張黎 楊榮 趙云

多效生長(zhǎng)因子(Pleiotrophin, PTN)是一種對(duì)肝素具有高親和力的分泌生長(zhǎng)因子[1]。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，PTN在腫瘤細(xì)胞中發(fā)揮了促血管生成和轉(zhuǎn)移等重要生物學(xué)作用[2]。高爾基體跨膜糖蛋白73(Golgi protein-73, GP73)是一種在人類上皮細(xì)胞中表達(dá)的跨膜糖蛋白[3]。有研究發(fā)現(xiàn)GP73在肝癌、肺腺癌等腫瘤疾病中表達(dá)上調(diào)[4]。本研究旨在檢測(cè)PHC中PTN和GP73的表達(dá)情況，進(jìn)一步探討兩者聯(lián)合檢測(cè)診斷PHC的價(jià)值，為PHC的早期診療提供有效的生物學(xué)標(biāo)志物。

資料與方法

一、一般資料

2017年9月至2018年7月，蘇州大學(xué)附屬?gòu)埣腋坩t(yī)院共招募PHC患者148例。另有100名健康志愿者和171名非健康志愿者，包括35例肝硬化患者、75例病毒性肝炎患者，30例轉(zhuǎn)移性肝癌患者和31例其他良性肝病患者作為對(duì)照。所有PHC病例通過臨床病理結(jié)果診斷，根據(jù)世界衛(wèi)生組織分級(jí)體系對(duì)腫瘤細(xì)胞分化程度進(jìn)行評(píng)估，根據(jù)TNM分期體系判斷腫瘤分期；肝硬化由組織學(xué)檢查或門靜脈高壓癥的臨床表現(xiàn)診斷；病毒性肝炎包括乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)感染由病毒檢測(cè)結(jié)果診斷；轉(zhuǎn)移性肝癌的診斷是通過采用TNM分期系統(tǒng)對(duì)病史中有明確診斷的患者進(jìn)行評(píng)估得出；良性肝病包括酒精或藥物引起的肝損傷、脂肪肝和肝血管瘤。本項(xiàng)研究方案內(nèi)容已獲我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有受試者均已簽署書面知情同意。PHC患者(n=148)的男女比例為95/53，年齡(48.77±7.98)歲，健康志愿者(n=100)的男女比例為70/30，年齡(51.33±8.34)歲，肝硬化患者(n=35)的男女比例為24/11，年齡(51.27±9.14)歲，病毒性肝炎患者(n=75)的男女比例為47/28，年齡(49.86±9.31)歲，轉(zhuǎn)移性肝癌患者(n=30)的男女比例為21/9，年齡(50.16±9.02)歲，其他良性肝病患者(n=31)的男女比例為19/12，年齡(49.56±8.87)歲。各組受試者年齡、性別比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

收集所有受試者臨床資料，并行輔助檢查：血常規(guī)、尿常規(guī)、血生化。抽取清晨空腹外周血3.5 mL，于4 ℃離心(3 000×g)20 min，分離血清，-80 ℃保存?zhèn)溆谩Ｅ懦龢?biāo)準(zhǔn)：(1)患者在1個(gè)月內(nèi)接受華法林或維生素K治療；(2)血樣本受到污染或含有沉淀等不明物質(zhì)；(3)樣本量不足以進(jìn)行檢測(cè)。

二、研究方法

采用PTN酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒(eBioscience，美國(guó))、GP73 ELISA試劑盒(上海研謹(jǐn)生物科技有限公司，中國(guó))分別檢測(cè)血清PTN、GP73濃度，450 nm波長(zhǎng)酶標(biāo)儀測(cè)定OD值，根據(jù)標(biāo)品吸光度值繪制線性回歸曲線，利用曲線方程帶入樣本吸光度值進(jìn)行濃度計(jì)算。具體方法遵循制造商說明。

三、統(tǒng)計(jì)方法

結(jié) 果

一、各組血清PTN表達(dá)水平比較

PHC患者血清PTN水平為(547.28±79.31)ng/mL，健康志愿者為(291.15±90.53)ng/mL，肝硬化為(388.82±73.37)ng/mL，病毒性肝炎為(363.28±134.55)ng/mL，轉(zhuǎn)移性肝癌為(424.16±131.29)ng/mL，其他良性肝病為(293.45±98.22)ng/mL，PHC患者血清PTN水平顯著高于健康志愿者和非健康志愿者(P<0.05)。

二、各組血清GP73表達(dá)水平比較

PHC患者血清GP73水平顯著高于健康志愿者、病毒性肝炎患者和其他良性肝病患者(P<0.05)，而明顯低于肝硬化患者和轉(zhuǎn)移性肝癌患者(P<0.05)。見表1。

三、PTN、GP73的表達(dá)水平與PHC臨床病理特征相關(guān)

在PHC患者中，有肝硬化的PTN水平顯著高于無肝硬化患者；腫瘤直徑>5 cm的PTN水平顯著高于直徑≤5 cm的患者；腫瘤低分化患者的血清PTN顯著高于中、低分化患者；甲胎蛋白(AFP)水平高的患者PTN水平更高；腫瘤轉(zhuǎn)移患者的血清PTN水平明顯高于無轉(zhuǎn)移患者；根據(jù)TNM分期，Ⅲ～Ⅳ期患者血清PTN水平顯著高于Ⅰ～Ⅱ期，以上結(jié)果的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。腫瘤低分化PHC患者的GP73水平顯著高于中、低分化患者；AFP高水平患者的GP73水平顯著高于水平低的患者；腫瘤轉(zhuǎn)移患者的血清GP73水平明顯高于無腫瘤轉(zhuǎn)移患者；根據(jù)TNM分期，Ⅲ～Ⅳ期患者血清GP73水平顯著高于Ⅰ～Ⅱ期，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表1 各組血清GP73表達(dá)水平比較

注：與PHC比較，aP<0.05

四、PTN與GP73聯(lián)合檢測(cè)與PTN、GP73單獨(dú)檢測(cè)的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度比較

表3所示，PTN與GP73聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度顯著高于PTN、GP73單獨(dú)檢測(cè)(P<0.05)。PTN、GP73單獨(dú)檢測(cè)的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度相比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。PTN與GP73聯(lián)合檢測(cè)的AUC大于PTN或GP73單獨(dú)檢測(cè)。

討 論

目前PTN、GP73與PHC的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制研究尚未明確。有報(bào)道發(fā)現(xiàn)，PTN與多種人類癌癥相關(guān)，包括乳腺癌、胰腺癌和肺癌等[5]。Du等[6]發(fā)現(xiàn)PTN在癌癥患者血清中表達(dá)上調(diào)，敏感度為78.4%，特異度為66.7%。本研究發(fā)現(xiàn)與健康和非健康志愿者相比，PHC患者的PTN表達(dá)水平顯著升高，且與PHC患者的腫瘤低分化、轉(zhuǎn)移、大小，AFP水平及TNM分期相關(guān)。另外，PTN在診斷PHC中的靈敏度為78.2%，特異度為86.7%，準(zhǔn)確度為80.1%，與之前的研究結(jié)果類似。

Yong等[7]通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)，肝癌組織中的GP73水平高于癌旁組織，且GP73與血管浸潤(rùn)、TNM分期等病理特征相關(guān)。本研究同樣發(fā)現(xiàn)，GP73在PHC患者血清中表達(dá)升高，且與腫瘤低分化、TNM分期及轉(zhuǎn)移有關(guān)。另外，PTN與GP73聯(lián)合檢測(cè)的特異度、敏感度及準(zhǔn)確度較高，有可能應(yīng)用于PHC的早期診斷，并對(duì)轉(zhuǎn)移性肝癌等肝臟疾病發(fā)揮輔助診斷作用。

表2 PHC患者血清PTN、GP73表達(dá)水平比較(±s，ng/mL)

表3 PTN與GP73聯(lián)合檢測(cè)與PTN、GP73單獨(dú)檢測(cè)的診斷價(jià)值比較

注：表示與PTN和GP73聯(lián)合檢測(cè)比較，bP<0.05