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        布氏菌病活疫苗(Rev.1株)凍干保護劑工藝的研究

        2020-02-16 09:05:14
        獸醫(yī)導(dǎo)刊 2020年1期
        關(guān)鍵詞:布氏儲液硫脲

        布氏菌病是在全球范圍內(nèi)廣泛流行的重大人畜共患病。該病不僅嚴(yán)重影響著畜牧養(yǎng)殖業(yè)的健康、穩(wěn)定發(fā)展,更是給公共衛(wèi)生、食品安全等領(lǐng)域帶來巨大危害,對人類健康也造成了嚴(yán)重威脅。在布氏菌病流行地區(qū)從業(yè)畜牧養(yǎng)殖及獸醫(yī)工作者感染該病現(xiàn)象非常普遍,受到了業(yè)內(nèi)高度關(guān)注。

        國內(nèi)廣泛使用的布氏菌病疫苗主要為布氏菌活疫苗(S2株)。該疫苗雖然在國內(nèi)生產(chǎn)和使用數(shù)十年,在布氏菌病防控中發(fā)揮了一定的作用,但實踐證明,其防控效果是有限的,難以達到有效控制或消滅布氏菌病的效果。目前國際上普遍推薦布病活疫苗(Rev.1株),該疫苗在歐洲、美洲地區(qū)多個國家使用多年,其穩(wěn)定性、安全性及保護性等性能指標(biāo)已得到廣泛認可,并在多個國家應(yīng)用后根除了該病,取得了巨大成效。因此我公司積極研制該疫苗,以期早日進入市場,為布病防控做出貢獻。

        1 材料

        1.1 菌液 布魯氏菌Rev.1株菌液,批號分別為:SY001批,SY002批,SY003批;3批發(fā)酵菌液的菌數(shù)分別為:14.4×109CFU/mL、15.5×109CFU/mL、15.1×109CFU/mL;由金宇保靈生物藥品有限公司提供。

        1.2 試劑 蔗糖,購自津市科盟化工工貿(mào)有限公司,批號20140521;明膠,購自北京奧博星生物技術(shù)有限公司,批號20150116;脫脂奶粉,購自新西蘭,批號2014001;硫脲,購自津市科盟化工工貿(mào)有限公司,批號20140924;氫氧化鈉,購自津市北聯(lián)精細化學(xué)品開發(fā)有限公司,批號20150120。

        1.3 稀釋液 滅菌生理鹽水稀釋液200mL,批號5329001,由金宇保靈生物藥品有限公司提供。

        1.4 設(shè)備 凍干機、灌裝系統(tǒng)、電子平、酸度計、儲液桶等。

        2 方法

        2.1 凍干保護劑的制備

        2.1.1 蔗糖脫脂乳保護劑的制備 分別稱取蔗糖75g和135g脫脂奶粉加入到盛放有1200mL注射用水的10L儲液桶中,持續(xù)攪拌待其充分溶解后用注射用水定容至1500mL,用硫酸紙、牛皮紙包扎儲液桶瓶口,以118℃、30min高壓滅菌后待用;每批制備3桶蔗糖脫脂乳保護劑,共計制備3批。

        2.1.2 含硫脲的蔗糖明膠保護劑的制備 分別稱取蔗糖300g、75g硫脲加入到盛放有1000mL注射用水的10L儲液桶中,持續(xù)攪拌使其徹底溶解;稱取150g明膠,用電磁爐加熱溶解明膠后再倒入儲液桶中用注射用水定容至1500mL混合均勻,用2%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7.0,用硫酸紙、牛皮紙包扎儲液桶瓶口,以121℃、1.5h高壓滅菌后待用;每批制備3桶含硫脲的蔗糖明膠保護劑,共計制備3批。

        2.1.3 蔗糖明膠保護劑的制備 稱取蔗糖300g加入到盛放有1000mL注射用水的10L儲液桶中,持續(xù)攪拌使其徹底溶解;稱取150g明膠用電磁爐加熱溶解明膠后再倒入儲液桶中用注射用水定容至1500mL混合均勻,用2%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7.0,用硫酸紙、牛皮紙包扎儲液桶瓶口,以121℃、1.5h高壓滅菌后待用;每批制備3桶明膠蔗糖保護劑,共計制備3批。

        2.2 凍干活疫苗的制備

        2.2.1 蔗糖脫脂乳凍干活疫苗制備 分別采取上述3批菌液與蔗糖脫脂乳保護劑,以菌液與保護劑配比為6∶1,將定量的菌液無菌轉(zhuǎn)入儲液桶內(nèi)混合均勻,以4ml/瓶分裝,經(jīng)冷凍真空干燥后制成凍干活疫苗。

        2.2.2 含硫脲的蔗糖明膠保護劑凍干活疫苗制備 分別采取上述3批菌液與蔗糖脫脂乳保護劑,以菌液與保護劑配比為6∶1,將定量的菌液無菌轉(zhuǎn)入儲液桶內(nèi)混合均勻,以4mL/瓶分裝,經(jīng)冷凍真空干燥后制成凍干活疫苗。

        2.2.3 蔗糖明膠保護劑凍干活疫苗制備 分別采取上述3批菌液與蔗糖脫脂乳保護劑,以菌液與保護劑配比為6:1,將定量的菌液無菌轉(zhuǎn)入儲液桶內(nèi)混合均勻,以4mL/瓶分裝,經(jīng)冷凍真空干燥后制成凍干活疫苗。

        2.2.4 每批采用相同批號的菌液分裝數(shù)量相同的不同配方保護劑,采用相同的凍干曲線重復(fù)實驗3批。凍干曲線見圖1。

        圖1 凍干曲線

        2.3 物理性狀 觀察不同配方保護劑各批次凍干活疫苗的外觀及顏色,加稀釋液后是否迅速溶解。

        2.4 活菌計數(shù) 將不同配方保護劑各批次凍干活疫苗分別用滅菌生理稀釋溶解至4mL,按照現(xiàn)行《中國獸藥典》附錄進行活菌計數(shù)。

        3 結(jié)果

        3.1 性狀 不同配方保護劑各批次凍干活疫苗均為淡黃色疏松團塊,易與瓶壁分離,加入稀釋液后迅速溶解,符合要求。詳見表1~3。

        3.2 活菌計數(shù) 不同配方保護劑各批次凍干活疫苗,凍干后活菌含量差異不明顯,凍干前后活菌數(shù)損失比例均小于5%。詳見表4~6。

        表1 SY001批凍干活疫苗物理性狀檢驗結(jié)果

        表2 SY002批凍干活疫苗物理性狀檢驗結(jié)果

        表3 SY003批凍干活疫苗物理性狀檢驗結(jié)果

        表4 SY001批不同配方保護劑凍干活疫苗凍干后的活菌含量

        表5 SY002批不同配方保護劑凍干活疫苗凍干后的活菌含量

        表6 SY003批不同配方保護劑凍干活疫苗凍干后的活菌含量

        4 結(jié)論

        采用我公司成熟的布氏菌病活疫苗(S2株)凍干曲線凍干布氏菌病活疫苗(Rev.1株),三種不同配方的凍干保護劑對疫苗的凍干效果影響不明顯,但蔗糖明膠保護劑凍干后,活菌含量略高于蔗糖脫脂乳;而凍干時加入適量的硫脲,則可以在一定程度上增加疫苗的耐熱性。因此,綜合凍干前后活菌數(shù)損失量、疫苗的粘稠度對灌裝設(shè)備和凍干效果的影響、活菌計數(shù)誤差等各項因素,我們選擇蔗糖明膠保護劑,加入終濃度為1%硫脲的工藝作為布氏菌病活疫苗(Rev.1株)大規(guī)模生產(chǎn)的凍干工藝,即選用20%蔗糖、10%明膠凍干保護劑,與菌液以1∶6的配比比例混合,再加入終濃度約為1%的硫脲制備布氏菌病活疫苗(Rev.1株)。

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