鄒創(chuàng)歡 金法 龍定超

氧化脂質(zhì)反應是指多不飽和脂肪酸發(fā)生自動氧化，或在相應的酶促催化作用下生成一系列氧化代謝物的過程[1]。氧化脂質(zhì)反應過程會生成一系列的代謝物質(zhì)，也稱為脂質(zhì)介質(zhì)，這類物質(zhì)在生命活動中起著非常重要的調(diào)控作用，包括炎癥反應、免疫防御、內(nèi)分泌調(diào)節(jié)，以及代謝應激等[2-5]。近年來，研究發(fā)現(xiàn)氧化脂質(zhì)代謝物在腫瘤、神經(jīng)退行性疾病、心血管系統(tǒng)疾病、消化系統(tǒng)疾病、泌尿系統(tǒng)疾病等疾病的發(fā)生發(fā)展過程中均都起到了重要的調(diào)控作用[6-9]。因此，氧化脂質(zhì)代謝物是機體重要的代謝物質(zhì)。閉合性顱腦損傷患者的神經(jīng)系統(tǒng)在創(chuàng)傷應激狀態(tài)下會出現(xiàn)代謝應激狀態(tài)，神經(jīng)細胞的能量供需平衡被打破，氧化脂質(zhì)代謝物因此出現(xiàn)較大變化，并對疾病的治療效果和預后有重要影響[10,11]。本研究對閉合性腦損傷患者中的氧化脂質(zhì)代謝物變化特征展開分析，現(xiàn)報道如下。

資料與方法

一、納入與排除標準

選擇2018 年1 月至12 月在番禺區(qū)第八人民醫(yī)院神經(jīng)外科及南方醫(yī)科大學珠江醫(yī)院神經(jīng)外科收治的閉合性顱腦損傷患者作為研究對象。納入標準：（1）閉合性顱腦損傷患者；（2）受傷時間、致傷機制明確，傷后3 h 內(nèi)送至醫(yī)院治療；（3）對照組選取18～70 歲的健康成年人。排除標準：（1）出現(xiàn)腦疝等腰椎穿刺取腦脊液風險大的；（2）合并其他顱腦疾病的患者，如腦動脈瘤、腦腫瘤、顱內(nèi)感染等；（3）既往有代謝性疾病的患者；（4）慢性疾病及惡病質(zhì)的患者；（5）研究期間再次出現(xiàn)外傷或因其他疾病不適合繼續(xù)本項研究的患者；（6）研究期間死亡的病例；（7）研究期間自動退出、隨訪有中斷的患者。本項目的開展均告知患者本人或家屬并獲得同意，且得到了相關醫(yī)學倫理委員會的審查并批準進行。

二、一般資料

按照納入與排除標準入組閉合性顱腦損傷患者60 例，按照GCS 評分標準分為輕型組（GSC 13～15分）、中型組（GSC 8～12 分）、重型組（GSC 3～7 分），每組20 例。以20 例健康成年人腦脊液（自愿捐獻）作為對照組，各組患者的性別構成、年齡等基本情況差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性（表1）。

三、氧化脂質(zhì)代謝物液相質(zhì)譜法檢測

在患者發(fā)病后1 周，通過腰椎穿刺法獲取腦脊液5 mL，然后在14000 g、4℃，離心20 min，取上清，-80℃冰箱保存。對照組中正常成年人捐獻腦脊液者隨機抽取。采用Shimadzu Nexera X2 LC-30AD 超高效液相色譜進行分離。流動相：A 液為5%乙腈水溶液，20 mmol/L 乙酸銨，pH 9.45；B 液為100%乙腈。樣品至于4℃自動進樣器中，柱溫40℃，流速300 μL/min。然后使用QTRAQ5500 質(zhì)譜儀（AB SCIEX）在正/負離子模式下進行質(zhì)譜分析。ESI 源參數(shù)如下：正離子模 式：Source Temperature 550℃，Ion Source Gas1（GAS1）：40，Ion Source Gas2（GAS2）：50，Curtain Gas（CUR）：35，Ion Spray Voltage Floating（ISVF）：5500 V；負離子模式：Source Temperature 550℃，Ion Source Gas1（GAS1）：40，Ion Source Gas2（GAS2）：50，Curtain Gas（CUR）：35，Ion Spray Voltage Floating（ISVF）：-4500 V。

表1 4 組患者基本信息對比

四、臨床預后評估

所有患者在第6 個月時進行美國國立衛(wèi)生研究院卒中量表（National Institute of Health stroke scale，NIHSS）評分以評估患者的臨床預后。

五、統(tǒng)計學分析

使用SPSS20.0 軟件處理數(shù)據(jù)，計量資料用均數(shù)±標準差（Mean±SD）表示，采用2 組間樣本的t 檢驗或多組樣本的F 檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，相關性關系采用Bivariate 相關性檢驗，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

結果

一、閉合性顱腦損傷組患者腦脊液氧化脂質(zhì)代謝物變化特征

與對照組腦脊液氧化脂質(zhì)代謝物比較，閉合性顱腦損傷患者共檢測到3 個水平升高代謝物、5個水平降低代謝物（FC≥1，P＜0.05）。水平升高的氧化脂質(zhì)代謝物為：LTB4、5-oxoETE、15-oxoETE，水平降低的氧化脂質(zhì)代謝物為：PGJ2、LXA4、PGF3α、TXB3、RVD5。其中，僅15-oxoETE 的變化趨勢與病情嚴重程度存在依賴性（P＜0.05）。具體信息見圖1。

二、氧化脂質(zhì)代謝物15-oxoETE 與NIHSS 評分的相關性

氧化脂質(zhì)代謝物15-oxoETE 與臨床預后NIHSS評分在不同程度顱腦損傷患者間，以及與所有顱腦損傷患者均呈顯著正相關（r>0，P<0.05），且15-oxoETE水平越高，患者NIHSS 評分越高，也即是患者預后越差（圖2）。

討論

腦脊液在中樞神經(jīng)系統(tǒng)處于循環(huán)的狀態(tài)，充滿在各腦室、蛛網(wǎng)膜下腔和脊髓中央管內(nèi)。中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病狀態(tài)時，神經(jīng)細胞代謝物質(zhì)的變化會影響腦脊液成分變化，從而影響疾病進展和臨床預后[12-13]。

圖1 4 組患者的腦脊液中氧化脂質(zhì)代謝物變化特征

圖2 氧化脂質(zhì)代謝物15-oxoETE 與NIHSS 評分相關性分析

本研究通過液相質(zhì)譜法探索了閉合性顱腦損傷患者腦脊液中氧化脂質(zhì)代謝物差異特征及其與臨床預后的關系，結果發(fā)現(xiàn)，與正常成年人群腦脊液氧化脂質(zhì)代謝物比較，閉合性顱腦損傷患者共檢測到3個水平升高代謝物、5 個水平降低代謝物（2 倍及以上）。其中，水平升高的氧化脂質(zhì)代謝物分別為LTB4、5-oxoETE、15-oxoETE，水平降低的分別為PGJ2、LXA4、PGF3α、TXB3、RVD5。筆者通過檢索國內(nèi)外研究報道對上述差異顯著物質(zhì)進行分析，文獻報道顯示LTB4 參與調(diào)控哮喘、子宮內(nèi)膜異位癥、氣道高反應性、急性腸炎、炎癥性疾病及系統(tǒng)性硬化癥等疾病過程[14-16]；5-oxoETE 參與調(diào)控哮喘、腫瘤、炎癥性疾病過程[14,17]；PGJ2 在視神經(jīng)病變、帕金森病、腫瘤、阿爾茨海默病中有調(diào)控作用[18]；LXA4 除參與調(diào)控哮喘、子宮內(nèi)膜異位癥、氣道高反應性、急性腸炎、炎癥性疾病及系統(tǒng)性硬化癥等疾病外，還對參與缺血再灌注損傷、冠心病也有相關研究報道[19-20]；RVD5 參與調(diào)控了肥胖、器官損傷、阿爾茨海默病、肺動脈高壓、感染燒傷、關節(jié)炎等疾病過程[21]；目前對PGF3α、TXB3 的作用研究尚不深入。本研究顯示，15-oxoETE 的變化趨勢與病情嚴重程度存在依賴性，閉合性顱腦損傷病情越重，15-oxoETE 水平較正常人水平增高越明顯。因此，15-oxoETE 可作為一個閉合性顱腦損傷病情嚴重程度的生化評價指標。病情的嚴重程度往往對臨床預后有嚴重的影響，本研究顯示，患者治療后第6 個月時的NIHSS評分與15-oxoETE 水平顯著正相關，也就是說高水平的15-oxoETE 預示患者臨床預后較差。結合目前15-oxoETE 的研究報道，15-oxoETE 具有抑制血管重塑、減少抗炎癥細胞類型的作用[17]。筆者認為，在閉合性顱腦損傷發(fā)生后，15-oxoETE 一方面加重了患者的炎癥作用，另一方面則因為抑制血管重塑導致了神經(jīng)細胞缺血缺氧的持續(xù)發(fā)生，因此導致疾病預后較差。

綜上所述，閉合性顱腦損傷患者的腦脊液氧化脂質(zhì)代謝特征發(fā)生了較大變化，尤其是15-oxoETE水平高預示患者的臨床預后較差，可作為一個臨床病情嚴重程度和臨床預后預測的參考指標。