(武漢大學(xué)人民醫(yī)院婦科，湖北 武漢 430060)

部分地區(qū)的流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，卵巢癌的發(fā)病率可超過485/10萬人[1]，在合并有遺傳易感高危因素的人群中，卵巢癌的發(fā)病率可進(jìn)一步的上升。臨床上卵巢癌的發(fā)生，能夠?qū)е禄颊呓诟吣[瘤負(fù)荷的發(fā)生，并能夠增加患者遠(yuǎn)期病死的風(fēng)險(xiǎn)[2]。在研究卵巢癌的發(fā)病機(jī)理的過程中，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞因子的變化，或者腫瘤相關(guān)蛋白的改變，能夠通過影響到卵巢上皮細(xì)胞的異常分裂、增殖等過程，進(jìn)而促進(jìn)卵巢癌的發(fā)生。乙醛脫氫酶(ALDH1)能夠通過其對(duì)于卵巢上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)錄基因的激活，從而促進(jìn)上皮細(xì)胞早期異常持續(xù)增殖，并能夠降低癌細(xì)胞的錯(cuò)配修復(fù)能力[3]；Polo樣蛋白激酶4(PLK4)是著絲粒調(diào)節(jié)蛋白，其能夠通過對(duì)于著絲粒的調(diào)控，增加非整倍體發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)，最終促進(jìn)癌細(xì)胞的發(fā)生和腫瘤的進(jìn)展[4]。為了揭示ALDH1和PLK4的表達(dá)與卵巢癌的病情關(guān)系，從而為臨床上卵巢癌的診療提供理論方面的參考，本次研究選取2017年1月至2018年1月本院收集的卵巢癌組織標(biāo)本100例，探討了ALDH1和PLK4的表達(dá)及其與卵巢癌的病情關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院經(jīng)病理學(xué)檢查確診的卵巢癌組織100例、卵巢良性腫瘤組織200例(良性組)，標(biāo)本收集時(shí)間2017年1月至2018年1月。

卵巢癌，年齡32～65歲，平均53.8±6.6歲，參考國際婦產(chǎn)聯(lián)盟分期(FIGO)標(biāo)準(zhǔn)：其中Ⅰ期卵巢癌16例、Ⅱ期卵巢癌30例、Ⅲ期卵巢癌38例、Ⅳ期卵巢癌16例；根據(jù)病學(xué)分化程度：高、中、低分化分別為27例、35例、35例；黏液性囊腺癌73例、其他23例。良性組，年齡29～65歲，平均51.5±8.0歲，漿液性囊腺瘤78例、粘液性囊腺瘤68例、成熟性囊性畸胎瘤34例、其他類型20例。兩組年齡比較均衡，具有可比性(P>0.05)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)卵巢惡性腫瘤的診斷依據(jù)病理學(xué)檢查結(jié)果進(jìn)行判斷，參考《外科學(xué)》人衛(wèi)第八版中的標(biāo)準(zhǔn)[5]；(2)既往無放化療及免疫學(xué)治療病史；(3)兩組患者的各項(xiàng)資料收集完善，可進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；(4)研究方案涉及患者隱私等因素均予以保密，并申請(qǐng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并其他部位惡性腫瘤；(2)類風(fēng)濕、免疫學(xué)疾病患者；(3)肝腎功能疾病患者；(4)合并其他系統(tǒng)的重大疾病。

1.2 免疫組化染色法

石蠟包埋，連續(xù)性切片厚度3 μm，60 ℃烤片60 min，常規(guī)脫水后，采用EDTA進(jìn)行抗原修復(fù)，加入10ul蒸餾水，加入10%過氧化氫5il，室溫下孵育30min,磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌3次*3 min，加入ALDH1和PLK4蛋白的單克隆抗體(1∶1 000購自羅氏檢測公司)，37 ℃孵育60 min，PBS洗滌3次*3 min，加入HRP標(biāo)記的ALDH1和PLK4蛋白二抗(1∶2 000 購自羅氏公司)，37 ℃孵育20 min，PBS洗滌3次*3 min，加入DAB后，PBS沖洗和復(fù)染，脫水后在顯微鏡下進(jìn)行觀察。

1.3 SP染色結(jié)果評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)[6]

PLK4表達(dá)于細(xì)胞核，ALDH1表達(dá)于細(xì)胞漿，陽性染色分別為黃色、棕黃色、褐色或者黑色，(1)根據(jù)染色強(qiáng)度評(píng)分：無色(0分)、淡黃色(1分)、棕黃色(2分)、褐色或者黑色(3分)；(2)依據(jù)陽性細(xì)胞所占的比例：比例≤10%(1分)、占比范圍11%～50%(2分)、占比范圍51%～75%(3分)、占比范圍>75%(4分)，染色強(qiáng)度積分與陽性細(xì)胞占比積分之乘積<3分為陰性、≥3分為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS16.0版本軟件包進(jìn)行分析統(tǒng)計(jì)。年齡等計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，比較分析采用t檢驗(yàn)或單因素方差分析法；計(jì)數(shù)資料用百分率(%)表示，分析采用χ2檢驗(yàn)；以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 卵巢癌組織與卵巢良性腫瘤組織中的ALDH1和PLK4蛋白陽性表達(dá)率比較

卵巢癌組織中的ALDH1和PLK4蛋白陽性表達(dá)率分別為65.00%、70.00%，良性組卵巢癌組織中的ALDH1和PLK4蛋白陽性表達(dá)率分別為21.50%、19.50%，兩組ALDH1和PLK4蛋白陽性表達(dá)率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；(表1、圖1)。

表1 卵巢癌組織與卵巢良性腫瘤組織中的ALDH1和PLK4蛋白陽性表達(dá)率比較 (例，%)

圖1 ALDH1表達(dá)的SP染色結(jié)果(SP 200×)A為卵巢良性腫瘤組織、B為卵巢癌組織

圖2 PLK4表達(dá)的SP染色結(jié)果(SP 200×)A為卵巢良性腫瘤組織、B為卵巢癌組織

2.2 ALDH1和PLK4蛋白陽性表達(dá)在不同病理學(xué)特征卵巢癌組織中的表達(dá)差異

卵巢癌組織中的ALDH1和PLK4蛋白在不同F(xiàn)IGO分期、不同的組織分化程度、是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織中表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；見表2、表3。

表2 ALDH1蛋白陽性表達(dá)在不同病理學(xué)特征卵巢癌組織中的表達(dá)差異

3 討 論

異常病理狀態(tài)下卵巢生發(fā)上皮細(xì)胞的持續(xù)性增殖，能夠顯著促進(jìn)卵巢癌的發(fā)生，在游離性激素受體敏感性上升或者雌孕激素波動(dòng)明顯的群體中，卵巢癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)可進(jìn)一步的上升[6]。臨床上的觀察發(fā)現(xiàn)[7-8]，卵巢癌患者的5年生存率不超過35%，不同措施治療后卵巢癌患者的病情進(jìn)展率仍然超過了25%。現(xiàn)階段缺乏對(duì)于卵巢癌病情評(píng)估的血清學(xué)腫瘤蛋白指標(biāo)，雖然部分研究者主張通過糖鏈蛋白125(CA125)進(jìn)而評(píng)估患者的病情。但國外有研究發(fā)現(xiàn)[9]，依靠CA125評(píng)估卵巢癌病情或者臨床轉(zhuǎn)歸的一致性率仍然較低，其評(píng)估的靈敏度不超過45%。本次研究通過對(duì)于卵巢癌患者病灶組織中ALDH1和PLK4的表達(dá)分析研究，能夠在深入揭示卵巢癌病情進(jìn)展機(jī)理的同時(shí)，為臨床上卵巢癌的診療提供理論方面的參考。

表3 PLK4蛋白陽性表達(dá)在不同病理學(xué)特征卵巢癌組織中的表達(dá)差異

ALDH1是脫氫酶家族成員，其能夠通過誘導(dǎo)癌細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)蛋白的脫氫，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤生物學(xué)特征的惡化。ALDH1結(jié)構(gòu)上含有的絲氨酸-脯氨酸重復(fù)結(jié)構(gòu)，能夠誘導(dǎo)癌細(xì)胞內(nèi)腫瘤信號(hào)通路MAPK的激活，加劇癌細(xì)胞的異常轉(zhuǎn)錄和復(fù)制。相關(guān)基礎(chǔ)方面的研究認(rèn)為，ALDH1能夠提高癌細(xì)胞的浸潤和粘附能力，增加癌細(xì)胞突破卵巢基底膜組織的風(fēng)險(xiǎn)，并最終促進(jìn)卵巢惡性腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移[10]；PLK4是著絲粒調(diào)控蛋白，其不僅能夠通過影響著絲粒的功能狀態(tài)，進(jìn)而導(dǎo)致卵巢上皮細(xì)胞的惡變，同時(shí)還能夠干預(yù)到上皮細(xì)胞的周期，從而增加G1/S期的細(xì)胞比例[11]。國外有學(xué)者[12]已經(jīng)探討了ALDH1的表達(dá)與卵巢癌的病情關(guān)系，認(rèn)為在卵巢癌患者中，ALDH1蛋白的表達(dá)陽性率明顯上升，但對(duì)于PLK4的分析較少。

本組研究中，卵巢癌組織中的ALDH1和PLK4蛋白陽性表達(dá)率顯著高于良性組卵巢癌組織中的ALDH1和PLK4蛋白陽性表達(dá)率，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示了ALDH1和PLK4的高表達(dá)均能夠影響到卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過程。分析ALDH1和PLK4的高表達(dá)對(duì)于卵巢癌的發(fā)生內(nèi)在影響，考慮由于下列因素有關(guān)[13-14]：(1)ALDH1的表達(dá)上升，能夠促進(jìn)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)錄上游啟動(dòng)子的激活，提高了其對(duì)于癌細(xì)胞異常轉(zhuǎn)錄的激活作用；(2)PLK4的上調(diào)，能夠提高上皮細(xì)胞異常有絲分裂的風(fēng)險(xiǎn)，導(dǎo)致上皮細(xì)胞癌基因突變風(fēng)險(xiǎn)的上升，從而促進(jìn)了卵巢癌的發(fā)生。俞嵐等[15]研究者也發(fā)現(xiàn)，在卵巢癌患者病灶組織中，ALDH1蛋白的表達(dá)陽性率可平均上升45%以上，在合并有明顯的腫瘤惡病質(zhì)或者遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者中，ALDH1蛋白的表達(dá)陽性率可進(jìn)一步的上升。免疫組化的染色分析可見，ALDH1和PLK4蛋白均主要表達(dá)于細(xì)胞核或者細(xì)胞漿，特別是在癌細(xì)胞異型性較為明顯的區(qū)域，ALDH1和PLK4蛋白的染色強(qiáng)度更深。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，卵巢癌組織中的ALDH1和PLK4蛋白在不同F(xiàn)IGO分期、不同的組織分化程度、是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織中表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示了ALDH1和PLK4的表達(dá)與卵巢癌患者的臨床病理特征密切相關(guān)，這主要由于ALDH1和PLK4的上升，能夠通過導(dǎo)致癌細(xì)胞生物學(xué)特征的惡化，提高癌細(xì)胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)換能力，促進(jìn)癌細(xì)胞對(duì)于淋巴結(jié)組織的粘附，提高了癌細(xì)胞的浸潤深度，從而最終促進(jìn)了淋巴病理特征的進(jìn)展。臨床上可以通過檢測ALDH1和PLK4，進(jìn)而評(píng)估卵巢癌的臨床病情。本次研究未探討ALDH1和PLK4的表達(dá)與卵巢癌患者遠(yuǎn)期預(yù)后的關(guān)系，存在一定的不足。

綜上所述，在卵巢癌患者病灶組織中，ALDH1和PLK4蛋白的表達(dá)陽性率均明顯上升，同時(shí)ALDH1和PLK4的表達(dá)與卵巢癌患者的組織學(xué)分級(jí)、臨床分期等臨床病理特征密切相關(guān)。