擾。

2.5 線性關(guān)系

精密稱取綠原酸11.54mg、氫氯噻嗪10.28mg、分別置于10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖晃均勻，分別精密吸取0.1ml、0.5ml、1ml、2ml、5ml、10ml置10ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。注入液相色譜儀分析，以峰面積對濃度做線性回歸方程，得各成分回歸方程。結(jié)果見表2。

表2 回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性范圍表(n= 6)

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，根據(jù)以上所述色譜條件測定，時間間隔為每4h，總共進(jìn)樣6次，對其穩(wěn)定性進(jìn)行測量。結(jié)果顯示：綠原酸峰面積的RSD為1.2%、氫氯噻嗪為0.8%。說明在24h內(nèi)供試品溶液有較好的穩(wěn)定性。

2.7 精密度試驗(yàn)

對同一混合對照品溶液進(jìn)行精密吸取，連續(xù)進(jìn)樣6次，測得綠原酸、氫氯噻嗪峰面積的RSD分別為0.91%、0.45%（n=6），說明此方法具有較好的精密度。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取6份同一批號的樣品，參照制備供試品溶液的方法對溶液進(jìn)行制備并測定，結(jié)果綠原酸、氫氯噻嗪含量的RSD分別為1.2%、0.9%（n=6），說明此方法具有較好的重復(fù)性。

2.9 回收率試驗(yàn)

對已知批號為140514的珍菊降壓片樣品進(jìn)行適量的精密稱取，將適量的對照品加入其中，處理方法參照制備供試品溶液的方法，對各成分的回收率進(jìn)行計算。結(jié)果證實(shí)，此方法加樣回收率較好，見表3。

表3 加樣回收率實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

2.10 樣品含量測定

根據(jù)供試品溶液項(xiàng)下制備方法和色譜條件，分析3批樣品中的綠原酸、氫氯噻嗪，對含量進(jìn)行計算，結(jié)果見表4。

表4 樣品中各成分含量測定結(jié)果

3 結(jié)果與討論

3.1 流動相的選擇

參考相關(guān)研究資料[4，7]，對乙腈-水、甲醇-水以及乙腈-0.4%磷酸溶液作為流動相進(jìn)行考察，結(jié)果顯示，乙腈-0.4%磷酸溶液（10∶90）作為流動相，色譜峰峰形對稱，分離效果好，分離度大于1.5，理論塔板數(shù)高，綠原酸拖尾小且無雜峰干擾。

3.2 檢測波長的選擇

設(shè)定波長選擇兩種成分的最大吸收波長，檢測方法為雙波長法，簡單方便、快速準(zhǔn)確。

3.3 溶劑的選擇

氫氯噻嗪溶解度稍差一些，采用（甲醇∶水∶乙腈）（45∶50∶5）作為溶劑，溶解效果好。

3.4 提取方法的選擇

本實(shí)驗(yàn)考察了提取方法及時間的條件，結(jié)果表明，提取樣品的時候，選擇功率為250W，頻率為50kHz的超聲儀，超聲30 min即可完全提取，在較短的時間即可取得良好的效果，所以制備供試品溶液可以采用此種方法[7,8]。