袁明貴，向 蓉，彭新宇，余丹妮，舒柄垚，鄧森榮，吳裕紅，徐志宏*

（廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 動物衛(wèi)生研究所 廣東省畜禽疫病防治研究重點實驗室 農(nóng)業(yè)部獸用藥物與診斷技術(shù)廣東科學(xué)觀測實驗站廣東省中獸藥工程技術(shù)研究中心，廣東 廣州 510640）

對于中藥渣固態(tài)發(fā)酵，按菌種不同可以分為單一菌種固態(tài)發(fā)酵和復(fù)合菌種固態(tài)發(fā)酵；按接種次數(shù)不同，可以分為單次接種固態(tài)發(fā)酵和多次接種固態(tài)發(fā)酵。該文重點對有關(guān)中藥渣固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)飼料的發(fā)酵菌種、發(fā)酵工藝以及產(chǎn)品功效等方面內(nèi)容進(jìn)行綜述，并對產(chǎn)業(yè)化發(fā)展緩慢的原因加以探討，旨在為中藥渣固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)功能性飼料的深入研究和產(chǎn)業(yè)化發(fā)展提供參考。

1 中藥渣固態(tài)發(fā)酵菌種

菌種的選擇或菌種組配對于固態(tài)發(fā)酵中藥渣生產(chǎn)飼料至關(guān)重要，選擇的菌種必須具有耐酸、耐高溫、繁殖力強、生長速度快、抗污染能力強、纖維素降解能力強、蛋白質(zhì)合成能力強等優(yōu)良特性[2]。

中藥渣的纖維素含量普遍較高[3]，降低纖維素含量和提高蛋白質(zhì)含量是中藥渣固態(tài)發(fā)酵的重要目標(biāo)。霉菌是真菌門的亞門，有的霉菌會產(chǎn)生霉菌毒素，對人和動物危害較大，而有的霉菌是安全的。黑曲霉和米曲霉等可以產(chǎn)生纖維素酶、淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、果膠酶、植酸酶、葡萄糖氧化酶等大量的酶系，這些酶能夠破壞植物細(xì)胞壁，降解粗纖維、植酸等難吸收的物質(zhì)，消除抗?fàn)I養(yǎng)因子，提高營養(yǎng)價值。芽孢桿菌生命力強，可以耐高溫低溫、強酸強堿、高氧低氧；繁殖快，能抑制有害菌的生長；代謝快，能產(chǎn)生豐富的代謝產(chǎn)物，如有機酸、生物活性物質(zhì)，及其它多種容易被利用的養(yǎng)份。芽孢桿菌發(fā)酵時也產(chǎn)生大量的酶系。因此，黑曲霉等真菌[3-4]以及芽孢桿菌[5]可以作為單一菌種對中藥渣進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵。

復(fù)合菌種的發(fā)酵效果普遍優(yōu)于單一菌種[2，6]。主要因為單一菌種發(fā)酵時產(chǎn)生酶系單一，不能較好地降解纖維素等大分子物質(zhì)；而且單一菌種發(fā)酵時，產(chǎn)物對菌種及其產(chǎn)生的酶具有反饋抑制作用。如果利用多菌種之間的互補和協(xié)同作用，可以更好地對中藥渣進(jìn)行固態(tài)復(fù)合發(fā)酵。酵母菌是一種典型的異養(yǎng)兼性厭氧單細(xì)胞真菌，適合在偏酸性潮濕的含糖環(huán)境中生長。由于酶解產(chǎn)物單糖或寡糖對纖維素酶具有反饋抑制作用，而酵母能夠利用單糖或寡糖，將其發(fā)酵成酒精和二氧化碳，所以酵母是一種較好的組合發(fā)酵菌種之一。一般來說，將纖維素降解能力強的絲狀真菌與發(fā)酵能力強的酵母菌進(jìn)行組配[7-8]，或選擇芽孢桿菌與酵母菌進(jìn)行組配，聯(lián)合進(jìn)行中藥渣的固態(tài)發(fā)酵[9-10]。

真菌是好氧菌，發(fā)酵時需要相對較低的溫度，而乳桿菌以及丁酸梭菌等益生菌需要在較高含量的速效碳源和速效氮源，較高溫度和較高含水量的條件下才能更好地生長，二者發(fā)酵條件差異較大，如果利用絲狀真菌或芽孢桿菌第一階段的發(fā)酵產(chǎn)物，作為乳桿菌、丁酸梭菌以及酵母菌等菌種二次發(fā)酵的基質(zhì)，會取得更好的發(fā)酵效果[11-13]。

2 中藥渣固態(tài)發(fā)酵工藝

2.1 含水量

中藥渣固態(tài)發(fā)酵的基質(zhì)含水量對發(fā)酵的結(jié)果和效率影響較大?；|(zhì)的含水量影響著胞外酶的分泌和轉(zhuǎn)移，影響氧的傳遞以及菌體生長。如果起始含水量太低，使菌種正常生長受到限制，同時由于發(fā)酵過程中的通風(fēng)和生物熱使基質(zhì)含水量進(jìn)一步降低，更不利于菌種生長；含水量過高，基質(zhì)密度過大，透氣性和傳熱性較差，也不利于菌種生長?？傮w上，細(xì)菌比真菌對基質(zhì)要求更高的含水量，多數(shù)細(xì)菌在營養(yǎng)充分的液體中更容易生長[14]。在利用植物乳桿菌、酵母菌等細(xì)菌菌種進(jìn)行復(fù)合發(fā)酵含有香菇、茯苓、銀耳等組成的中藥渣時，直接使用高濕的鮮藥渣，此時的含水量高于80%[15-16]；而在利用黑曲霉對三七渣進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵時[4]，和利用中國擬青霉對黃芪渣進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵時[14]，含水量為60%，在利用黑曲霉和產(chǎn)朊假絲酵母發(fā)酵三七渣時，含水量低至50%[17]。由于測定方法或判定標(biāo)準(zhǔn)不同，文獻(xiàn)報道的含水量差異較大，但是多數(shù)為60%～80%[14，18]。

2.2 接種量

接種量對中藥渣的固態(tài)發(fā)酵效果有顯著影響。接種量過低，菌種增殖緩慢，影響發(fā)酵進(jìn)程，發(fā)酵效率低，雜菌污染幾率大；當(dāng)接種量過大時，在發(fā)酵初期菌種迅速生長，會造成菌種之間相互競爭，對營養(yǎng)成分消耗過快，使菌體細(xì)胞老化較快，從而影響后期發(fā)酵。應(yīng)該根據(jù)菌種濃度來確定接種量，當(dāng)菌種濃度為107～108CFU/mL時，接種量通常為藥渣干質(zhì)量的5%～20%[5，12，19]，僅用基質(zhì)與菌液的體積比或質(zhì)量比不能夠全面反映接種量。

2.3 氮源

氮元素是蛋白質(zhì)、核酸合成的重要元素，微生物細(xì)胞中含有大約5%～13%氮元素。絕大多數(shù)微生物都可以利用氨基酸態(tài)氮和硝態(tài)氮以及簡單的有機氮（如尿素）為氮源，而大多數(shù)寄生性微生物和一部分腐生性微生物以有機氮（如蛋白質(zhì)、氨基酸）為氮源。氮源不足時，不利于微生物生長；而氮源過多時，使系統(tǒng)的滲透壓過大，也不利于菌種生長。中藥渣中氮源相對缺乏，固態(tài)發(fā)酵時應(yīng)該補充氮源。常用的無機氮源為硫酸銨[4，6]，常用的有機氮源為尿素[3]，豆粕[20]等。

2.4 碳源

碳源是微生物的重要營養(yǎng)物質(zhì)，其主要作用是構(gòu)成微生物細(xì)胞的碳架和供給微生物生長繁殖所需要的能量。在發(fā)酵時，絲狀真菌和芽孢桿菌可以產(chǎn)生纖維素酶，降解纖維素，生成單糖或寡糖，供自身生長以及增殖的需要。纖維素酶是一種誘導(dǎo)酶，當(dāng)培養(yǎng)基中含有大量的單糖或寡糖時，將對維素酶產(chǎn)生反饋抑制作用，不利于纖維素的降解[6]。因此，利用黑曲霉[17-18，21]、康寧木霉[6]以及芽孢桿菌[10，22-25]等作為菌種發(fā)酵中藥渣時，可以不需要外加碳源。一些菌種如酵母菌，乳桿菌等，對纖維素的降解能力較弱，如果利用這兩類菌種進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵時，應(yīng)該添加一定量的碳源作為補充[15]。常見的碳源為葡萄糖[14]、蔗糖[15]、蔗渣[26]、玉米漿[27]等。

“我們兩個老的，邊走邊看吧。那四個孩子，能不能爬出一行和尚與司徒一一設(shè)下的迷宮一般的隧道，還是未定之天。就是由隧道里爬過去，進(jìn)入了萬花谷，憑他們四個新人，真的能將萬花谷攪動起來？”

2.5 初始pH

大部分的微生物都有一個適宜生長的pH 范圍。如果pH不合適，不僅會妨礙微生物菌體細(xì)胞的正常生長，還會改變微生物的代謝途徑及其代謝產(chǎn)物，如黑曲霉生長的pH范圍為2.5～6.5，酵母菌生長的pH范圍為3.0～7.5。多數(shù)文獻(xiàn)的起始pH值均是中性[10，20]或弱酸性[6，17]。由于固態(tài)發(fā)酵體系的pH值無法隨時調(diào)節(jié)，通常在發(fā)酵前利用緩沖劑，如磷酸二氫鉀和磷酸氫二鉀將基質(zhì)的pH值調(diào)節(jié)為弱酸性[2，6]，使發(fā)酵能夠順利進(jìn)行。事實上，中藥渣多數(shù)是酸性的，低濃度的磷酸緩沖溶液并不足以決定加入菌種前的發(fā)酵體系pH，當(dāng)起始溶液為中性乃至弱堿性時，發(fā)酵仍然可以正常進(jìn)行，如黃芪渣本身的pH值為4.8，當(dāng)用1 mol/mL NaOH將起始溶液pH調(diào)節(jié)至5.5和8.5時，中國擬青霉仍可以正常發(fā)酵黃芪渣，且二者對纖維素降解率無顯著差異[14]。

2.6 發(fā)酵溫度

發(fā)酵溫度對發(fā)酵效果和效率都有比較大的影響。在固態(tài)發(fā)酵初期，溫度需要達(dá)到一定的條件，才可以保證發(fā)酵菌種正常生長；在發(fā)酵過程中，由于菌體代謝，會釋放大量的熱，使基質(zhì)溫度升高，容易造成物料板結(jié)，影響發(fā)酵正常進(jìn)行。真菌的發(fā)酵溫度一般比細(xì)菌的發(fā)酵溫度低，如黑曲霉最適宜生長溫度為28 ℃左右[2，4]，康寧木霉的發(fā)酵溫度為30 ℃[6]，中國擬青霉的發(fā)酵溫度低至20 ℃[14]；枯草芽孢桿菌的發(fā)酵溫度為37 ℃[5]，枯草芽孢桿菌與酵母菌等細(xì)菌組成的混合菌種發(fā)酵溫度在35 ℃以上[10，20，28]。

2.7 發(fā)酵時長

發(fā)酵時長并不是獨立的發(fā)酵工藝條件，受菌種和其他發(fā)酵工藝條件的影響較大。發(fā)酵時間太短，發(fā)酵不完全；發(fā)酵時間過長，菌種老化，產(chǎn)生有害的次級代謝產(chǎn)物，甚至造成菌體自溶[20]，如黑曲霉在35 ℃發(fā)酵48 h時，獲得最佳的生物量和催化活力[29]。中藥渣固態(tài)發(fā)酵的時長差異很大，利用植物乳桿菌等混合菌種對含有香菇的中藥渣發(fā)酵僅2 d，菌體濃度就達(dá)到109CFU/g[15]，而利用中國擬青霉對黃芪渣發(fā)酵35 d時，纖維素降解率達(dá)到最大值23.76%[14]。一般情況下，應(yīng)該根據(jù)生產(chǎn)實際需要和發(fā)酵效果，選擇合適的發(fā)酵時長，以提高生產(chǎn)效率。

除了以上主要發(fā)酵工藝條件以外，原料的預(yù)處理，輔料的選擇等對發(fā)酵的效果也有一定的影響。

3 中藥渣固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)品功效

3.1 中藥渣固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)品在生豬養(yǎng)殖上的應(yīng)用

將由黃芪等組成的中藥渣經(jīng)固態(tài)發(fā)酵后，按0.2%的比例添加到飼料中，飼喂妊娠85 d的健康二元母豬，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵中藥渣可使初生仔豬的堿性磷酸酶活性、抗氧化活性顯著升高，丙二醛濃度顯著降低[30-33]，可以顯著提高窩質(zhì)量和日增質(zhì)量[23]。中藥渣經(jīng)過兩步固態(tài)發(fā)酵后，按照0.5%的比例添加到妊娠90 d的母豬飼糧中，飼喂3周，可以顯著提升母豬腸道有益菌數(shù)量，提高功能性短鏈脂肪酸和生物胺含量[13]。發(fā)酵中藥渣同樣的功能也得到了李華偉等[34-35]的證實。

在飼料中添加0.5%芪楂口服液的固態(tài)發(fā)酵藥渣，飼喂斷奶仔豬，對仔豬肝臟無不利影響[9]，對腸道菌群穩(wěn)態(tài)無影響[28]，可以改善腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)，調(diào)節(jié)血脂濃度，提高生長性能、抗氧化能力和免疫力[36]。經(jīng)過固態(tài)發(fā)酵的熟地等中藥渣可在一定程度上提高斷奶仔豬的生長性能和養(yǎng)分消化率[24-25]。固態(tài)發(fā)酵的中藥渣高低劑量組的生豬料肉比均低于對照組，而且肉質(zhì)得到顯著改善[16]。

3.2 中藥渣固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)品在肉雞養(yǎng)殖上的應(yīng)用及對實驗動物的影響

在肉仔雞的基礎(chǔ)日糧中添加4%經(jīng)固態(tài)發(fā)酵的黃芪藥渣，飼喂26 d后，與空白組和未發(fā)酵藥渣組相比，日增質(zhì)量、日采食量顯著提高，而料肉比顯著降低。飼喂33 d后，新城疫抗體滴度、血清超氧歧化酶活性顯著高于空白組[37]。將固態(tài)發(fā)酵的紅參藥渣飼喂雄性SD大鼠2周后，可以增強大鼠的抗氧化能力，改善脂質(zhì)代謝，提高脾臟、胸腺指數(shù)[5]。固態(tài)發(fā)酵中藥渣對小鼠有不同程度的增質(zhì)量、抗疲勞、保肝護(hù)肝、增強機體免疫力的作用[10]，對脾虛型小鼠腸道菌群具有一定的調(diào)節(jié)作用[11]。

4 中藥渣固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)功能性飼料產(chǎn)業(yè)化發(fā)展緩慢的原因

盡管初步研究已經(jīng)顯示，中藥渣固態(tài)發(fā)酵物具有顯著的調(diào)節(jié)免疫力、抗氧化、促生長等功能，但是產(chǎn)業(yè)化程度還很低，很多中藥企業(yè)依然選擇焚燒、填埋的方式處理中藥渣，甚至無法處理，只能停止生產(chǎn)活動。中藥渣固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)功能性飼料產(chǎn)業(yè)化發(fā)展緩慢的原因，可能主要有以下幾點。

對中藥渣沒有建立相應(yīng)的分類分級體系。由于中藥組方的多樣性，以及中藥的提取目的和工藝不同，導(dǎo)致中藥渣復(fù)雜多樣。這給建立穩(wěn)定的固態(tài)發(fā)酵工藝帶來較大的挑戰(zhàn)，因此應(yīng)該首先根據(jù)中藥組方的功效、提取工藝，藥渣來源等進(jìn)行合理分類，挑出不適合作為飼料原料或添加劑以及不適宜微生物發(fā)酵的中藥渣后，根據(jù)主要營養(yǎng)成分進(jìn)行綜合評價分級，再根據(jù)分類分級結(jié)果，篩選合適的發(fā)酵菌種，優(yōu)化發(fā)酵工藝。

對發(fā)酵產(chǎn)品沒有建立相應(yīng)的評價標(biāo)準(zhǔn)?，F(xiàn)有文獻(xiàn)對發(fā)酵效果的評價方法差異很大，有些文獻(xiàn)評價指標(biāo)并不是發(fā)酵效果的主要指標(biāo)；有些文獻(xiàn)沒有評價活菌數(shù)等重要指標(biāo)。既使對同一指標(biāo)進(jìn)行評價時，評價方法也有較大差異。同時對產(chǎn)品的有毒有害成分沒有評價。沒有穩(wěn)定的品質(zhì)保證是阻礙固態(tài)發(fā)酵中藥渣在養(yǎng)殖業(yè)推廣的主要障礙之一。

對于發(fā)酵菌種與發(fā)酵工藝沒有進(jìn)行深入研究。從現(xiàn)有的文獻(xiàn)看來，我國對中藥渣固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)功能性飼料的研究還處于初級階段。對于菌種的選用主要限于數(shù)種絲狀真菌、酵母菌以及芽孢桿菌等，沒有深入篩選、改造中藥渣固態(tài)發(fā)酵的專用高效菌種。缺乏標(biāo)準(zhǔn)化的固態(tài)發(fā)酵工藝規(guī)程。一些研究團(tuán)隊僅利用同種發(fā)酵工藝研究對不同中藥渣的發(fā)酵效果，而沒有對特定中藥渣的發(fā)酵工藝進(jìn)行持續(xù)深入研究。

對發(fā)酵產(chǎn)品的活性成分和功能沒有深入研究。對食品、飲料、中藥材等發(fā)酵前后的活性成分、風(fēng)味成分的研究非常多，然而至今很少文獻(xiàn)報道中藥渣發(fā)酵前后活性成分和風(fēng)味成分的變化，僅有少量的文獻(xiàn)報道了發(fā)酵前后中藥渣營養(yǎng)成分的變化。對于中藥渣固態(tài)發(fā)酵后的功效研究僅停留在生產(chǎn)性能、肝臟功能、腸道菌群等方面，至于對免疫、抗炎、抗氧化等功能的報道比較缺乏。

5 結(jié)語

對中藥渣固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)功能性飼料的研究滯后或不足，可能與社會的認(rèn)識程度有關(guān)。如果認(rèn)為固態(tài)發(fā)酵中藥渣僅是處理廢棄物的手段，順便為養(yǎng)殖業(yè)提供飼料的部分替代品，那么固態(tài)發(fā)酵中藥渣依然是“渣”，依然未體現(xiàn)中藥渣的高附加值利用，而只有深度發(fā)掘并提高中藥渣固態(tài)發(fā)酵后的功能，重視發(fā)酵后的益生菌、生物酶、活性肽等功能性成分，才能夠?qū)崿F(xiàn)中藥渣的真正價值。