王 莉

（寧夏醫(yī)科大學(xué)臨床學(xué)院 寧夏·銀川 750004）

寧夏枸杞（Lycium barbarum L.）的干燥成熟果實(shí)，即為《中華人民共和國(guó)藥典》中的枸杞子。國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)枸杞的研究主要包括枸杞子的化學(xué)成分、結(jié)構(gòu)及功能等方面。枸杞子的主要的功能成分有枸杞多糖、枸杞黃酮、類胡蘿卜素和萜類化合物等，這些成分與其生物學(xué)功效密切相關(guān)，有研究認(rèn)為，黃酮可以降低膽固醇、改善心腦血管疾病患者的癥狀、降低心腦血管疾病的發(fā)病率，提高小鼠的缺氧存活能力。龔濤等研究認(rèn)為枸杞多糖有良好的抗氧化、抗衰老作用。李洋等研究了寧夏枸杞中的多糖、黃酮、類胡蘿卜素和VC的抗氧化能力，認(rèn)為黃酮的抗氧化能力決定著枸杞果實(shí)的體外抗氧化能力。從這些研究可知，枸杞果實(shí)中的功能成分有著良好的抗缺氧和抗氧化功效。對(duì)不同等級(jí)寧夏枸杞和不同產(chǎn)地枸杞果實(shí)的功能成分的比較已有相關(guān)報(bào)道，但不同等級(jí)枸杞子的抗缺氧能力及抗氧化活性的研究還較少見。本實(shí)驗(yàn)就不同等級(jí)枸杞子提取液對(duì)小鼠抗缺氧能力和小鼠肝中超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）水平的影響開展研究，以比較不同等級(jí)寧夏枸杞的抗缺氧作用及抗氧化活性的差異，為相關(guān)研究、枸杞生產(chǎn)和銷售提供參考意見。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

枸杞子：為市售的某品牌的特優(yōu)、特級(jí)、甲級(jí)、乙級(jí)枸杞子。維生素C：上?，F(xiàn)代哈森（商丘）藥業(yè)有限公司產(chǎn)品。MDA、SOD測(cè)試盒：南京建成生物工程有限公司產(chǎn)品。KM小鼠（寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供）：100只雌鼠，體質(zhì)量（22±2.5）g。儀器：超聲提取儀、電熱恒溫水浴鍋、分光光度計(jì)等。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 枸杞子超聲提取液的制備

按文獻(xiàn)中的方法[7]，分別稱取適量四種等級(jí)的寧夏枸杞粉末，加入溫度為60℃的自來水超聲提取40min。將提取液離心15min，然后取其上清液，備用。

1.2.2 動(dòng)物分組

將100只KM小鼠隨機(jī)分為10組，即特優(yōu)高劑量組（A1）、特優(yōu)低劑量組(A2)、特級(jí)高劑量組(B1)、特級(jí)低劑量組(B2)、甲級(jí)高劑量組(C1)、甲級(jí)低劑量組(C2)、乙級(jí)高劑量組(D1)、乙級(jí)低劑量組(D2)、陽(yáng)性對(duì)照組（F1,即VC組）和對(duì)照組（F2,即自來水組），每組10只。

1.2.3 給藥

各實(shí)驗(yàn)組小鼠分別給其飲服四個(gè)等級(jí)的寧夏枸杞提取液，低劑量組和高劑量組分別給予10mg/mL和20mg/mL的寧夏枸杞提取液，陽(yáng)性對(duì)照組給予0.2mg/10g的維生素C，正常對(duì)照組讓其飲服自來水，連續(xù)飲服4周，實(shí)驗(yàn)期間各組小鼠自由采食普通飼料。

1.2.4 測(cè)定不同等級(jí)的寧夏枸杞對(duì)小鼠抗缺氧能力的影響

每組各取5只小鼠分別放入5個(gè)內(nèi)有10g鈉石灰的1000mL的錐形瓶中，迅速塞上瓶塞，縫隙涂抹凡士林，并在瓶口以塑料薄膜扎緊密封。之后立即計(jì)時(shí)，直至小鼠呼吸停止。以小鼠在密閉瓶?jī)?nèi)存活時(shí)間為指標(biāo)，比較其抗缺氧能力。

1.2.5 測(cè)定不同等級(jí)的寧夏枸杞對(duì)小鼠體內(nèi)SOD和MDA的影響

將小鼠頸椎脫臼處死，立即取其肝臟，用冰冷生理鹽水洗滌數(shù)次，并用濾紙吸干水分后稱取0.4g，置于組織勻漿器中，加入預(yù)冷的生理鹽水3.6mL，在冰水浴的環(huán)境下，制備成10%的肝組織勻漿液，3000r/min離心10min，取上清液備用。

用上述制備的肝組織勻漿液根據(jù)羥氨法測(cè)定小鼠肝組織中超氧化物歧化酶（SOD）活力；硫代巴比妥酸法測(cè)定小鼠肝組織中丙二醛（MDA）水平，具體操作按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 不同等級(jí)寧夏枸杞提取液對(duì)小鼠抗缺氧能力的影響

由表1可知，不同等級(jí)寧夏枸杞子提取液對(duì)小鼠缺氧存活時(shí)間的影響與空白對(duì)照組相比均有顯著差異（P<0.05）；VC組與空白對(duì)照相比較有顯著差異(P<0.05)。即在密閉缺氧的環(huán)境中，寧夏枸杞子超聲提取液與維生素C均可延長(zhǎng)小鼠的存活時(shí)間。此外，特優(yōu)高劑量組、特優(yōu)低劑量組、特級(jí)高劑量組、特級(jí)低劑量組之間無顯著差異，但與甲級(jí)高劑量組、甲級(jí)低劑量組、乙級(jí)高劑量組、乙級(jí)低劑量組相比有顯著差異(P<0.05)，即不同等級(jí)寧夏枸杞子提取液對(duì)小鼠缺氧存活時(shí)間的影響有差異，但高劑量與低劑量之間無顯著性差異。

表1：不同等級(jí)枸杞提取液對(duì)小鼠缺氧存活時(shí)間的影響（±s，n=5）

表1：不同等級(jí)枸杞提取液對(duì)小鼠缺氧存活時(shí)間的影響（±s，n=5）

注：同列中小寫字母相同,差異不顯著，P>0.05；字母不同，差異顯著，P<0.05；下同

組別 劑量 存活時(shí)間（min）空白對(duì)照組 ——28.80±1.72d維生素C組 0.2mg/10g 35.42±1.85ac枸杞提取液高劑量組特優(yōu) 20mg/mL 36.26±2.14a特級(jí) 20mg/mL 35.81±3.12ac甲級(jí) 20mg/mL 32.36±2.63b乙級(jí) 20mg/mL 32.13±3.03be枸杞提取液低劑量組特優(yōu) 10mg/mL 35.49±2.32ac特級(jí) 10mg/mL 34.60±1.85ac甲級(jí) 10mg/mL 31.83±2.79be乙級(jí) 10mg/mL 30.65±1.85be

2.2 不同等級(jí)寧夏枸杞提取液對(duì)小鼠肝組織中丙二醛(MDA)的影響

由表2可知，飲服不同等級(jí)寧夏枸杞子提取液的實(shí)驗(yàn)小鼠，其肝組織中MDA水平與空白對(duì)照組相比均有顯著差異（P<0.05）；VC組與空白對(duì)照相比較有顯著差異(P<0.05)，即寧夏枸杞子提取液與維生素C均可降低小鼠肝組織中MDA的水平。此外，特優(yōu)高劑量組、特優(yōu)低劑量組、特級(jí)高劑量組、特級(jí)低劑量組、甲級(jí)高劑量組之間無顯著差異，但與甲級(jí)低劑量組、乙級(jí)高劑量組、乙級(jí)低劑量組相比有顯著差異(P<0.05)，即不同等級(jí)寧夏枸杞子提取液對(duì)小鼠肝組織中MDA水平的影響有差異。

表2：不同等級(jí)寧夏枸杞提取液對(duì)小鼠肝組織中MDA的影響（±s，n=5）

表2：不同等級(jí)寧夏枸杞提取液對(duì)小鼠肝組織中MDA的影響（±s，n=5）

組別 劑量 小鼠肝組織中MDA/(nmol·mgprot-1)空白對(duì)照組 ——維生素C組 0.2mg/14.04±0.68d 10g 11.30±1.75ac 20mg/mL 10.71±2.02a 20mg/mL 11.45±1.42ac 20mg/mL 11.89±1.92ac 20mg/mL 12.72±2.69be 10mg/mL 11.02±1.39ac 10mg/mL 11.93±1.52ac 10mg/mL 12.43±0.85b 10mg/mL 13.34±0.94be枸杞提取液高劑量組特優(yōu)特級(jí)甲級(jí)乙級(jí)枸杞提取液低劑量組特優(yōu)特級(jí)甲級(jí)乙級(jí)

2.3 不同等級(jí)寧夏枸杞提取液對(duì)小鼠肝組織中超氧化物歧化酶(SOD)的影響

表3：不同等級(jí)寧夏枸杞提取液對(duì)小鼠肝組織中SOD的影響（±s，n=5）

表3：不同等級(jí)寧夏枸杞提取液對(duì)小鼠肝組織中SOD的影響（±s，n=5）

組別 劑量 小鼠肝組織中MDA/(nmol·mgprot-1)空白對(duì)照組 ——維生素C組 0.2mg/10g枸杞提取液高劑量組特優(yōu) 20mg/mL特級(jí) 20mg/mL甲級(jí) 20mg/mL乙級(jí) 20mg/mL枸杞提取液低劑量組特優(yōu) 10mg/mL特級(jí) 10mg/mL甲級(jí) 10mg/mL乙級(jí) 10mg/mL 225.48±4.71d 259.53±9.72ac 266.12±6.33a 263.67±8.45ac 248.82±3.92b 239.46±5.69be 261.24±5.55ac 260.45±6.59ac 246.81±7.82be 240.28±9.94be

由表3可知，飲服不同等級(jí)寧夏枸杞子提取液的實(shí)驗(yàn)小鼠，其肝組織中 SOD活力與空白對(duì)照組相比均有顯著差異（P<0.05）；VC組與空白對(duì)照相比較有顯著差異（P<0.05），即寧夏枸杞子提取液與維生素均可提高小鼠肝組織中 SOD的活力。此外，特優(yōu)高劑量組、特優(yōu)低劑量組、特級(jí)高劑量組、特級(jí)低劑量組之間無顯著差異，但與甲級(jí)高劑量組、甲級(jí)低劑量組、乙級(jí)高劑量組、乙級(jí)低劑量組相比有顯著差異（P<0.05），即不同等級(jí)寧夏枸杞提取液對(duì)小鼠肝組織中 SOD活力的影響有差異，但高劑量與低劑量之間無顯著性差異。

3 分析與討論

常壓抗缺氧實(shí)驗(yàn)是將小鼠置于在密閉缺氧空間中，致使心、腦等器官缺氧，以小鼠在密閉缺氧環(huán)境中的存活時(shí)間作為指標(biāo)，可以測(cè)定某種藥物的抗缺氧能力。枸杞表現(xiàn)其藥理功效的主要成分有多糖、維生素、?；撬?、黃酮等多種成分。有報(bào)道認(rèn)為，枸杞汁、枸杞多糖均可提高小鼠的抗缺氧和抗疲勞能力。本研究所用寧夏枸杞超聲提取液對(duì)小鼠進(jìn)行的密閉缺氧實(shí)驗(yàn)顯示，不同等級(jí)寧夏枸杞均能顯著提高小鼠的抗缺氧能力，這個(gè)結(jié)論與上述研究一致；且不同等級(jí)寧夏枸杞對(duì)小鼠抗缺氧能力的影響有差異，特優(yōu)和特級(jí)寧夏枸杞對(duì)小鼠抗缺氧能力的影響高于甲級(jí)和乙級(jí)。

機(jī)體中過多的自由基會(huì)破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，干擾正常代謝，加速機(jī)體衰老。SOD可清除體內(nèi)自由基，其活力高低可反映出機(jī)體清除自由基能力的強(qiáng)弱。MDA是脂質(zhì)過氧化的中間代謝產(chǎn)物，其水平的高低往往可以間接反映機(jī)體產(chǎn)生自由基的水平和細(xì)胞膜的氧化損傷程度。因此，通過檢測(cè)機(jī)體內(nèi)SOD的活力和MDA水平的變化，可以較好的反應(yīng)機(jī)體的抗氧化能力。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，飲服不同等級(jí)的寧夏枸杞子提取液可顯著降低小鼠肝組織中MDA水平，提高小鼠肝組織中SOD活力。說明不同等級(jí)的寧夏枸杞子提取液能有效提高小鼠的抗氧化能力，這與目前已有研究報(bào)道一致；且不同等級(jí)的寧夏枸杞對(duì)小鼠體內(nèi)抗氧化活性的影響有差異，特優(yōu)和特級(jí)寧夏枸杞對(duì)小鼠體內(nèi)抗氧化活性好于甲級(jí)和乙級(jí)。

枸杞多糖是枸杞子中最重要的活性成分，其含量高低與枸杞生物學(xué)功效密切相關(guān)。有報(bào)道認(rèn)為，枸杞的抗氧化能力與維生素C類似，可能與其所含多糖有關(guān)。不同等級(jí)寧夏枸杞的多糖含量測(cè)定顯示，特優(yōu)級(jí)為12.84%，特級(jí)為11.32%，甲級(jí)為10.79%，乙級(jí)為9.68%，目前相關(guān)文獻(xiàn)中對(duì)不同等級(jí)枸杞中其他成分含量的相關(guān)研究報(bào)道較少。在本實(shí)驗(yàn)中，枸杞子超聲提取液對(duì)小鼠的抗缺氧能力及其體內(nèi)抗氧化活性的影響有差異，可能是為枸杞中各種成分綜合作用的結(jié)果。具體如何，有待進(jìn)一步研究。