郎利敏，王克領(lǐng)，張立憲，游 一，徐引弟，焦文強(qiáng)，朱文豪

（河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，河南 鄭州 450002）

豬繁殖與呼吸綜合征，又稱豬藍(lán)耳病，是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的一種豬烈性傳染病，各種年齡的豬均可感染，主要表現(xiàn)為母豬高燒、繁殖障礙，產(chǎn)死胎、木乃伊胎和弱仔等，仔豬、保育豬、肥育豬主要表現(xiàn)為高熱、氣喘、呼吸困難等呼吸道病癥狀，死亡率可達(dá)100%[1]，是嚴(yán)重威脅我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的重要疾病之一。

弓形蟲病又稱為弓漿蟲病或弓形體病，是由剛第弓形蟲（Toxoplasmagondii）引起的一種人畜共患原蟲病，豬發(fā)病以高熱稽留、呼吸困難、妊娠母豬流產(chǎn)、死胎等為特征?？赏ㄟ^口、鼻、眼、呼吸道、消化道及皮膚等多種途徑侵入豬體。只有磺胺類藥物對(duì)其有良好的治療效果，其他藥物無效[2]。近些年，豬弓形蟲病的發(fā)病呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，嚴(yán)重危害了養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。

2018年8月，河南開封某豬場(chǎng)肥育豬群發(fā)生一例疑似豬繁殖與呼吸綜合征和弓形蟲病混合感染疫情，為確診病因，進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)室剖檢病變觀察、RT-PCR檢測(cè)、弓形蟲間接血凝抗體檢測(cè)，確診該病例為豬繁殖與呼吸綜合征病毒和弓形蟲混合感染，通過采取改善飼養(yǎng)管理、使用有效藥物等措施，及時(shí)控制了疫情，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 發(fā)病情況

開封某發(fā)病豬場(chǎng)存欄40 kg左右肥育豬300頭，7月底豬群開始出現(xiàn)發(fā)燒、減食，病豬呼吸困難，皮膚發(fā)紅，有的急性死亡，發(fā)病前期使用替米考星和氟苯尼考進(jìn)行治療，連續(xù)用藥7 d，期間發(fā)病、死亡豬不斷增加，疫情無法控制，遂來河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物疫病診斷中心就診。

2 臨床癥狀

病豬高熱，體溫41.5～42.0℃，精神沉郁，采食量下降或廢絕，呼吸困難，呈明顯的腹式呼吸，眼結(jié)膜潮紅，發(fā)病初期頭部、四肢、腹下出現(xiàn)紫紅色出血斑，后期全身紫紅色，個(gè)別豬有神經(jīng)癥狀、后肢癱瘓、無法站立，有的急性死亡。

3 剖檢病變

剖檢病死豬3頭，全身淋巴結(jié)腫大、出血，切面有灰白色干酪樣壞死灶；肺臟紫紅色，出血、腫脹、實(shí)變，肺間質(zhì)增寬，充滿黃色膠凍樣水腫液；胸腔、心包腔有淡黃色、清亮滲出液；心外膜有針尖大出血點(diǎn)，喉頭黏膜、膀胱黏膜有出血點(diǎn)；肝臟腫大，質(zhì)硬，暗紅色，上有少量灰白色、灰黃色粟粒大小壞死灶；脾臟腫大、出血，邊緣有少量梗死灶；胃底黏膜彌漫性出血，有的豬有潰瘍?cè)睢?/p>

4 實(shí)驗(yàn)室診斷

4.1 病料

發(fā)病豬場(chǎng)送檢病豬3頭、血清20頭份。

4.2 主要試劑

RNA提取試劑盒、DL 2 000 Marker、瓊脂糖、Taq酶、MLV反轉(zhuǎn)錄酶以及RNA酶抑制劑，購(gòu)自于寶生物工程（大連）有限公司。豬繁殖與呼吸綜合征病毒特異性引物由上海生工公司合成。弓形蟲間接血凝診斷抗原、標(biāo)準(zhǔn)陰、陽(yáng)性對(duì)照血清，購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所。

4.3 病毒RT-PCR檢測(cè)

無菌操作采集病豬的肺臟、脾臟、淋巴結(jié)等組織約1 g，剪碎，加1mL無菌PBS液，研磨之后將研磨管中的液體倒入1.5 mL EP管，-70℃反復(fù)凍融3次，12 000 r/min離心3min，取100μL上清液用于RNA的提取。

4.3.1 引物合成 參考GenBank中已發(fā)表的PRRSV毒株ORF5序列的保守區(qū)序列，應(yīng)用Premier5.0軟件設(shè)計(jì)引物，ORF5-F:5'-CCATTCTGGTGG CAATTTGA-3'，ORF5-R:5'-GGCATATATCATCACT GGCG-3'。預(yù)期擴(kuò)增目的片段436 bp。

4.3.2 病毒RNA提取及PCR擴(kuò)增 按照RNA提取試劑盒操作說明提取病毒總RNA，提取后的RNA隨即進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。反轉(zhuǎn)錄體系如下：2×buffer 2 μL，dNTP 2μL，隨機(jī)引物0.3μL，RNA酶抑制劑0.3μL，MLV反轉(zhuǎn)錄酶0.5μL，RNA 4.9μL，共10 μL。混合均勻后置于42℃水浴1 h，然后放置70℃水浴滅活10min后放4℃冰箱冷卻15min后配制PCR反應(yīng)體系：2×PCR buffer 2.5μL，dNTP 4μL，上、下游引物各1μL，TaqDNA聚合酶0.5μL，cDNA 5μL，滅菌雙蒸水補(bǔ)足25μL。反應(yīng)體系如下：95℃預(yù)變性5 min，94℃變性30 s，56℃退火45 s，72℃延伸1min，35個(gè)循環(huán)后72℃延伸10min。PRRSV預(yù)期大小片段為436 bp，反應(yīng)結(jié)束后取10μL PCR產(chǎn)物于1%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳，在凝膠成像系統(tǒng)上觀察擴(kuò)增的目的片段[3-6]。

4.4 弓形蟲檢測(cè)

無菌操作取病豬的肝、脾、肺門淋巴結(jié)等涂片，干燥固定，經(jīng)姬姆薩氏法染色后，低倍鏡觀察。采集病豬血清12頭份、同群健康豬血清8頭份，使用中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)的弓形蟲抗體間接血凝檢測(cè)試劑，按說明書方法進(jìn)行弓形蟲抗體檢測(cè)。

5 結(jié)果與分析

5.1 PRRSV的RT-PCR檢測(cè)結(jié)果

從送檢3頭病豬的肺臟、脾臟、淋巴結(jié)的混合病料中擴(kuò)增出了長(zhǎng)度約436 bp的目的片段，與預(yù)期的結(jié)果一致，表明所檢測(cè)的病料為PRRSV陽(yáng)性。

5.2 弓形蟲檢測(cè)結(jié)果

無菌操作取病豬的肝、脾、肺門淋巴結(jié)等涂片，干燥固定，經(jīng)姬姆薩氏法染色后，低倍鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)少量半月形的弓形蟲滋養(yǎng)體，胞漿呈淺藍(lán)色，核呈深藍(lán)紫色，偏于蟲體一端，核與尖端之間有顆粒。

檢測(cè)病豬血清12頭份，弓形蟲抗體呈陽(yáng)性10頭，陽(yáng)性率83%，同群健康豬血清8頭份，弓形蟲抗體呈陽(yáng)性1頭，陽(yáng)性率12.5%，結(jié)果表明，該豬群有弓形蟲感染。

6 綜合防制措施

綜合發(fā)病情況、臨床癥狀、剖檢變化和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果，確診該起疫情為豬繁殖與呼吸綜合征病毒和弓形蟲混合感染，針對(duì)該結(jié)果采取了相應(yīng)的綜合防制措施。

將病豬隔離、單獨(dú)飼養(yǎng)，部分病程較長(zhǎng)、病情嚴(yán)重的豬淘汰并實(shí)行嚴(yán)格的無害化處理。清除糞污，采用3%燒堿水溶液對(duì)全場(chǎng)地面及用具進(jìn)行徹底消毒，杜絕貓?jiān)谪i場(chǎng)活動(dòng)，做好豬場(chǎng)、豬舍、外來人員和車輛的清潔衛(wèi)生和日常消毒工作，加強(qiáng)通風(fēng)、降溫，減少應(yīng)激，提高豬群抵抗力。

全群飼料中加入20%替米考星預(yù)混劑1 kg/t飼料、磺胺氯達(dá)嗪1 kg/t飼料，扶正解毒散1 kg/t飼料，混勻，連用7～10 d，停藥；飲水中添加優(yōu)質(zhì)電解質(zhì)多維1 kg/t、葡萄糖5 kg/t，自由飲用，連用15 d。

病豬注射磺胺間甲氧嘧啶鈉注射液，首次量加倍，1次/d，連續(xù)注射4 d。采用上述措施3 d后，部分病豬精神、食欲等有所好轉(zhuǎn)，豬群中新發(fā)病例明顯減少；1周后豬群基本正常，10 d后豬群全部恢復(fù)正常，期間有9頭嚴(yán)重病豬治療無效，死亡，其他豬全部恢復(fù)健康。

7 小結(jié)與體會(huì)

（1）豬繁殖與呼吸綜合征和弓形蟲病都是豬場(chǎng)的常見病，相關(guān)病例報(bào)道很多，但有關(guān)兩者混合感染的報(bào)道較為少見。本病例通過采用臨床剖檢、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)、使用對(duì)弓形蟲有效的磺胺類藥物、對(duì)繁殖與呼吸綜合征有效的藥物，配合使用抗病毒、提高機(jī)體免疫功能的中藥等措施，很快控制了疫情，取得了良好的治療效果，說明對(duì)本次疫情診斷正確、治療措施得當(dāng)。

（2）豬繁殖與呼吸綜合征是豬的一種病毒性傳染病，各日齡的豬均易感，由于PRRSV以具有重要免疫功能的肺泡巨噬細(xì)胞為靶細(xì)胞，破壞宿主免疫功能，造成帶毒豬免疫抑制，從而易混合或繼發(fā)感染其他疫病[7]。弓形蟲病的分布十分廣泛，在豬群中的感染也很常見。貓（以及其他貓科動(dòng)物）是唯一的終未宿主，在弓形蟲傳播中起重要作用，豬通過食入了被弓形蟲卵囊污染的飼料或飲水而引起感染發(fā)病[8]。據(jù)場(chǎng)主反映，近期豬場(chǎng)內(nèi)有野貓活動(dòng)，因此，此次發(fā)病的主要原因可能是帶弓形蟲卵囊的野貓糞便污染了飼料或飲水，而同時(shí)加上7、8月份圈舍內(nèi)氣溫高，豬舍通風(fēng)不良，濕度大，存在各種不良應(yīng)激因素，導(dǎo)致豬弓形蟲病與豬繁殖與呼吸綜合征混合感染。

（3）對(duì)于藍(lán)耳病的防治，目前沒有特效藥物，疫苗免疫作用有限，只能通過改善和加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，減少各種不良應(yīng)激因素，提高機(jī)體自身的抵抗力，來減少該病的發(fā)生。

（4）弓形蟲病存在發(fā)病快、死亡率高等特點(diǎn)，目前臨床上治療弓形蟲病最有效的方法是使用磺胺類藥物，其他抗菌藥無效，如果早期診斷、早期治療均能收到良好的效果，如較遲用藥，雖可使豬不表現(xiàn)臨床癥狀，但蟲體已進(jìn)入臟器組織中形成包囊，使患豬成為帶蟲者并成為傳染源，有可能使豬場(chǎng)再次發(fā)生弓形蟲病[9-10]。治療時(shí)應(yīng)注意：用藥劑量要足，應(yīng)按照藥物說明書治療量使用，首次劑量要加倍；治療療程要夠，治療弓形蟲病一個(gè)療程需要7～10 d，才能取得良好的效果。同時(shí)要做到連續(xù)用藥，不能病情好轉(zhuǎn)就停藥，否則易復(fù)發(fā)，且復(fù)發(fā)后再治療會(huì)十分困難。

（5）弓形蟲病和藍(lán)耳病、鏈球菌病、豬肺疫等都表現(xiàn)出高熱、呼吸困難、肺臟出血等，在臨床癥狀、剖檢病理變化等方面十分相似之處，生產(chǎn)中經(jīng)常出現(xiàn)誤診，不能及時(shí)采取有針對(duì)性的措施而貽誤病情，造成較大的傷亡。因此、豬場(chǎng)出現(xiàn)疫情時(shí)，應(yīng)及時(shí)到專業(yè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，盡早確定發(fā)病原因，采取相關(guān)措施，減少發(fā)病和死亡。