張大軍，王兆華

(吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130012)

黃連為毛茛科植物黃連Coptis chinensis Franch.、三角葉黃連Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao或云連Coptis teeta Wall.的干燥根莖，有著數(shù)千年的藥用歷史，在中成藥中廣泛應(yīng)用，其中黃連Coptis chinensis Franch. 應(yīng)用最廣，習(xí)稱“味連”。本文對(duì) 2015 版藥典收載的 91 個(gè)含黃連成方制劑的劑型、制備方法進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)，并結(jié)合味連提取工藝的試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析，將為有效使用黃連提供科學(xué)依據(jù)。

1 含黃連中成藥的統(tǒng)計(jì)分析[1]

2015 版《中國(guó)藥典》收載含黃連的成方制劑共91個(gè)，劑型有片劑、膠囊劑、丸劑等 8 種，具體見(jiàn)表 1。

表1 含黃連成方制劑的劑型分析

由表 1 可知，藥典收載含黃連成方制劑的劑型種類較多，以丸劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑為主。

2 含黃連成方制劑中黃連制備方法的統(tǒng)計(jì)分析

含黃連成方制劑中黃連制備方法有粉碎、水煎煮和醇提取。其中采用粉碎的有66種，采用水煎煮有17種，采用醇回流有5種、醇滲漉有3種，具體見(jiàn)表 2。

表2 含黃連成方制劑中黃連的制備方法分析

由表 2 可知，黃連在成方制劑中多以粉末入藥，其次為水煎煮，少數(shù)為醇回流或滲漉。醇提時(shí)，使用的乙醇濃度有50%、60%、70%、80%不等。

3 不同提取工藝對(duì)黃連有效成分含量的影響

3.1 儀器與試藥

日本島津LC-10 AT高效液相色譜儀；SPD-10A紫外檢測(cè)器；KQ-250型超聲波處理器；鹽酸黃連堿對(duì)照品(批號(hào)112026-201601，純度95.1%)、鹽酸巴馬汀對(duì)照品(批號(hào)110732-201611，純度86.8%)、鹽酸小檗堿(批號(hào)110713-201613，純度86.8%)對(duì)照品，購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定研究院；表小檗堿(批號(hào)W06M8Z30708，純度98%)，購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司；黃連(味連)購(gòu)自居德堂大藥房；乙腈為色譜純，其它化學(xué)試劑均為AR級(jí)。

3.2 試驗(yàn)方法

3.2.1 水提物制備

黃連粗粉，水煎煮兩次，煎液濃縮，干燥，粉碎。

3.2.2 醇提物制備

黃連粗粉，4份，以50%、60%、70%、80%乙醇提取兩次，提取液分別回收乙醇、濃縮，干燥，粉碎。

3.2.3 大孔樹(shù)脂富集物制備[2]

黃連粗粉，以70%乙醇提取兩次，提取液回收乙醇、濃縮，加水溶解，濾過(guò)，濾液通過(guò)D101大孔樹(shù)脂柱，以水及50%乙醇洗脫，收集醇洗液，回收乙醇，濃縮，干燥，粉碎。

3.2.4總生物堿提取物制備[3]

黃連粗粉，以70%乙醇提取兩次，提取液回收乙醇，濃縮，加水溶解，調(diào)pH值至1.8，加適量NaCl，冷藏，濾過(guò)，濾渣干燥，粉碎。

3.2.5 精制總生物堿提取物制備

在3.2.4操作的基礎(chǔ)上，增加精制步驟，干燥，粉碎。

3.3 有效成分測(cè)定[1]

3.3.1 色譜條件色譜柱

安捷倫色譜柱(250×4.6 mm，5 μm)； 流動(dòng)相：乙腈-0.05 moL/L磷化酸二氫鉀(50∶50)(每 100 mL加十二烷基硫酸鈉0.4 g，再用磷酸調(diào)pH值4.0)；檢測(cè)波長(zhǎng)：345 nm；進(jìn)樣量：10 μL。

3.3.2 對(duì)照品溶液制備

分別稱取表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL各含43.8、42.4、52.5、68.9 μg的混合溶液，搖勻，即得。

3.3.3 供試品溶液制備

取2項(xiàng)下的提取物約50 mg，精密稱定，加入甲醇-鹽酸(100∶1)混合溶液25 mL，密塞，超聲處理30 min，重量法定容，濾過(guò)，取續(xù)濾液2 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，取續(xù)濾液，即得。

3.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

吸取混合對(duì)照品溶液2，4，8，12，16，20 μL，注入液相色譜儀中，按3.3.1項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，以表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿對(duì)照品的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(x)，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)(y)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程和線性關(guān)系為：y=2222.67x-35015.05，r=0.9984、y=2168.58x+7619.25，r=0.9995、y=2658.6x-8278.92，r=0.9998、y=2334.40x-39015.38，r=0.9982，表明表小檗堿在87.6～876 μg、鹽酸黃連堿在84.8～848 μg、鹽酸巴馬汀105～1050 μg、鹽酸小檗堿小檗堿在137.8～1378 μg范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

3.3.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取總生物堿提取物的供試品溶液10 μL，連續(xù)6次重復(fù)進(jìn)樣，測(cè)定。表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿峰面積積分值的RSD分別為1.33%、0.84%、1.26%、0.97%。

3.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取總生物堿提取物的供試品溶液在 0、2、4、6、8 h，分別進(jìn)樣10 μL，測(cè)定。結(jié)果表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿峰面積的RSD分別為1.35%、1.11%、1.24%、1.05%，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

3.3.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

精密稱取總生物堿提取物 6份，按3.3.3項(xiàng)下操作，依法進(jìn)樣分析，樣品中表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿含量的RSD分別為2.17%、1.79%、1.77%、1.99%，結(jié)果表明重現(xiàn)性良好。

3.3.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加入到已測(cè)表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿含量的總生物堿提取物樣品中，按3.3.3項(xiàng)下操作，依法進(jìn)樣分析，計(jì)算回收率。表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿平均回收率分別為98.17%、98.79%、98.67%、99.19%。

3.3.9 樣品測(cè)定

分別精密稱取各黃連提取物，按3.3.3項(xiàng)下制備供試品溶液，再按3.3.1項(xiàng)下方法測(cè)定并計(jì)算小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿的含量。結(jié)果見(jiàn)表 3。

表3 黃連不同提取物中生物堿含量測(cè)定結(jié)果

表3(續(xù))

4 小結(jié)與討論

(1)黃連是一種常用中藥，應(yīng)用廣泛，目前對(duì)其成分及藥理作用的研究頗多。從2015年版《中國(guó)藥典》收載含黃連的91種成方制劑中可以看出，黃連的制備方法多樣，且相對(duì)集中。多數(shù)制劑以粉碎入藥(66/91)，尤其是傳統(tǒng)劑型丸散劑中多以粉碎入藥(45/47)，現(xiàn)代劑型的顆粒劑多采用水煎煮(7/9)、膠囊劑采用粉碎和水煎煮的比例各半、片劑以粉碎和醇提工藝的比例約各半。

(2)試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，大孔樹(shù)脂對(duì)黃連生物堿的吸附力及吸附量均較小，采用大孔樹(shù)脂富集黃連生物堿，工時(shí)費(fèi)及成本較高。

(3)本實(shí)驗(yàn)以不同溶劑和不同方法制備了多種黃連提取物并測(cè)定提取物中表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿的含量，結(jié)果表明各提取物中所測(cè)成分含量和提取率均有較大差別，提示我們，為了更好地發(fā)揮黃連的藥效，隨著對(duì)黃連成分及藥理作用的深入研究，在使用黃連時(shí)，應(yīng)根據(jù)不同的化學(xué)成分發(fā)揮不同藥理作用，采用最適宜的提取工藝。