陳敏潔，曹鎖春，許 飛，鄒 昕，虞 茜，楊紅梅

江蘇省常州市中心血站，江蘇常州 213004

不規(guī)則抗體是指ABO血型抗體以外的血型抗體，而有臨床意義的不規(guī)則抗體會(huì)導(dǎo)致機(jī)體發(fā)生溶血性輸血反應(yīng)[1]。不規(guī)則抗體的出現(xiàn)是引起ABO血型鑒定困難和配血困難的主要原因，而其中最常見的是與Rh血型系統(tǒng)相關(guān)的不規(guī)則抗體，該系統(tǒng)不規(guī)則抗體可單獨(dú)存在，也可以聯(lián)合其他抗體共同存在。本課題組在工作中發(fā)現(xiàn)1例由抗-Ec合并抗-M抗體引起的正反定型不符及交叉配血不合，現(xiàn)將試驗(yàn)分析過程報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 患者夏某，女，65歲，因“肺癌2年余，嘔血600 mL”入院，臨床診斷肺癌，既往有輸血史，抗體篩查陽性，需特配懸浮紅細(xì)胞，遂送本站中心血輸血研究室進(jìn)行相關(guān)檢測。

1.2試劑與儀器 試劑：抗-A/B單克隆抗體(上海血液生物，批號：20180303)；抗-D(IgM)單克隆抗體(上海血液生物，批號：20171811)；抗-C抗體(上海血液生物，批號：20183001)；抗-c抗體(上海血液生物，批號：20183101)；抗-E抗體(上海血液生物，批號：20183201)；抗-e抗體(上海血液生物，批號：201833 01)；ABO血型反定型紅細(xì)胞(Ac、Bc、Oc)(北京金豪，批號：20181101028)；抗體篩選細(xì)胞(上海血液生物，批號：20187040)；國產(chǎn)譜細(xì)胞(上海血液生物，批號：20181123)；抗球蛋白試劑(上海血液生物，批號：20175001)、抗IgG(上海血液生物，批號：20175102)、抗C3d(批號：20185201)、抗M(上海血液生物，批號：20180420)、抗N(上海血液生物，批號：20170515)、2-Me(上海血液生物，批號:20177701),酸放散試劑(上海申型醫(yī)學(xué)科技公司，批號：20180422)。聚凝胺(Poly)試劑由中國臺灣貝索企業(yè)有限公司提供。儀器：久保田KA-2200血清學(xué)專用離心機(jī)；37 ℃恒溫水浴箱；盧湘儀TD4低速自動(dòng)平衡離心機(jī)；OrthoBioVue system。

1.3方法 采用試管法進(jìn)行ABO正反定型、抗人球蛋白試驗(yàn)(Coombs試驗(yàn))、抗體鑒定及交叉配血及微柱法進(jìn)行抗體特異性鑒定及交叉配血。所有試驗(yàn)均嚴(yán)格按照文獻(xiàn)[2]的方法和試劑操作說明書進(jìn)行。

2 結(jié) 果

2.1血型鑒定(試管法)ABO正定型結(jié)果 生理鹽水條件下，抗-A抗體陰性，抗-B抗體陰性；反定型結(jié)果：Ac 4+，Bc 4+，Oc陰性，自身細(xì)胞陰性。血型鑒定結(jié)果為O型。

2.2抗體篩選(試管法) 醫(yī)院送檢單顯示篩選試驗(yàn)陽性，提示有不規(guī)則抗體存在，本實(shí)驗(yàn)室進(jìn)一步做不規(guī)則抗體篩查發(fā)現(xiàn)篩選Ⅱ、Ⅲ細(xì)胞在室溫生理鹽水介質(zhì)中有凝集，37 ℃下3 min凝集消失；篩選Ⅰ、Ⅲ細(xì)胞在Poly和抗人球蛋白介質(zhì)中均為陽性結(jié)果，見表1。其中在Poly介質(zhì)下的凝集強(qiáng)度達(dá)到2+，提示該抗體對Poly介質(zhì)敏感。

表1 患者血清與篩選細(xì)胞反應(yīng)格局及結(jié)果(批號：20187038)

注：IS表示室溫，IAT表示鹽水間接抗球蛋白試驗(yàn),0表示陰性，+表示陽性。

2.3鑒定抗體其特異性(試管法——抗人球蛋白和Poly介質(zhì)) 從篩選細(xì)胞格局中初步推測血清中存在抗-M和抗-Ec抗體?？贵w特異性則通過譜細(xì)胞鑒定(由于抗篩實(shí)驗(yàn)在37℃下3 min凝集消失，說明鹽水抗體對抗人球介質(zhì)沒有干擾，故試驗(yàn)過程中沒有使用2-Me破壞)。國產(chǎn)譜細(xì)胞在鹽水介質(zhì)中出現(xiàn)3、6、9號陰性，符合抗-M抗體格局，在抗人球蛋白和聚凝胺介質(zhì)中1、4、10號呈陰性，符合抗-Ec抗體格局，試驗(yàn)結(jié)果見表2。于是進(jìn)一步做MNSs、Rh系統(tǒng)抗原分型試驗(yàn)進(jìn)一步確定抗體特異性，見表3。該患者Rh系統(tǒng)分型為CCDee，MNSs系統(tǒng)分型為NN，與血清中相應(yīng)抗體吻合。

表2 患者血清與譜反應(yīng)格局及結(jié)果(批號：20181123)

注：IS表示室溫，IAT表示鹽水間接抗球蛋白試驗(yàn)，/表示沒有進(jìn)行此抗原篩查，0表示陰性，+表示陽性。

表3 患者Rh抗原分型結(jié)果

表4 吸收放散試驗(yàn)結(jié)果(國譜3號+6號)

注：w為弱陽性；s為強(qiáng)陽性，0表示陰性，+表示陽性。

2.4吸收放散試驗(yàn) 由于不同血型系統(tǒng)抗體在譜細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中可能會(huì)有干擾而影響反應(yīng)格局，為進(jìn)一步確定抗體特異性，后對患者標(biāo)本進(jìn)行了吸收放散試驗(yàn)，挑選E和c抗原陽性M抗原陰性的細(xì)胞(國譜3號和6號混合液)與患者血清采用熱吸收酸放散(37 ℃條件下30 min),將放散液與吸收后的血清進(jìn)一步進(jìn)行譜細(xì)胞試驗(yàn)。見表4。結(jié)果表明患者血清中確實(shí)存在抗Ec抗體和抗-M抗體。

2.5抗體效價(jià)測定

2.5.1抗-M效價(jià)測定 采用試管法對血清倍比稀釋，每管均為50 μL。效價(jià)所用細(xì)胞為Ⅱ、Ⅲ篩選細(xì)胞混合液，各管中加入量為50 μL，整個(gè)體系為100 μL，分別做4 ℃、室溫(IS)、37 ℃ 3種溫度下抗-M抗體效價(jià)，結(jié)果顯示室溫為8，4 ℃為16，37 ℃<1(本研究以出現(xiàn)“±”的最高稀釋倍數(shù)為最終效價(jià))。見表5。

2.5.2抗-Ec效價(jià)測定 破壞與否對比試驗(yàn)：取180 μL血清加20 μL質(zhì)控液和200 μL 2-Me，充分混合后于37 ℃水浴箱中破壞10 min，去除IgM型抗體的干擾。測定效價(jià)試驗(yàn)前，先試管法加4滴破壞液和1滴混合細(xì)胞，離心觀察結(jié)果為陰性，說明破壞完全。采用倍比稀釋法測定IgG抗體效價(jià)，第1排為破壞后血清，第2排為非破壞血清，第2排試管所使用的細(xì)胞均為篩選細(xì)胞Ⅰ號與國譜2號混合液。結(jié)果表明37 ℃鹽水介質(zhì)中凝集消失，2-Me破壞與否不影響效價(jià)結(jié)果，說明IgM型抗體不存在干擾，見表6。

表5 抗-M抗體效價(jià)測定

注：w為弱陽性；s為強(qiáng)陽性，0表示陰性，+表示陽性。

2.6交叉配血試驗(yàn) 根據(jù)疑難配血申請單篩選1袋獻(xiàn)血者條碼為900181815346100，O型，RhD陽性，其他血型為“CCee且NN”血樣做主次側(cè)交叉配血試驗(yàn)，在鹽水、Poly、抗人球蛋白3種介質(zhì)中均無凝集、無溶血，可輸注上述懸浮紅細(xì)胞2單位。1周后追蹤該患者，輸血效果良好。

表6 抗-Ec抗體效價(jià)測定(篩選細(xì)胞Ⅰ號+國譜2號)

注：w為弱陽性；s為強(qiáng)陽性，0表示陰性，+表示陽性。

3 討 論

臨床上交叉配血不合的原因眾多，在進(jìn)行血液篩查的每個(gè)環(huán)節(jié)都可能導(dǎo)致配血不合。在輸血前的血液檢測中，不規(guī)則抗體篩選陽性時(shí)導(dǎo)致不合屬常見現(xiàn)象。Rh血型系統(tǒng)在輸血工作中的重要性僅次于ABO血型系統(tǒng)[3-4]。Rh血型系統(tǒng)抗體產(chǎn)生的原因大多是妊娠和輸血，抗-E抗體是D陽性人群最容易產(chǎn)生的抗體，而抗-c抗體往往會(huì)伴隨著抗-E抗體一起出現(xiàn)。該患者Rh基因型為CCDee，缺乏c和E抗原，多次輸血過程中，由于帶有c和E抗原的紅細(xì)胞被輸入患者體內(nèi)，導(dǎo)致其自身產(chǎn)生了免疫性抗-E和抗-c抗體，當(dāng)再次輸血時(shí)就會(huì)出現(xiàn)交叉配血不合?？?M抗體多為天然產(chǎn)生，不需要紅細(xì)胞的刺激，大多為IgM性質(zhì)，少數(shù)為IgG性質(zhì)，在4 ℃時(shí)活性最強(qiáng)，抗-M抗體只有在37 ℃或抗球蛋白陽性時(shí)才具有臨床意義[3]。但是考慮在低溫麻醉情況下，且紅細(xì)胞保存溫度為2～6 ℃，輸入的紅細(xì)胞易與高效價(jià)抗-M抗體結(jié)合并吸附補(bǔ)體，從而引起抗-M抗體溶血。不規(guī)則抗體陽性的患者一旦輸注含有相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞，抗原抗體在補(bǔ)體的參與下發(fā)生免疫反應(yīng)，導(dǎo)致輸注的紅細(xì)胞溶解破壞，嚴(yán)重時(shí)甚至危及生命。因此輸血前應(yīng)盡可能了解患者輸血史、妊娠史、用藥史，及時(shí)發(fā)現(xiàn)有臨床意義的抗體，以選擇對應(yīng)抗原陰性的血液，保證輸血安全有效[5-8]。