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        動物源金黃色葡萄球菌分離株mecA基因的表達(dá)及耐藥性分析

        2020-12-28 21:40:47
        獸醫(yī)導(dǎo)刊 2020年1期
        關(guān)鍵詞:頭孢西丁葡菌耐藥性

        在自然界中SA廣泛存在,可形成數(shù)種毒力因子,為人畜共患的一種常見病原菌。SA作為食源性致病菌,已經(jīng)成為影響公共衛(wèi)生的重大難題之一。MRSA具有多重耐藥性,檢出率有逐日增加的趨勢,動物源MRSA有經(jīng)環(huán)境或動物食品消費(fèi)鏈向人類傳播的風(fēng)險。金葡菌是誘發(fā)牛乳腺炎的主要病原菌,現(xiàn)階段針對牛源金黃菌耐藥性的研究較多,但對其他動物源的金黃菌耐藥性研究較少見。本文篩選出MRSA菌株,利用PCR檢測mecA基因,現(xiàn)將檢測情況作出如下報(bào)告。

        1 材料和方法

        1.1 材料

        1.1.1 菌株 由項(xiàng)目組實(shí)驗(yàn)室提供動物源金葡菌,共計(jì)45株。藥敏試驗(yàn)質(zhì)控株ATCC25922、ATCC43300。

        1.1.2 儀器與設(shè)備 MIC藥敏板、培養(yǎng)箱及PCR儀等。

        1.2 方法

        1.2.1 藥敏試驗(yàn) 利用微量肉湯稀釋法對10種藥物的敏感性進(jìn)行檢測。在具體操作時使用滅菌棉簽蘸取3~5個待測單菌落,使其懸浮在NaCI溶液中(3mL 0.45%),用比濁儀把細(xì)菌濃度調(diào)整至適宜區(qū)間內(nèi),混合搖勻,由MHB試管內(nèi)吸取50μL并將其安放在藥敏板各孔,在36℃恒溫箱中培養(yǎng)24h后,判斷結(jié)果。

        1.2.2 檢測MRSA菌株 采用頭孢西丁制片法進(jìn)行。嚴(yán)格依照CLSI有關(guān)規(guī)定,把待測菌株涂擦在瓊脂平板上后,將頭孢西丁紙片貼上,恒溫培養(yǎng)后利用反射光閱讀紙片試驗(yàn)結(jié)果。

        1.2.3 檢測mecA基因 依照ZHANG等方法合成mecA引物,目標(biāo)片斷為146bp,工作濃度為20pmol/L,-20℃低溫環(huán)境下保存。利用DNA模板取多個菌落并將其放置于EP管內(nèi),水浴、離心處理后,取上層清液作為模板,保存待用。提取8μL PCR產(chǎn)物,用2%瓊脂糖凝膠電泳,在成像儀上觀察結(jié)果。

        2 結(jié)果

        2.1 藥敏試驗(yàn) 金黃菌對莫匹羅星、萬古霉素的耐藥率為0,對利福平的耐藥率為3.8%,對青霉素、鏈霉素、甲氧氨芐嘧啶、泰妙菌素、氯霉素的耐藥率依次為80.7%、74.3%、78.3%、68.1%、56.5,對紅霉素的耐藥率為92.7%。

        2.2 MRSA檢測情況 共檢出23株MRSA菌株,檢出率為51.1%。其中,發(fā)病樣品、健康畜禽的糞便樣品、環(huán)境樣品中分別檢出5、11、7株,其中發(fā)病樣品只由豬內(nèi)臟中檢出MRSA。

        2.3 mecA基因檢出情況 納入本次研究的樣品中,共計(jì)檢測出含有mecA基因的菌株23例,占51.1%,包括MRSA21株、MSSA2株。MRSA內(nèi)mecA陽性21株,陰性2株,mecA比例為91.3%;MSSA中mecA陽、陰性分別有2株、18株,mecA比例為10.0%。MRSA內(nèi)mecA基因攜帶率明顯高于MSSA。

        3 結(jié)論

        本次試驗(yàn)研究表明,除了萬古霉素、莫匹羅星外,金葡菌對其他藥物均產(chǎn)生了耐藥性。對利福平的耐藥率為3.8%,對青霉素、鏈霉素、甲氧氨芐嘧啶的耐藥率均在70~81%之間,而對紅霉素的耐藥率高于90.0%。頭孢西丁紙片法檢測出MRSA共計(jì)23株,占51.1%;并且發(fā)病樣本中只從豬內(nèi)臟樣品中檢測出MRSA,這可能是因?yàn)樯i在疾病預(yù)防、治療過程中未能科學(xué)使用抗生素所引發(fā)的。

        mecA基因檢出率為51.1%,MRST內(nèi)mecA基因攜帶率明顯高于MSSA,與國內(nèi)部分研究結(jié)果相一致。MSSA中有2株檢測出mecA基因,藥敏試驗(yàn)表明其對氯霉素敏感,但耐藥情況比不攜帶mecA基因更為嚴(yán)重[2]。

        結(jié)合本文研究的內(nèi)容發(fā)現(xiàn),攜有mecA基因的金葡菌具有較廣泛的耐藥性、敏感性等數(shù)個表現(xiàn),MRSA、MSSA內(nèi)均能檢測出mecA基因。采用PCR能快捷、精確的檢測到mecA基因,但如果依照mecA基因去鑒別MRSA,則應(yīng)關(guān)注假陰性的情況。

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