魏雙羽

（西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院，陜西 西安 710061）

多發(fā)性骨髓瘤是一種常見的惡性漿細(xì)胞病，常見于B細(xì)胞淋巴瘤，是一種主要的骨髓漿細(xì)胞增殖障礙。易伴有腎損害、多發(fā)溶骨性疾病、貧血、高鈣血癥等疾病。同時(shí)，在發(fā)病后，患者免疫球蛋白產(chǎn)生障礙，容易發(fā)生感染[1]。不過，由于此類疾病通常沒有明顯的早期特異性癥狀，因而可能會(huì)漏誤診，耽誤患者的治療。所以，應(yīng)當(dāng)采取有效的檢查方法，盡早檢出疾病，為患者治療提供依據(jù)。基于此，本文選取2018年2月—2019年2月醫(yī)院收治的多發(fā)性骨髓瘤患者64例，探討流式細(xì)胞免疫分型在多發(fā)性骨髓瘤中的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取多發(fā)性骨髓瘤患者64例，選取時(shí)間范圍是2018年2月-2019年2月，男36例，女28例，年齡42～72歲，平均(57.6±3.5)歲。其中52例合并骨病變、48例合并貧血、36例合并腎功損害、8例合并血鈣增高?；颊逥S分期包括6例ⅠA期、8例ⅠB期、12例ⅡA期、20例ⅡB期、12例ⅢA期、6例ⅢB期。

納入標(biāo)準(zhǔn)：均符合多發(fā)性骨髓瘤的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查證實(shí)。他們獲得了研究的知情同意和醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：有精神疾病的人，有血液系統(tǒng)其他疾病的患者，有嚴(yán)重的心、肝、腎等器官功能障礙的患者。

1.2 方法

1.2.1 流式細(xì)胞術(shù)：采用流式細(xì)胞術(shù)收集肝素抗凝骨髓液。選擇5～10×106個(gè)細(xì)胞/ml的單細(xì)胞懸液，每100 ul單細(xì)胞懸液與20 UL抗體融合，室溫避光孵育20 min。加入氯化銨溶血?jiǎng)?500 rpm離心10 min，取出上清，用0.5 ml PBS重懸。PBS沖洗2次，避光破碎15 min。加入細(xì)胞質(zhì)抗體，孵育30 min，洗滌一次，用0.5 ml PBS復(fù)蘇。使用相關(guān)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)收集和分析。每個(gè)試管中分析10000個(gè)細(xì)胞，熒光強(qiáng)度軸設(shè)置為對(duì)數(shù)模式。通過同型比較的方法確定了截?cái)嘀?。在抗原軸方向，若總位移超過截?cái)嘀档?0%，則考慮抗原陽性表達(dá)。

1.2.2 毛細(xì)管免疫分型電泳：全血標(biāo)本以3000 r/min離心15 min分離血清。將樣品及其配套試劑置于自動(dòng)毛細(xì)管電泳裝置中進(jìn)行全反應(yīng)和電泳。掃描并檢測(cè)結(jié)果。每個(gè)樣本進(jìn)行6次血清蛋白電泳，1次為標(biāo)準(zhǔn)血清蛋白電泳。1次為加入血清蛋白電泳的反應(yīng)電泳，分別為k、IgG、IgA和IgM抗體。如標(biāo)準(zhǔn)血清蛋白電泳圖譜，有底部狹窄、高尖異常蛋白峰，則判定為陽性。

1.2.3 毛細(xì)管血清蛋白電泳：使用全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀與配套試劑，全血標(biāo)本以3000 r/min離心15 min分離血清。采用毛細(xì)管電泳進(jìn)行電泳分離、掃描和結(jié)果測(cè)定。如果掃描圖像中顯示的區(qū)域?yàn)榈锥霜M窄或高端異常蛋白峰，則為陽性。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo)

比較三種檢查方法的檢出率情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 20.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以數(shù)或率表示，卡方檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

所選64例患者中，流式細(xì)胞術(shù)檢出檢出率為96.88%，分別高于毛細(xì)管免疫分型電泳的84.38%和毛細(xì)管血清蛋白電泳的81.25%，有顯著差異（P＜0.05）。見表1。

表1 不同檢查方法檢出率情況的比較[n（%），n=64]

3 討 論

在臨床上，多發(fā)性骨髓瘤屬于B淋巴細(xì)胞淋巴瘤的范疇，具有復(fù)雜的臨床表現(xiàn)，但是特異性不足，因而在早期診斷時(shí)容易發(fā)生漏誤診，導(dǎo)致患者治療受到延誤。在具體的臨床診斷當(dāng)中，除了骨髓涂片細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查之外，還有毛細(xì)管血清蛋白電泳、毛細(xì)管免疫分型電泳等方法，能夠?qū)撬枇黾?xì)胞在血液中產(chǎn)生釋放的M蛋白有效檢出，同時(shí)創(chuàng)傷更小，快速經(jīng)濟(jì)[2]。而流式細(xì)胞術(shù)免疫分型在實(shí)現(xiàn)上述目標(biāo)的同時(shí)，還能夠?qū){液細(xì)胞良惡性快速鑒別，對(duì)惡性漿液細(xì)胞客觀評(píng)估，同時(shí)對(duì)骨髓瘤細(xì)胞免疫表型異質(zhì)性、胞內(nèi)輕鏈克隆性等情況加以反映，因而在臨床診斷中，表現(xiàn)出了優(yōu)于其它幾種方法的特點(diǎn)。流式細(xì)胞術(shù)在多發(fā)性骨髓瘤中的應(yīng)用，能夠發(fā)揮出很多方面的作用。例如，對(duì)漿細(xì)胞免疫表型及克隆性的檢查，可以對(duì)漿細(xì)胞良惡性、反應(yīng)性等情況加以明確。該方法能夠?qū)α黾?xì)胞特有異常免疫常型加以識(shí)別，進(jìn)而在復(fù)雜骨髓細(xì)胞群當(dāng)中，將微量瘤細(xì)胞檢出[3]。漿細(xì)胞特異性表面標(biāo)志物主要是CD38、CD138。此外，在正常漿細(xì)胞中，CD45弱表達(dá)，CD19表達(dá)，CD56不表達(dá)；在骨髓瘤細(xì)胞中，CD45表達(dá)減低或不表達(dá)，CD19弱表達(dá)或不表達(dá)，CD56表達(dá)升高。在正常漿細(xì)胞當(dāng)中，cKappa輕鏈、clabda輕鏈呈現(xiàn)出多克隆表達(dá)，在骨髓瘤細(xì)胞中則為限制性表達(dá)。流式細(xì)胞術(shù)也能夠?qū)@些變化準(zhǔn)確區(qū)分，從而提高對(duì)多發(fā)性骨髓瘤的診斷效果。

綜上所述，在多發(fā)性骨髓瘤的臨床診斷中，采用流式細(xì)胞術(shù)免疫分型的檢查方法，能夠達(dá)到更高的檢出率，具有更高的診斷價(jià)值。