陸碧玉 黃誠(chéng) 黃李霜 伍萍芝 蒙瞻瞻 嚴(yán)提珍( 通訊作者)

（柳州市婦幼保健院<柳州市生殖與遺傳研究所；廣西科技大學(xué)附屬婦產(chǎn)醫(yī)院、兒童醫(yī)院> 廣西 柳州 545001）

反復(fù)種植失敗（repeated/recurrent implantation failure，RIF）即指不孕癥患者經(jīng)歷多個(gè)體外受精-胚胎（in vitro fertilization，IVF）/卵細(xì)胞漿內(nèi)單精子注射（intracytoplasmic sperm injection，ICSI）周期并移植了多枚優(yōu)質(zhì)胚胎而未發(fā)生胚胎種植或臨床妊娠[1]。El-Toukhy 等[2]等將反復(fù)種植失?。╮epeated implantation failure，RIF）定義為≥2 次或3 次胚胎移植周期的失敗，或累積移植＞10 個(gè)優(yōu)質(zhì)胚胎仍未成功。IVF/ICSI 助孕治療中 RIF 的發(fā)生率可達(dá)5%～10%[3]。自身免疫性疾病已被證明與特發(fā)性不育、卵巢早衰、子宮內(nèi)膜異位和多囊卵巢綜合征等疾病有關(guān)，并且會(huì)影響生育的各個(gè)階段，包括卵巢和睪丸衰竭到著床失敗和妊娠丟失[4]。本文旨在闡明抗核抗體及抗核抗體譜和RIF 的相關(guān)性。

1.資料和方法

1.1 一般資料

選取2017 年7 月—2019 年12 月來(lái)我院就診的200 例進(jìn)行IVF 和/或ICSI 移植手術(shù)后，兩次或更多次植入都失敗的患者作為研究組，本方案經(jīng)倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及家屬知情同意并簽署知情同意書(shū)。納入標(biāo)準(zhǔn)：排除了雙方染色體異常，女方子宮形態(tài)異常、自身免疫性疾病，研究組年齡22 歲到48 歲。同期100 例IVF/ICSI 手術(shù)后妊娠成功孕婦作為對(duì)照組，對(duì)照組年齡23 歲到42 歲，成功標(biāo)準(zhǔn)為：移植后B 超確定為臨床妊娠；持續(xù)妊娠＞13W。檢測(cè)兩組患者的血清抗核抗體（ANA）和抗核抗體譜（ANAs）。

1.2 試劑和檢測(cè)方法

流式熒光免疫法所用試劑由美國(guó)宙斯科技公司提供，儀器為美國(guó)Luminex 200。該試劑盒可檢測(cè)抗核抗體（ANA）和9 項(xiàng)抗核抗體譜（ANAs），包括SSA、SSB、Sm、RNP、Scl 70、Jo 1、Cent B、Histone、dsDNA。嚴(yán)格參照試劑說(shuō)明書(shū)操作，以測(cè)定值≥100U/ml 判為陽(yáng)性。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察研究組和對(duì)照組的血清抗核抗體和抗核抗體譜陽(yáng)性例數(shù)和陽(yáng)性率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS19.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，用百分率表示研究組和對(duì)照組抗核抗體譜檢測(cè)分布情況。

2.結(jié)果

2.1 研究組不同種植失敗次數(shù)的病例數(shù)分布情況

種植失敗2 次有122 例，種植失敗3 次有51 例，種植失敗4 次有24 例，種植失敗5 次有2 次，種植失敗5 次以上有1 例。

2.2 兩組ANA 和ANAs 檢測(cè)結(jié)果比較

研究組和對(duì)照組ANA 與ANAs 陽(yáng)性例數(shù)和陽(yáng)性率比較，研究組共檢出ANA 陽(yáng)性41 例，陽(yáng)性率為20.5%；對(duì)照組檢出陽(yáng)性數(shù)為6 例，陽(yáng)性率為6%；研究組檢出ANAs 陽(yáng)性22 例，陽(yáng)性率為11.0%，對(duì)照組檢出陽(yáng)性2 例，陽(yáng)性率為2.0%。兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩組ANA 與ANAs 陽(yáng)性數(shù)和陽(yáng)性率分布情況[n（%）]

2.3 ANAs 檢測(cè)分布情況

ANAs 共檢測(cè)了7 項(xiàng)，研究組7 項(xiàng)均有陽(yáng)性例數(shù)，總ANAs 檢出陽(yáng)性數(shù)為22 例，陽(yáng)性率為11%。對(duì)照組中僅RNP 這一項(xiàng)有陽(yáng)性例數(shù)，ANAs 的陽(yáng)性檢出率為2%，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.34，P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 研究組和對(duì)照組抗核抗體譜檢測(cè)分布情況[n（%）]

3.討論

ANA 又稱抗核酸抗原抗體，是一系列抗細(xì)胞核抗原自身抗體的總稱，能與動(dòng)物細(xì)胞核發(fā)生反應(yīng)，主要存在于血清中。它們被定義為與細(xì)胞核內(nèi)某些結(jié)構(gòu)結(jié)合的分子，包括DNA、RNA、蛋白質(zhì)或其復(fù)合物?？购丝贵w譜（ANAs）是具有結(jié)合和破壞細(xì)胞核內(nèi)某些結(jié)構(gòu)的能力的特定類型的自身抗體[5]。本文中RIF 實(shí)驗(yàn)組中ANA 和ANAs 陽(yáng)性率分別為20.5%和6%，明顯大于對(duì)照組的陽(yáng)性率11%和2%。而近幾年來(lái)，RIF 和ANA/ANAs 的研究中， Motak-Pochrzest H 等[6]的研究中，與對(duì)照組的血清ANA 陽(yáng)性率（10.5%）相比，研究組中的ANA 陽(yáng)性率高達(dá)43.1%，該研究顯示ANA 是復(fù)發(fā)植入失敗患者血清中最常檢測(cè)到的自身抗體。 Birkenfeld A 等[7]認(rèn)為ANA 陽(yáng)性患者植入失敗的主要原因可能與卵母細(xì)胞和胚胎受損有關(guān)。李穎等[8]的研究中ANA 在首次體外受精-胚胎移植的不孕患者中的陽(yáng)性率為35.18%，但此研究未區(qū)分病例是否為反復(fù)種植失敗患者。本文的反復(fù)種植失敗患者中的ANA 陽(yáng)性率（20.5%），比之前的幾項(xiàng)研究中的陽(yáng)性率要偏低。存在差異這可能是與研究對(duì)象的不同及不同地區(qū)、民族人群中存在區(qū)別，以及檢測(cè)方法的差別有關(guān)。但這些研究都提示ANA 與種植失敗有著密切的關(guān)系，引起IVF-ET 患者種植后更壞的結(jié)局。

ANA 與ANAs 的陽(yáng)性檢出率存在有差異（20.5%和11%），主要因?yàn)榭购丝贵w譜的型別眾多，本次只檢測(cè)ANAs 中的7 種，當(dāng)出現(xiàn)ANA 陽(yáng)性而ANAs 非陽(yáng)性時(shí)，可能是本實(shí)驗(yàn)室未檢測(cè)到的其它種類的ANAs。其中檢出最高的ANAs 為抗RNP，陽(yáng)性率為3%（6/200），而Sm、Histone 未見(jiàn)檢出陽(yáng)性病例。而在對(duì)照組中檢測(cè)到的抗核抗體譜均為抗RNP。研究組中未檢出抗核抗體譜中的抗Sm、Histone 的可能原因：①病例數(shù)不夠，可以繼續(xù)加大病例數(shù)繼續(xù)研究，觀察是否會(huì)出現(xiàn)這兩類抗核抗體譜陽(yáng)性病例；②在反復(fù)種植失敗患者中此兩類抗核抗體譜確實(shí)無(wú)陽(yáng)性，無(wú)研究?jī)r(jià)值，可以不用在反復(fù)種植失敗病例中檢測(cè)這兩項(xiàng)抗核抗體譜。目前對(duì)于ANAs 對(duì)于體外受精-胚胎移植影響的研究罕見(jiàn)，F(xiàn)an J等[9]研究中提示抗dsDNA 與體外受精-胚胎移植結(jié)局有關(guān)，導(dǎo)致反復(fù)種植失敗。ANAs 具體檢測(cè)種類的確定需要首先研究哪種型別的抗核抗體譜與外受精-胚胎移植有關(guān)，進(jìn)而確定在反復(fù)種植失敗患者中檢測(cè)何種ANAs，以便探討ANAs 對(duì)IVF-ET 結(jié)局的影響機(jī)制。

本文采用多重微球流式熒光免疫技術(shù)對(duì)ANA 及ANAs 進(jìn)行檢測(cè)，此方法能半定量或定量檢測(cè)特異性自身抗體，尚曉瑩等[10]研究表明流式熒光免疫法的診斷靈敏度雖然低于免疫印跡法與間接免疫熒光法，但特異度高于后兩者，而間接免疫熒光法法檢測(cè)ANA 的靈敏度高于其余兩方法。運(yùn)用流式熒光免疫法檢測(cè)ANA及ANAs 特異度更高，且其自動(dòng)化程度高，檢測(cè)速度快，能幫助評(píng)估反復(fù)種植失敗患者的病情變化、監(jiān)測(cè)治療效果，指導(dǎo)臨床合理用藥，因此可以用多重微球流式熒光免疫法替代免疫印跡法來(lái)檢測(cè)ANA 及ANAs。