亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        復方竹節(jié)參顆粒對縮宮素誘導的原發(fā)性痛經(jīng)的影響

        2020-02-18 12:43:18任永申廖矛川鄧旭坤
        中成藥 2020年1期
        關鍵詞:竹節(jié)參扭體己烯

        鄧 鑫,任永申*,雷 蕾,鄭 堯,李 燕,廖矛川,鄧旭坤,張 萍

        (1.中南民族大學藥學院,湖北 武漢 430070; 2.解放軍總醫(yī)院第五醫(yī)學中心全軍中醫(yī)藥研究所,北京 100039)

        痛經(jīng)分為原發(fā)性痛經(jīng)和繼發(fā)性痛經(jīng),是未孕女性常見病,疼痛多持續(xù)1~3 d[1-2],發(fā)生時通常伴有小腹脹痛、頭痛、背痛及乳房觸痛等癥狀[3]。原發(fā)性痛經(jīng)是由子宮收縮增強引起的經(jīng)期痙攣性疼痛,其特征為經(jīng)期疼痛無可見器質性病變,與正常排卵周期無關;繼發(fā)性痛經(jīng)即婦科疾病引起的經(jīng)期疼痛,常伴隨盆腔器官病變[4]。痛經(jīng)的發(fā)病率一般為50%~90%,由于環(huán)境和遺傳因素的影響,不同國家有所差異[1,3]。目前臨床上主要應用非甾體類抗炎藥、口服避孕藥緩解痛感或干擾發(fā)作[5-6],但非甾體類抗炎藥作用寬泛,對其他系統(tǒng)(如肝臟、腎臟、消化道等)產(chǎn)生較大不良反應[7-8];避孕藥也會產(chǎn)生惡心、水潴留、腦靜脈血栓、延遲排卵、降低雌激素和孕酮的循環(huán)水平、擾亂生理周期等不良反應[9-11],因此有必要開發(fā)新藥物。中醫(yī)藥與民族醫(yī)藥在長期實踐中總結了豐富的婦科疾病治療、調理經(jīng)驗與有效藥物,對月經(jīng)不調、痛經(jīng)等療效顯著,被廣泛接受和應用[12-14]。復方竹節(jié)參顆粒由恩施土家醫(yī)治療婦科疾病的習用方開發(fā)而來,具有良好的抗痛經(jīng)作用,本實驗采用己烯雌酚和縮宮素誘導建立原發(fā)性痛經(jīng)體內(nèi)外模型,對其進行綜合評價并對其機制進行了初步探討。

        1 材料

        1.1 動物 SPF 級昆明種小鼠,體質量18~22 g,雌性未孕;SPF 級SD 大鼠,體質量200~220 g,雌性未孕,均由湖北省疾病預防控制中心提供,動物使用許可證號SYXK(鄂)2016-0089。

        1.2 試劑與藥物 復方竹節(jié)參顆粒主要由竹節(jié)參、大血藤、延胡索、當歸、白芍、香附等藥材組成,采用水煎煮法提取并減壓干燥為浸膏(得率為35%),與1.5 倍量輔料(糊精-糖粉,比例1∶1)混合均勻,濕法制粒,干燥,即得,日用劑量為30 g;月月舒痛經(jīng)寶顆粒(仲景宛西制藥股份有限公司,批號161204);己烯雌酚片(上海信誼康捷藥業(yè)有限公司,批號170109);縮宮素注射液(哈爾濱摩天農(nóng)科獸藥有限公司,批號20170425);氯化鈉注射液(武漢濱湖雙鶴藥業(yè)有限責任公司,批號1611130801)。自配Locke’s 液(NaCl 9.2 g,KCl 0.42 g,無水CaCl20.24 g,NaHCO30.15 g,葡萄糖1.0 g,加超純水至1 000 mL);前列腺素E2(PGE2)ELISA 檢測試劑盒(批號E20170601A)購自碧云天生物技術有限公司;一氧化氮(NO)檢測試劑盒(批號20171213)、丙二醛(MDA)檢測試劑盒(批號20180412)均購自南京建成生物工程研究所。

        1.3 儀器 DL28R 冷凍離心機(上海離心機械研究所);CP214 分析天平(上海奧豪斯儀器有限公司);1510 全波長酶標儀(美國Thermo Scientific公司);PowerLab 生物信號采集系統(tǒng)(美國AD Instruments公司);DK-98-Ⅱ電熱恒溫水浴鍋(天津市泰斯特儀器有限公司);麥氏浴槽(沈陽萊博科貿(mào)有限公司);S10 手提式組織勻漿器(寧波新芝生物科技股份有限公司)。

        2 方法

        2.1 在體模型的建立及給藥

        2.1.1 小鼠 取40 只雌性KM 小鼠(體質量18~22 g),隨機分成空白組、模型組、痛經(jīng)寶陽性對照組、復方竹節(jié)參顆粒(低、高)劑量組,每組8只,以己烯雌酚和縮宮素聯(lián)合復制小鼠原發(fā)性痛經(jīng)模型。造模小鼠每天上午皮下注射己烯雌酚,空白組給予等體積生理鹽水,連續(xù)12 d。首日與末日己烯雌酚的給藥劑量為10 mg/kg;第2~11 天為5 mg/kg,給藥體積10 mL/kg,人工造成動物處于相同的動情期,以便于增強子宮平滑肌的敏感性;第12 天末次注射己烯雌酚1 h 后,腹腔注射20 U/kg縮宮素,引起小鼠子宮平滑肌強烈的痙攣性收縮產(chǎn)生疼痛,建成小鼠原發(fā)性痛經(jīng)模型。第7 天開始灌胃給藥,連續(xù)5 d,空白組和模型組每天給予等體積超純水;參照《藥理實驗方法學(第4 版)》[15]劑量換算方法得到小鼠每日給藥劑量,痛經(jīng)寶陽性對照組為4.11 g/kg;復方竹節(jié)參顆粒低劑量組為6.17 g/kg(相當于人用劑量1 倍),高劑量組為18.50 g/kg(相當于人用劑量3 倍),各組灌胃給藥體積均為10 mL/kg。

        2.1.2 大鼠 取40 只雌性SD 大鼠(體質量200~220 g),隨機分成空白組、模型組、痛經(jīng)寶陽性對照組、復方竹節(jié)參顆粒(低、高)劑量組,每組8只。以己烯雌酚和縮宮素聯(lián)合復制小鼠原發(fā)性痛經(jīng)模型。于每日上午皮下注射己烯雌酚,空白組給予等體積生理鹽水,連續(xù)12 d。首日與末日己烯雌酚的給藥劑量為5 mg/kg,第2~11 天為2.5 mg/kg,給藥體積10 mL/kg,人工造成動物處于相同的動情期,以便于增強子宮平滑肌的敏感性。第12 天末次注射己烯雌酚1 h 后,腹腔注射10 U/kg 縮宮素,引起大鼠子宮平滑肌強烈的痙攣性收縮產(chǎn)生疼痛,建成大鼠原發(fā)性痛經(jīng)模型。第7 天開始灌胃給藥,連續(xù)5 d,空白組和模型組每天給予等體積超純水;依據(jù)《藥理實驗方法學(第4 版)》[15]劑量換算方法得到大鼠每日給藥劑量,痛經(jīng)寶陽性對照組為1.87 g/kg;復方竹節(jié)參顆粒低劑組為2.80 g/kg(相當于人用劑量1 倍),高劑組為8.41 g/kg(相當于人用劑量3 倍),各組灌胃給藥體積均為10 mL/kg。

        2.1.3 表觀指標檢測 己烯雌酚和縮宮素建模成功后,觀察并記錄各組動物的行為反應(注射縮宮素后10 min 內(nèi))、飲食、精神狀態(tài)、毛色、被毛光澤度等作為痛經(jīng)表觀指標,根據(jù)表1 標準進行評分。

        表1 痛經(jīng)動物模型的表觀指標得分Tab.1 Scores of apparent indexes for animal models of dysmenorrhea

        2.1.4 痛經(jīng)指標檢測 建模成功后,分別記錄30 min內(nèi)KM 小鼠、SD 大鼠的扭體潛伏期和扭體次數(shù),不發(fā)生扭體反應的潛伏期按30 min 計;記錄注射縮宮素后30 min 內(nèi)痛經(jīng)動物的扭體次數(shù)并計算其扭體抑制率,公式為扭體抑制率=[(模型組扭體次數(shù)均值-給藥組扭體次數(shù)均值)/模型組扭體次數(shù)均值]×100%。

        2.1.5 生化指標檢測 測完扭體次數(shù)后,將各組動物脫頸處死,迅速剝離右側子宮組織,剔除結締組織,生理鹽水洗凈,拭干,稱取同一位置子宮500 mg,冰浴下加入1.5 mL 生理鹽水制備勻漿,4 ℃、3 000 r/min 離心15 min,取上清液,測定子宮勻漿PGE2、NO、MDA 水平(按試劑盒說明書操作)。

        2.2 大鼠離體痛經(jīng)模型的建立及給藥 取24 只體質量200~220 g 健康未孕雌性SD 大鼠,隨機分為4 組,于實驗前3 d 每天腹腔注射2 mg/kg 己烯雌酚,以提高子宮的敏感性。末次腹腔注射給藥2 h后,頸椎脫臼法處死大鼠,剖開腹腔,取同側子宮,去除卵巢和子宮角部位并剝離子宮上附著的脂肪等結締組織,將子宮兩端結扎,其中一端用絲線結扎子宮角側末端,長度(2.0±0.1)cm,子宮頸端用絲線固定于浴槽底端掛鉤上,置于含充有飽和空氣(通入速度為1~2 個氣泡/s)的Locke’s液的恒溫浴槽中,卵巢端連接于張力換能器,并將后者連接于多道信號采處理系統(tǒng),調節(jié)螺母使標本前負荷2 g,控制Locke’s液溫度(37.0±0.5)℃。開啟生理信號采集系統(tǒng),平衡30 min,待子宮平滑肌自發(fā)性收縮平穩(wěn)、自發(fā)節(jié)律恢復后開始實驗。

        各組加入縮宮素(終濃度5 U/L),記錄15 min子宮收縮張力曲線后分別加入藥液。模型組給予等體積超純水,痛經(jīng)寶陽性對照組、復方竹節(jié)參顆粒低劑組、復方竹節(jié)參顆粒高劑組終質量濃度分別為60、90、270 mg/L,記錄給藥后15 min 內(nèi)的子宮平滑肌收縮張力并計算抑制率,公式為收縮張力抑制率=[(給藥前平均張力-給藥后平均張力)/給藥前平均張力]×100%。

        2.3 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 21.0 軟件進行處理,數(shù)據(jù)以(±s)表示,組間比較采用t檢驗。以P<0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

        3 結果

        3.1 對在體原發(fā)性痛經(jīng)模型動物表觀指標的影響 如表2 所示,與空白組比較,模型組得分降低(P<0.01);與模型組比較,各給藥組得分增加(P<0.05,P<0.01),以復方竹節(jié)參顆粒低劑組、痛經(jīng)寶陽性對照組較高,提示復方竹節(jié)參顆粒能顯著緩解由縮宮素引起的痛經(jīng)癥狀,并且在正常劑量(低劑量)下使用效果更好。

        表2 復方竹節(jié)參顆粒對原發(fā)性痛經(jīng)在體動物模型表觀指標的影響(±s,n=8)Tab.2 Effects of FZGs on indexes for presented multiple symptoms in animal models of primary dysmenorrhea(±s,n=8)

        表2 復方竹節(jié)參顆粒對原發(fā)性痛經(jīng)在體動物模型表觀指標的影響(±s,n=8)Tab.2 Effects of FZGs on indexes for presented multiple symptoms in animal models of primary dysmenorrhea(±s,n=8)

        注:與空白組比較,**P<0.01;與模型組比較,#P<0.05,##P<0.01。

        3.2 對原發(fā)性痛經(jīng)模型動物痛經(jīng)指標的影響 如表3 所示,與空白組比較,模型組動物潛伏期降低,扭體次數(shù)升高(P<0.01);與模型組比較,痛經(jīng)寶陽性對照組、復方竹節(jié)參顆粒組可不同程度地延長扭體潛伏期,減少扭體次數(shù)(P<0.05,P<0.01)。從扭體抑制率來看,復方竹節(jié)參顆粒組低劑量抑制作用較強,提示該藥在正常劑量下可產(chǎn)生良好的緩解痛經(jīng)的作用。

        表3 復方竹節(jié)參顆粒對原發(fā)性痛經(jīng)在體動物模型痛經(jīng)指標的影響(±s,n=8)Tab.3 Effects of FZGs on dysmenorrhea indexes in animal models of primary dysmenorrhea in vivo(±s,n=8)

        表3 復方竹節(jié)參顆粒對原發(fā)性痛經(jīng)在體動物模型痛經(jīng)指標的影響(±s,n=8)Tab.3 Effects of FZGs on dysmenorrhea indexes in animal models of primary dysmenorrhea in vivo(±s,n=8)

        注:與空白組比較,**P<0.01;與模型組比較,#P<0.05,## P<0.01。

        3.3 對在體原發(fā)性痛經(jīng)模型動物子宮勻漿中生化指標的影響 與空白組比較,模型組子宮組織中PGE2、NO 水平下降,MDA 水平增加(P<0.01);與模型組比較,復方竹節(jié)參顆粒組可升高子宮組織中PGE2、NO 水平,降低MDA 水平(P<0.05,P<0.01),提示復方竹節(jié)參顆粒在正常劑量(低劑量)下即可對婦科疾?。ㄍ唇?jīng))產(chǎn)生較好的調經(jīng)止痛作用。見表4。

        表4 復方竹節(jié)參顆粒對原發(fā)性痛經(jīng)在體動物模型生化指標的影響(±s,n=8)Tab.4 Effects of FZGs on biochemical indexes in animal models of primary dysmenorrhea in vivo(±s,n=8)

        表4 復方竹節(jié)參顆粒對原發(fā)性痛經(jīng)在體動物模型生化指標的影響(±s,n=8)Tab.4 Effects of FZGs on biochemical indexes in animal models of primary dysmenorrhea in vivo(±s,n=8)

        注:與空白組比較,**P<0.01;與模型組比較,#P<0.05,##P<0.01。

        3.4 對離體原發(fā)性痛經(jīng)模型動物指標的影響 采用己烯雌酚和縮宮素制備大鼠離體原發(fā)性痛經(jīng)模型,經(jīng)給藥后,與建模后張力(0~15 min)比較,各組給藥后張力降低;與模型組比較,復方竹節(jié)參顆粒低劑組、痛經(jīng)寶陽性對照組收縮張力抑制率增加(P<0.01),提示復方竹節(jié)參顆粒在正常劑量(低劑量)下對離體子宮平滑肌收縮即可產(chǎn)生較好的抑制作用,與體內(nèi)實驗結果相吻合。見圖1、表5。

        表5 復方竹節(jié)參顆粒對原發(fā)性痛經(jīng)離體大鼠子宮平滑肌收縮張力的影響(±s,n=6)Tab.5 Effects of FZGs on contraction tension of isolated uterine smooth muscle in rats of primary dysmenorrhea(±s,n=6)

        表5 復方竹節(jié)參顆粒對原發(fā)性痛經(jīng)離體大鼠子宮平滑肌收縮張力的影響(±s,n=6)Tab.5 Effects of FZGs on contraction tension of isolated uterine smooth muscle in rats of primary dysmenorrhea(±s,n=6)

        注:與模型組比較,**P<0.01。

        4 討論

        痛經(jīng)是女性最常見的婦科疾病之一,發(fā)生時通常出現(xiàn)下腹部疼痛、腹瀉、腰酸膝軟、股腹溝疼痛、頭痛等癥狀,根據(jù)是否伴隨盆腔病變可分為原發(fā)性痛經(jīng)和繼發(fā)性痛經(jīng),其中前者是月經(jīng)期由于子宮收縮增強引起的痙攣性疼痛,其特征為無可見器質性病變,與正常排卵周期無關。己烯雌酚是一種合成的非甾體雌激素,可通過質膜上的細胞外相互作用引起內(nèi)皮剝脫的大鼠主動脈平滑肌的急劇松弛[16],連續(xù)皮下注射后可提高動物子宮的敏感性,出現(xiàn)平滑肌松弛,使動物處于相同的動情期;腹腔注射縮宮素時,可使動物產(chǎn)生類似痛經(jīng)癥狀?,F(xiàn)代研究表明,采用己烯雌酚和縮宮素可以較好地模擬原發(fā)性痛經(jīng)癥狀[17]。

        復方竹節(jié)參顆粒為恩施土家醫(yī)臨床治療婦科疾病(痛經(jīng)、月經(jīng)不調等)的習用方,主要由白三七、紅藤、延胡索、當歸、白芍、香附等藥材組成,具有較好的治療痛經(jīng)、月經(jīng)不調等婦科疾病的療效。痛經(jīng)寶顆粒主要由紅花、當歸、肉桂、三棱等9 味藥材組成,為歷版《中國藥典》所收載,主要用于寒凝氣滯血瘀婦女痛經(jīng)等癥狀,療效較為顯著,是臨床應用較為廣泛的中藥治療痛經(jīng)成方制劑。為客觀評價復方竹節(jié)參顆粒治療痛經(jīng)的作用,本研究將痛經(jīng)寶顆粒作為陽性對照,采用己烯雌酚和縮宮素建立在體、離體原發(fā)性痛經(jīng)模型。

        表觀指標可以間接反應動物痛經(jīng)模型疼痛情況,是評價痛經(jīng)程度的重要指標。治療后,各給藥組得分明顯增加,其中以復方竹節(jié)參顆粒低劑組表觀得分最高,提示它能顯著緩解由縮宮素引起的痛經(jīng)癥狀。扭體潛伏期、扭體次數(shù)、扭體抑制率是評價痛經(jīng)反應的重要指標,可以判斷模型制備是否成功、藥物鎮(zhèn)痛作用強弱。建立在體原發(fā)性痛經(jīng)模型后與空白組比較,模型組扭體潛伏期縮短,扭體次數(shù)顯著增加,提示原發(fā)性痛經(jīng)模型建立成功;與模型組比較,各給藥組不同程度延長了扭體潛伏期、減少扭體次數(shù),扭體抑制率依次為復方竹節(jié)參顆粒低劑組>痛經(jīng)寶陽性藥組>復方竹節(jié)參顆粒高劑組,提示復方竹節(jié)參顆粒具有較好的抑制痛經(jīng)的作用,并且在正常劑量(低劑量)下即可產(chǎn)生良好的緩解痛經(jīng)的作用。

        PGE2、NO、MDA 是動物痛經(jīng)模型疼痛過程機體反應的常用指標,也是藥物鎮(zhèn)痛作用的重要臨床指標?,F(xiàn)代研究證實,痛經(jīng)患者子宮內(nèi)膜和月經(jīng)血中前列腺素(PG)水平明顯高于正常人群,PG 包括PGF2α 和PGE2,PGE2可抑制子宮平滑肌自發(fā)收縮,而PGF2α促使子宮平滑肌收縮,故痛經(jīng)發(fā)生時患者子宮內(nèi)膜和月經(jīng)血中PGF2α水平明顯升高,PGE2水平則降低[18]。NO 可通過NO-cGMP 途徑表現(xiàn)出致痛和鎮(zhèn)痛雙重作用,主要參與外周及中樞水平的痛覺調制,當作用于外周調制時其水平升高,可放松子宮平滑肌以緩解痛經(jīng)[13,19-20]。痛經(jīng)發(fā)生時,由于子宮缺血可導致過多的脂質過氧化和氧化應激[21],MDA 是脂質過氧化的最終產(chǎn)物,它反映了脂質過氧化的程度[22]。建模后與空白組比較,模型組PGE2、NO 水平降低,MDA 水平升高;與模型組比較,各給藥組能不同程度升高PGE2、NO水平,降低MDA 水平,以復方竹節(jié)參顆粒低劑組效果最好,提示它在正常劑量(低劑量)下使用時,可能通過增加PGE2水平抑制子宮平滑肌自發(fā)收縮,升高NO 水平以放松子宮平滑肌,減少脂質過氧化產(chǎn)物MDA 水平來達到緩解痛經(jīng)的作用。

        己烯雌酚和縮宮素制備大鼠離體原發(fā)性痛經(jīng)模型后,模型組子宮平滑肌收縮張力增加,給藥后各組子宮收縮張力減小,抑制率依次為復方竹節(jié)參顆粒低劑組>痛經(jīng)寶陽性藥組>復方竹節(jié)參顆粒高劑組,提示復方竹節(jié)參顆粒在低劑量下對離體子宮平滑肌收縮可以產(chǎn)生較好的抑制作用,與在體實驗結果相吻合。此外,本研究發(fā)現(xiàn)復方竹節(jié)參顆粒在正常劑量下產(chǎn)生良好的緩解痛經(jīng)作用,而在高劑量下(日用劑量3 倍)反而減弱,動物表觀指標降低,提示其不可過量使用,可能與過度調節(jié)機體、子宮狀態(tài)有關。

        本實驗從民族醫(yī)學習用方中發(fā)現(xiàn)復方竹節(jié)參顆粒,并進行了產(chǎn)品開發(fā)和體內(nèi)外藥效學研究,顯示該藥物具有良好的抗痛經(jīng)作用,為其開發(fā)提供了科學依據(jù),也為其他民族藥物相關研究提供了參考經(jīng)驗。

        猜你喜歡
        竹節(jié)參扭體己烯
        十氟己烯在兩相浸沒式冷卻系統(tǒng)中的應用
        不同產(chǎn)地竹節(jié)參中7種皂苷含量測定及化學計量學評價
        食品與機械(2022年3期)2022-04-07 07:43:36
        蒙藥阿給鎮(zhèn)痛作用的研究
        珍稀民族藥材竹節(jié)參在云南保山的資源調查
        福建茶葉(2019年10期)2019-12-12 00:55:30
        廣藿香對冰醋酸所致小鼠扭體疼痛模型的鎮(zhèn)痛作用研究
        環(huán)己烯制備實驗的改進
        酸洗條件對未漂硫酸鹽麥草漿己烯糖醛酸去除的影響
        中國造紙(2014年1期)2014-03-01 02:10:08
        竹節(jié)參總皂苷對不同時間段腦出血模型大鼠腦損傷的保護作用
        CTAB-Ti-Co-β沸石的制備、表征及其對環(huán)己烯水合催化性能
        竹節(jié)參皂苷類化合物HPLC指紋圖譜研究
        欧美精品在线一区| 初尝人妻少妇中文字幕| ā片在线观看免费观看| āV第三区亚洲狠狠婷婷综合久久| 日本一极品久久99精品| 日本黄色3级一区二区| 免费a级毛片无码免费视频120软件| 欧美老妇人与禽交| 成人自拍视频国产一区| 精品人妻一区二区三区视频| 人妻少妇中文字幕乱码| 中文字幕欧美一区| 亚洲视频在线观看青青草| 青青草免费手机视频在线观看| 天天天天躁天天爱天天碰2018| 超91精品手机国产在线| 日本一区二区日韩在线| 国99精品无码一区二区三区| 国产丝袜无码一区二区三区视频| 在线观看亚洲精品国产| 久久精品av在线视频| 99999久久久久久亚洲| 国产农村妇女高潮大叫| 亚洲精品2区在线观看| 中文字日产幕码三区的做法步| 免费操逼视频| 国产精品久久无码不卡黑寡妇| 69久久精品亚洲一区二区| 国产精品美女一区二区视频 | 久久精品国产自产对白一区| 性按摩xxxx在线观看| 亚洲天堂在线播放| 日本一区二区三区在线视频观看| 国产在线观看免费视频软件| 青青久在线视频免费观看| 国内精品91久久久久| 手机在线播放av网址| 亚洲码国产精品高潮在线| 精品欧美久久99久久久另类专区| 青青草视频在线播放观看| 一本一道av无码中文字幕麻豆|