秦雪君，李揚宇，林伯熹，林 青

福建中醫(yī)藥大學附屬人民醫(yī)院檢驗科，福建福州 350001

糖類抗原(CA)19-9是唾液酸化Ⅱ型乳酸巖藻糖，是腫瘤細胞神經節(jié)苷脂。胚胎期分布于胎兒的胰腺、肝膽和腸道等組織，在成人的胰腺、膽道、胃腸道、子宮內膜等部位也有少量存在[1]。胰腺癌、肝膽管癌、胃癌、肝癌、直腸癌及乳腺癌患者血液中均可升高，胰腺炎及良性胃腸道疾病患者中也可見升高[2]。CA19-9升高對于早期發(fā)現腫瘤復發(fā)及轉移具有重要的臨床意義。目前，CA19-9常用的檢測方法為化學發(fā)光免疫法，該法具有靈敏度高、特異度好、速度快，且不用預處理的優(yōu)點。常用的檢測系統(tǒng)有貝克曼DXI800、羅氏E601、雅培I2000SR等。但是該方法的原理是抗原抗體反應。在反應過程中，可能會受到藥物、異嗜性抗體、人抗動物抗體(HAAA)、自身抗體、類風濕因子等因素的干擾而導致假陽性或假陰性的結果，從而影響臨床診斷及治療。本文通過分析2例CA19-9異常升高患者的臨床資料，及其可能導致升高的原因，現將診治過程報道如下。

1 資料與方法

1.1臨床資料 病例1，女性，56歲，2019年3月21日以“子宮內膜間質肉瘤術后3年余”為主訴入院。螺旋CT平掃+重建5 mm對肺部進行掃描，顯示：(1)右肺中、下葉結節(jié)；(2)右肺中葉少許條索灶，考慮慢性炎癥；(3)左乳小鈣化灶。常規(guī)心電圖檢查結果顯示：竇性心律；心電圖未見明顯異常。胸部正側位片結果顯示：心肺未見明顯異常。盆腔MR平掃+增強結果顯示：子宮惡性腫瘤術后改變，盆腔未見明顯轉移及復發(fā)改變。全腹彩超結果顯示：輕度脂肪肝；膽囊多發(fā)息肉樣病變；子宮切除術后。臨床醫(yī)生報告入院檢查CA19-9水平為444.29 IU/mL，結合影像學資料及以往檢查結果，差異較大，考慮存在干擾因素。

病例2，女性，47歲，2019年5月6日前因“發(fā)現右乳腫物1月”入院，于5月16日行“右乳區(qū)段切除術+清創(chuàng)縫合術”，入院完善檢查，乳腺彩超提示雙側乳腺增生，右側乳腺片狀低回聲區(qū)，雙側乳腺導管擴張伴導管內透聲差。電子胃鏡顯示慢性非萎縮性胃炎伴糜爛。2019年5月15日行全腹部CT直接增強+肺部高分辨率螺旋CT平掃，結果顯示：(1)右肺上葉、下葉結節(jié)；(2)左肺上葉少許慢性炎癥；(3)右側乳腺結節(jié)及鈣化灶；(4)右側腋窩淋巴結；(5)雙腎囊腫。CA19-9水平檢測結果為567.40 IU/mL。2019年5月16日在全身麻醉下行“右乳區(qū)段切除術+清創(chuàng)縫合術”。手術順利，生命體征平穩(wěn)。手術標本檢查后診斷為肉芽腫性小葉性乳腺炎、導管囊性擴張伴慢性炎癥、局灶導管內乳頭狀瘤。免疫組織化學法結果顯示，CK-p(-)、CD68-kp1(-)、波形蛋白(+)、平滑肌肌動蛋白(-)、Ki-67(-)?；颊咧委熐闆r良好后出院。2019年6月5日患者以“反復口干、多飲、多尿1個月”入院，甲狀腺功能3項+抗甲狀腺過氧化物酶抗體結果顯示為正常。腎功能檢查、糖尿病自身抗體測定、腦鈉肽檢測結果均正常。檢驗人員在結果審核過程中發(fā)現，臨床診斷“糖尿病”與CA19-9水平為364.40 IU/mL單項升高的結果不符。

1.2方法

1.2.1稀釋處理標本 在雅培I2000SR上采用試劑配套稀釋液進行檢測，選擇10倍稀釋比例檢測血清結果。偏差(%)=(稀釋后結果-原值)/原值×100%。

1.2.2異嗜性抗體阻斷劑(HBR)處理標本 HBR(Scantibodies公司)含有一種特殊成分的阻斷試劑，可對異嗜性抗體進行滅活。一旦特異性黏合劑與異嗜性抗體結合，該抗體則不再能造成免疫干擾。HBR為凍干顆粒的形式，裝在試管的底部，每管中含有足夠的試劑，能滅活500 μL標本中的異嗜性抗體。500 μL患者血清與HBR室溫混合孵育1 h后，置雅培I2000SR檢測系統(tǒng)檢測CA19-9。偏差(%)=(HBT阻斷后結果-原值)/原值×100%。

1.2.3更換檢測系統(tǒng) 病例1采用本實驗室貝克曼DXI800全自動免疫分析儀檢測CA19-9，檢測原理為雙抗體夾心微粒子化學發(fā)光法；病例2采用外院實驗室羅氏E601檢測CA19-9，檢測原理為雙抗體夾心電化學發(fā)光法。偏差(%)=(更換檢測系統(tǒng)結果-原值)/原值×100%。

1.3統(tǒng)計學處理 采用Microsoft Excel2010對數據進行分析。

2 結 果

2.1血清稀釋后CA19-9水平與原值的比較 病例1血清經儀器10倍稀釋后CA19-9水平檢測結果為229.51 IU/mL，偏差為-48.34%；病例2血清經儀器10倍稀釋后CA19-9水平檢測結果為124.71 IU/mL，偏差為-65.78%。稀釋結果與稀釋倍數不成線性。

2.2血清經HBR阻斷處理后CA19-9水平與原值的比較 病例1血清經HBR阻斷處理后CA19-9水平檢測結果為45.57 IU/mL，偏差為-89.74%；病例2血清經HBR阻斷處理后CA19-9水平檢測結果為36.92 IU/mL，偏差為-89.87%。

2.3更換檢測系統(tǒng)后兩例患者血清CA19-9水平與原值的比較 病例1血清更換為貝克曼DXI800進行檢測后，CA19-9水平為54.00 IU/mL(參考區(qū)間為0～37 IU/mL)，偏差為-87.84%；病例2血清更換為羅氏E601進行檢測，CA19-9水平為36.92 IU/mL(參考區(qū)間為0～39 IU/mL)，偏差為-89.87%。

3 討 論

CA19-9的檢測是基于抗原、抗體結合的免疫法。免疫法的特異性與抗體的特性密切相關，同時也受到標本中抗原及其基質、試劑成分和檢測方法的影響。本研究中，臨床醫(yī)師發(fā)現病例1及病例2的CA19-9檢測結果與以往檢測結果差異較大，與臨床表現不符，為證實結果是否可信，筆者進行了一系列的排除試驗。兩例患者CA19-9經過稀釋后，稀釋結果與稀釋倍數不成線性，考慮標本中可能存在干擾物質。為進一步查找可能的干擾物質，分別采用HBR阻斷后及更換檢測系統(tǒng)，檢測結果與雅培I2000SR檢測系統(tǒng)比較有明顯的差異。說明雅培I2000SR檢測系統(tǒng)的結果可能受到異嗜性抗體的干擾。HBR成分為抗小鼠單克隆抗體免疫球蛋白，能夠特異性的結合鼠源性的抗體，產生位阻效應，消除干擾。查閱各個系統(tǒng)的檢測原理，雅培檢測系統(tǒng)采用雙抗體夾心法，所用的捕獲抗體和標記抗體均為小鼠單克隆抗體。貝克曼DXI800檢測系統(tǒng)所采用的捕獲抗體為多克隆山羊抗菌藥物抗體，小鼠單克隆-抗菌藥物抗體復合物，標記抗體為小鼠單克隆抗體。羅氏E601檢測系統(tǒng)采用的是雙抗體夾心法檢測CA19-9，所采用的捕獲抗體及標記抗體均為小鼠單克隆抗體。因此，推測兩例患者血清中出現的異嗜性抗體可能是人抗小鼠抗體，它可能代替待測抗原物質，同時結合捕獲抗體和標記抗體，使結果出現假性升高。而由于不同品牌的試劑所使用的抗體結合位點不同，同一種異嗜性抗體由于對不同檢測試劑中各抗體組合的反應可能會有所不同，因此，可能出現雅培I2000SR檢測系統(tǒng)受影響，而貝克曼DXI800和羅氏E601檢測結果未受影響。兩例患者均為腫瘤術后患者，病例1為子宮惡性腫瘤術后10年的患者，術后隨訪復查CA19-9，否認近期動物接觸史，治療用藥不詳。病例2為乳腺炎術后1個月的患者，因糖尿病入院治療，否認近期動物接觸史，治療用藥不詳，因此異嗜性抗體來源不詳。

異嗜性抗體是由已知或未知的抗原物質刺激人體所產生的一類能與多個物種的免疫球蛋白發(fā)生相對弱結合的多重特異性免疫球蛋白[1-2]。其能夠通過非特異地結合捕獲抗體或標記抗體，影響檢測，進而導致檢測結果與臨床表現不符。異嗜性抗體包括一些天然抗體和自身抗體，可能來源于污染的食物、與動物的接觸或動物血清的接觸[3-4]。主要通過非競爭機制干擾免疫檢測，通過與試劑中的抗體結合，導致結果出現假陽性[5]。臨床中異嗜性抗體的檢出率很高，WARD等[6]在40%的隨機人群中檢出異嗜性抗體，但大多數異嗜性抗體并不會對免疫檢測帶來干擾。另外，自然產生或自身免疫源性的類風濕因子(RF)也是免疫檢測過程中的干擾因素之一。RF是患者體內出現的針對變性的IgG或內源性IgM產生的抗體，可由細菌或病毒感染引起，可模擬異嗜性抗體的作用而結合捕獲抗體和標記抗體使結果出現假性升高[7-9]。

近年來，部分文獻報道了異嗜性抗體對免疫檢測的干擾，包括心肌標志物[1,10-12]、甲狀腺激素[13-14]、腫瘤標志物[15-16]等，該類干擾易導致誤診，使患者接受不必要的治療。本研究中兩例患者均為腫瘤術后患者，CA19-9結果如超過參考區(qū)間，臨床醫(yī)師會考慮患者是否出現腫瘤復發(fā)或轉移，從而進行治療，而處于參考區(qū)間內，醫(yī)生會選擇繼續(xù)隨訪觀察。不同的結果會有截然不同的治療方案，因此，對于異常檢驗結果應提高警惕。目前大多數試劑盒說明書都對檢驗方法的局限性進行了說明，但也未能徹底消除異嗜性抗體的干擾。克服此類干擾的處理方法除了文中的HBT阻斷法，還有蛋白G法、PEG法、熱和酸處理法[15]，各有優(yōu)缺點，消除效果取決于免疫分析原理及標本中異嗜性抗體的來源及成分?；谝陨戏治?，在臨床檢驗免疫檢測工作中，一旦出現檢驗結果與臨床癥狀不符的情況，應當提高警惕，當有以下情況發(fā)生時，可考慮出現異嗜性抗體干擾：(1)檢驗結果與臨床癥狀不符；(2)標本經稀釋后結果不成線性；(3)更換檢測系統(tǒng)，結果差異顯著；(4)使用HBR處理后，結果差異顯著；(5)詳細詢問患者近期是否接受免疫接種、輸血或接受單克隆抗體治療；(6)詳細詢問患者是否有動物密切接觸史。

本研究中兩例患者的CA19-9檢測結果受到了異嗜性抗體的干擾，通過更換檢測系統(tǒng)和使用HBR阻斷，有效解決了相應的干擾。提示檢驗人員在工作過程中，對免疫學檢測方法的干擾因素及干擾機制必須要有所了解，熟悉其處理方法。一旦出現結果與臨床表現不符的情況，能夠與臨床醫(yī)生積極溝通、有效排查。