中華絨螯蟹大規(guī)格親蟹ES-P2017家系規(guī)?；瘶嫿?/h1>
2020-02-24 07:49:58周軍鄧燕飛許鄭超李旭光陸全平周剛
水產養(yǎng)殖 2020年1期
周軍，鄧燕飛，許鄭超，李旭光，陸全平，周剛
（江蘇省淡水水產研究所，江蘇 南京 210017）
中華絨螯蟹（Eriocheir sinensis）俗稱河蟹，自上世紀突破人工育苗后河蟹養(yǎng)殖快速發(fā)展，已發(fā)展成年產近800 000 t、產值550億元的水產支柱產業(yè)[1]。隨著河蟹養(yǎng)殖的發(fā)展，遼河水系、甌江水系的河蟹被引入河蟹主產區(qū)長江水系地區(qū)，加之人工繁育缺乏有效的育種措施，導致長江水系河蟹種質混雜和退化嚴重[2，3]。盡管目前已育成并推廣應用4個長江水系河蟹新品種“長江1號”、“長江2號”、“江海21號”、“諾亞1號”，并在生產中應用推廣[4-5]，但新品種的數(shù)量和有限的推廣面積與河蟹養(yǎng)殖體量之間存在巨大的差距，為滿足河蟹產業(yè)可持續(xù)健康發(fā)展，有必要不斷挖掘長江水系河蟹優(yōu)異種質資源進行遺傳育種應用于生產。家系選育是一種有效的遺傳育種手段，成功應用于中國對蝦、羅氏沼蝦等甲殼動物新品種的選育[6-7]，目前長江水系、遼河水系河蟹已開展家系選育研究[8-15]，江蘇省淡水水產研究所自2008年成功突破長江水系大規(guī)格河蟹家系構建以來不斷進行技術創(chuàng)新，2017年選擇長江水系河蟹不同群體的大規(guī)格親蟹構建ES-P2017家系，成功定向構建全同胞家系96個，家系構建成功率96.00%，最終獲得40個大眼幼體產量0.3 kg以上的家系，現(xiàn)總結如下以期為河蟹遺傳育種工作創(chuàng)建新的遺傳材料和積累材料。
1 材料與方法
1.1 親蟹的選擇
2017年11月，外部形態(tài)特征參照GB/T 19783—2005中華絨螯蟹，從“長江2號”核心群體、蘇南養(yǎng)殖群體、蘇北養(yǎng)殖群體、長江野生群體、洪澤湖野生群體中，選擇體質健壯、無病無傷、性腺發(fā)育良好的大規(guī)格河蟹作為家系構建的親蟹，每個群體選擇20組（雌雄比為1∶1），雌蟹平均規(guī)格在169.0～201.6 g之間，雄蟹平均規(guī)格在271.5～318.5 g之間（表1），物理標記后送至射陽縣朱平水產苗種有限公司[13]。
表1不同群體親蟹規(guī)格情況
1.2 家系規(guī)?；瘶嫿?/h3>
親蟹入池前7 d，向交配池中注入0.5 m深、用80目篩絹過濾的鹽度為22左右的海水，用50 g/m3含有效氯30%左右的漂白粉進行消毒。以直徑50 cm、高60 cm、上端敞口底端封閉的聚乙烯圓柱形網(wǎng)籠作為定向交配設施，網(wǎng)籠上端連接一個可松緊的網(wǎng)兜和直徑4 cm的PVC管以封閉網(wǎng)籠上端，以便于取放親蟹和投飼。根據(jù)配組計劃將親蟹按雌雄比 1∶1置于網(wǎng)籠中進行配組，將100個網(wǎng)籠用鐵絲貫穿分兩組放入土池，進行強化培育和交配，交配期間隨氣溫降低而逐漸加高水位。
1.3 抱卵蟹的越冬
2017年12月20日抽干池水，將抱卵雌蟹移出網(wǎng)籠留在交配池中越冬，未抱卵雌蟹和雄蟹取出，重新注入經(jīng)消毒鹽度為22左右的海水，根據(jù)氣溫變化逐漸加高水位并配備微孔增氧、水車式增氧機，越冬期間加強水質、營養(yǎng)管理，確保抱卵蟹的越冬存活。
1.4 家系的定向繁育
采用56只室內水泥池（4 m×4 m×1.5 m）作為定向育苗設施，池底架設氣頭確保育苗期間水體溶氧充足、均衡，“放幼”前1 d注入用80目篩絹過濾的鹽度為22左右的海水，水深0.5 m。2018年4月7日，選擇56只活力強、胚胎發(fā)育同步的抱卵蟹，按照1池1只抱卵蟹的原則進行定向“放幼”，“放幼”結束后移出雌蟹。育苗期間全程投喂活輪蟲，每天根據(jù)吃食情況加減輪蟲投喂量，并控制好水質和確保增氧。
1.5 家系的淡化和起捕
采用原池淡化技術，逐步降低育苗池水的鹽度，淡化期間投喂活輪蟲輔以淡水枝角類，淡化結束后采用燈光進行起捕。
2 結果
2.1 家系規(guī)模化構建
2017年12月20日，將抱卵雌蟹移出網(wǎng)籠原池越冬，經(jīng)統(tǒng)計共成功定向構建全同胞家系96個，家系構建成功率96%。
2.2 抱卵蟹的越冬
前后共選擇96只標記、附肢齊全、活力強的抱卵蟹在原池越冬，至2018年4月7日共獲活力強的、胚胎發(fā)育良好的抱卵蟹75只，越冬成活率達78.13%，越冬成活率均在70%以上，其中蘇南養(yǎng)殖群體的越冬成活率最高達81.81%，不同群體親蟹越冬成活具體情況見表2。
表2不同群體親蟹越冬成活率比較
2.3 家系的定向繁育
截止5月20日共計收獲產量0.3 kg以上全同胞家系40個，總產量64.4 kg，平均產量為1.61 kg，其中產量1 kg以上家系29個，產量3 kg以上家系4個，單個家系大眼幼體平均產量再創(chuàng)新高，不同家系產量情況見圖1。
3 討論
3.1 家系的構建
以往采用土池、封閉網(wǎng)箱作為家系規(guī)?；瘶嫿ǖ呐鋵鏊鵞8，13]，此次親蟹定向交配采用單個網(wǎng)籠作為家系規(guī)模化構建交配場所，較以往小土坑和連體網(wǎng)箱作為交配場所具有以下優(yōu)勢，首先可隨時檢查親蟹攝食、配對和抱卵情況；其次歷年采用大規(guī)格親蟹繁育的實踐證明大規(guī)格親蟹配對難且配對時間長，用網(wǎng)籠做為交配場所其網(wǎng)眼大不會由于附著物而堵塞網(wǎng)眼阻隔籠內外水交通，讓親蟹處在良好的水質環(huán)境中。此外網(wǎng)籠上端架設的PVC管連接網(wǎng)籠，方便投飼和去除剩餌，可根據(jù)吃食情況靈活投飼防止殘餌敗壞水質和確保親蟹營養(yǎng)充足。
3.2 家系的越冬
為確保抱卵蟹的越冬成活率，越冬期間根據(jù)每天的天氣情況采取不斷加深水位以防水溫劇烈變化；適時開啟微孔增氧或水車式增氧機，特別是大霧天全天候增氧確保池水溶氧充足；根據(jù)水質情況適時換水和適量投餌，確保越冬期間池水水質良好，親蟹營養(yǎng)均衡。越冬結果顯示在同池越冬的不同群體越冬成活率不同，其中以蘇南養(yǎng)殖群體群體越冬成活率最高達81.81%，蘇北養(yǎng)殖群體越冬成活率最低只72.22%，這可能與不同群體親蟹在選擇前的營養(yǎng)狀態(tài)存在差異有關[16]。
3.3 家系的定向繁育
3.3.1 水質和投飼管理 歷年來我們采用土池中架設網(wǎng)箱、篩絹網(wǎng)將土池圍隔成一個個小池作為家系定向繁育設施[8，13]，育苗過程中網(wǎng)箱和篩絹網(wǎng)因附著物增多造成育苗水體交換能力差直至阻斷水體流通，此時需進排水時則極為不便。在室外土池中小水體育苗水體小，隨著投餌量的不斷加大，糞便和殘餌影響水質變壞，尤其是遇到風雨天極易造成幼體大量死亡或緊貼網(wǎng)壁而逐漸死亡[8，13]。此次采用室內水泥池育苗規(guī)避了風雨對育苗的影響且進排水便捷，室內水源池培養(yǎng)“藻水”可不斷補充至育苗池，水質相對便于管理。
結合歷年來家系育苗經(jīng)驗采用“肥水放幼”，“放幼”前在各育苗池注入以海鏈藻為優(yōu)勢種的“藻水”?！胺庞住苯Y束后即開始投飼活輪蟲，用量瓶觀察吃食情況，以1～2 h基本吃盡為好，堅持少量多次靈活掌握投餌量，防止投餌過多輪蟲與溞狀幼體競爭生態(tài)空間和影響水質，水泥池因充氣無死角較土池更容易準確觀察育苗池中輪蟲的剩余量相對易做到精準投喂。
3.3.2 家系產量 因家系數(shù)量多捕撈時間長，故在56個水泥池中只起捕40個大眼幼體產量在0.3 kg以上的家系，產苗量1 kg以上家系29個，產苗量3 kg以上家系4個，產量較歷年都高，分析其原因一是水泥池水體相對網(wǎng)箱、土池育苗圍隔較大，幼體密度相對要稀，降低了幼體后期的相互殘殺，如2013年土池育苗圍隔就存在Z5變大眼幼體成活率明顯降低[13]；此外水泥池氣頭布置均勻溶氧充足，尤其是在大眼幼體階段使池水劇烈翻滾，有效降低了大眼幼體的互殘率；二是水泥池進排水方便水質相對要好控制；三是水泥池育苗采用原池淡化，有效降低了大眼幼體的病死率。不同家系間產量差異較大，產量最高的家系達3.25 kg，產量最低的家系亦有0.35 kg，前者是后者的近10倍，究其原因有以下幾個因素，一是各家系的“放幼”數(shù)量就存在差異，有的抱卵蟹產的很干凈，有的抱卵蟹產到中途已死亡，有的抱卵蟹“放幼”結束后腹肢上尚附著很多未出膜的死亡幼體；二是在育苗過程中有的家系因育苗過程中由于投餌量過多導致輪蟲濾食池中藻類水體變清又遭遇陰雨天，此時哪怕再加入水源池“藻水”亦難以使池水“變肥”，水質變化致使幼體死亡；三是在育苗后期幼體越多的池因投餌量大糞便多水質越穩(wěn)定，而一旦出現(xiàn)幼體死亡該池幼體開始不間斷死亡，幼體不斷減少難以控制投餌量致使水質越來越差又導致幼體越來越少。四是由于“放幼”出膜時間不同步導致各家系幼體發(fā)育不同步，此次分兩批起捕導致部分出膜早的大眼幼體變幼蟹而無法起捕。
基于河蟹抱卵量大，積極開展河蟹家系選育是研究河蟹遺傳規(guī)律和選育品系快速提純的有效途徑，家系構建繁育出苗則是這項工作的基礎，歷年來家系構建實踐證明，隨著構建技術的不斷改進家系育苗量不斷提高完全可以滿足選育的要求，而不同家系間產量差異是育苗技術管理不到位還是遺傳因素造成的將在今后工作深入研究。
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1 材料與方法
1.1 親蟹的選擇
2017年11月，外部形態(tài)特征參照GB/T 19783—2005中華絨螯蟹，從“長江2號”核心群體、蘇南養(yǎng)殖群體、蘇北養(yǎng)殖群體、長江野生群體、洪澤湖野生群體中，選擇體質健壯、無病無傷、性腺發(fā)育良好的大規(guī)格河蟹作為家系構建的親蟹，每個群體選擇20組（雌雄比為1∶1），雌蟹平均規(guī)格在169.0～201.6 g之間，雄蟹平均規(guī)格在271.5～318.5 g之間（表1），物理標記后送至射陽縣朱平水產苗種有限公司[13]。
表1不同群體親蟹規(guī)格情況
1.2 家系規(guī)?；瘶嫿?/h3>
親蟹入池前7 d，向交配池中注入0.5 m深、用80目篩絹過濾的鹽度為22左右的海水，用50 g/m3含有效氯30%左右的漂白粉進行消毒。以直徑50 cm、高60 cm、上端敞口底端封閉的聚乙烯圓柱形網(wǎng)籠作為定向交配設施，網(wǎng)籠上端連接一個可松緊的網(wǎng)兜和直徑4 cm的PVC管以封閉網(wǎng)籠上端，以便于取放親蟹和投飼。根據(jù)配組計劃將親蟹按雌雄比 1∶1置于網(wǎng)籠中進行配組，將100個網(wǎng)籠用鐵絲貫穿分兩組放入土池，進行強化培育和交配，交配期間隨氣溫降低而逐漸加高水位。
1.3 抱卵蟹的越冬
2017年12月20日抽干池水，將抱卵雌蟹移出網(wǎng)籠留在交配池中越冬，未抱卵雌蟹和雄蟹取出，重新注入經(jīng)消毒鹽度為22左右的海水，根據(jù)氣溫變化逐漸加高水位并配備微孔增氧、水車式增氧機，越冬期間加強水質、營養(yǎng)管理，確保抱卵蟹的越冬存活。
1.4 家系的定向繁育
采用56只室內水泥池（4 m×4 m×1.5 m）作為定向育苗設施，池底架設氣頭確保育苗期間水體溶氧充足、均衡，“放幼”前1 d注入用80目篩絹過濾的鹽度為22左右的海水，水深0.5 m。2018年4月7日，選擇56只活力強、胚胎發(fā)育同步的抱卵蟹，按照1池1只抱卵蟹的原則進行定向“放幼”，“放幼”結束后移出雌蟹。育苗期間全程投喂活輪蟲，每天根據(jù)吃食情況加減輪蟲投喂量，并控制好水質和確保增氧。
1.5 家系的淡化和起捕
采用原池淡化技術，逐步降低育苗池水的鹽度，淡化期間投喂活輪蟲輔以淡水枝角類，淡化結束后采用燈光進行起捕。
2 結果
2.1 家系規(guī)模化構建
2017年12月20日，將抱卵雌蟹移出網(wǎng)籠原池越冬，經(jīng)統(tǒng)計共成功定向構建全同胞家系96個，家系構建成功率96%。
2.2 抱卵蟹的越冬
前后共選擇96只標記、附肢齊全、活力強的抱卵蟹在原池越冬，至2018年4月7日共獲活力強的、胚胎發(fā)育良好的抱卵蟹75只，越冬成活率達78.13%，越冬成活率均在70%以上，其中蘇南養(yǎng)殖群體的越冬成活率最高達81.81%，不同群體親蟹越冬成活具體情況見表2。
表2不同群體親蟹越冬成活率比較
2.3 家系的定向繁育
截止5月20日共計收獲產量0.3 kg以上全同胞家系40個，總產量64.4 kg，平均產量為1.61 kg，其中產量1 kg以上家系29個，產量3 kg以上家系4個，單個家系大眼幼體平均產量再創(chuàng)新高，不同家系產量情況見圖1。
3 討論
3.1 家系的構建
以往采用土池、封閉網(wǎng)箱作為家系規(guī)?；瘶嫿ǖ呐鋵鏊鵞8，13]，此次親蟹定向交配采用單個網(wǎng)籠作為家系規(guī)模化構建交配場所，較以往小土坑和連體網(wǎng)箱作為交配場所具有以下優(yōu)勢，首先可隨時檢查親蟹攝食、配對和抱卵情況；其次歷年采用大規(guī)格親蟹繁育的實踐證明大規(guī)格親蟹配對難且配對時間長，用網(wǎng)籠做為交配場所其網(wǎng)眼大不會由于附著物而堵塞網(wǎng)眼阻隔籠內外水交通，讓親蟹處在良好的水質環(huán)境中。此外網(wǎng)籠上端架設的PVC管連接網(wǎng)籠，方便投飼和去除剩餌，可根據(jù)吃食情況靈活投飼防止殘餌敗壞水質和確保親蟹營養(yǎng)充足。
3.2 家系的越冬
為確保抱卵蟹的越冬成活率，越冬期間根據(jù)每天的天氣情況采取不斷加深水位以防水溫劇烈變化；適時開啟微孔增氧或水車式增氧機，特別是大霧天全天候增氧確保池水溶氧充足；根據(jù)水質情況適時換水和適量投餌，確保越冬期間池水水質良好，親蟹營養(yǎng)均衡。越冬結果顯示在同池越冬的不同群體越冬成活率不同，其中以蘇南養(yǎng)殖群體群體越冬成活率最高達81.81%，蘇北養(yǎng)殖群體越冬成活率最低只72.22%，這可能與不同群體親蟹在選擇前的營養(yǎng)狀態(tài)存在差異有關[16]。
3.3 家系的定向繁育
3.3.1 水質和投飼管理 歷年來我們采用土池中架設網(wǎng)箱、篩絹網(wǎng)將土池圍隔成一個個小池作為家系定向繁育設施[8，13]，育苗過程中網(wǎng)箱和篩絹網(wǎng)因附著物增多造成育苗水體交換能力差直至阻斷水體流通，此時需進排水時則極為不便。在室外土池中小水體育苗水體小，隨著投餌量的不斷加大，糞便和殘餌影響水質變壞，尤其是遇到風雨天極易造成幼體大量死亡或緊貼網(wǎng)壁而逐漸死亡[8，13]。此次采用室內水泥池育苗規(guī)避了風雨對育苗的影響且進排水便捷，室內水源池培養(yǎng)“藻水”可不斷補充至育苗池，水質相對便于管理。
結合歷年來家系育苗經(jīng)驗采用“肥水放幼”，“放幼”前在各育苗池注入以海鏈藻為優(yōu)勢種的“藻水”?！胺庞住苯Y束后即開始投飼活輪蟲，用量瓶觀察吃食情況，以1～2 h基本吃盡為好，堅持少量多次靈活掌握投餌量，防止投餌過多輪蟲與溞狀幼體競爭生態(tài)空間和影響水質，水泥池因充氣無死角較土池更容易準確觀察育苗池中輪蟲的剩余量相對易做到精準投喂。
3.3.2 家系產量 因家系數(shù)量多捕撈時間長，故在56個水泥池中只起捕40個大眼幼體產量在0.3 kg以上的家系，產苗量1 kg以上家系29個，產苗量3 kg以上家系4個，產量較歷年都高，分析其原因一是水泥池水體相對網(wǎng)箱、土池育苗圍隔較大，幼體密度相對要稀，降低了幼體后期的相互殘殺，如2013年土池育苗圍隔就存在Z5變大眼幼體成活率明顯降低[13]；此外水泥池氣頭布置均勻溶氧充足，尤其是在大眼幼體階段使池水劇烈翻滾，有效降低了大眼幼體的互殘率；二是水泥池進排水方便水質相對要好控制；三是水泥池育苗采用原池淡化，有效降低了大眼幼體的病死率。不同家系間產量差異較大，產量最高的家系達3.25 kg，產量最低的家系亦有0.35 kg，前者是后者的近10倍，究其原因有以下幾個因素，一是各家系的“放幼”數(shù)量就存在差異，有的抱卵蟹產的很干凈，有的抱卵蟹產到中途已死亡，有的抱卵蟹“放幼”結束后腹肢上尚附著很多未出膜的死亡幼體；二是在育苗過程中有的家系因育苗過程中由于投餌量過多導致輪蟲濾食池中藻類水體變清又遭遇陰雨天，此時哪怕再加入水源池“藻水”亦難以使池水“變肥”，水質變化致使幼體死亡；三是在育苗后期幼體越多的池因投餌量大糞便多水質越穩(wěn)定，而一旦出現(xiàn)幼體死亡該池幼體開始不間斷死亡，幼體不斷減少難以控制投餌量致使水質越來越差又導致幼體越來越少。四是由于“放幼”出膜時間不同步導致各家系幼體發(fā)育不同步，此次分兩批起捕導致部分出膜早的大眼幼體變幼蟹而無法起捕。
基于河蟹抱卵量大，積極開展河蟹家系選育是研究河蟹遺傳規(guī)律和選育品系快速提純的有效途徑，家系構建繁育出苗則是這項工作的基礎，歷年來家系構建實踐證明，隨著構建技術的不斷改進家系育苗量不斷提高完全可以滿足選育的要求，而不同家系間產量差異是育苗技術管理不到位還是遺傳因素造成的將在今后工作深入研究。
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