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        宮頸癌組織中Ep-CAM和Ki67的表達(dá)及臨床意義

        2020-01-17 02:16:48丁文文楊雪琴
        關(guān)鍵詞:陽性細(xì)胞宮頸癌陽性率

        周 靜,李 智,周 玉,丁文文,楊雪琴

        (1. 荊楚理工學(xué)院醫(yī)學(xué)院,湖北荊門 448000;2. 湖北省荊門市東寶區(qū)人民醫(yī)院醫(yī)務(wù)部,湖北荊門 448000;3. 湖北省荊門市第一人民醫(yī)院醫(yī)務(wù)部,湖北荊門 448000)

        根據(jù)2018年《全球癌癥公報(bào)》,宮頸癌依然是嚴(yán)重威脅女性健康的一類疾病,其發(fā)病率和死亡率在全球女性位居第四位[1],我國宮頸癌的發(fā)病率目前占亞洲國家的22%,因此對宮頸癌基礎(chǔ)和臨床研究仍是緊迫的任務(wù)[2]。目前國內(nèi)外關(guān)于上皮細(xì)胞黏附分子(epithelial cellular adhesion molecule,Ep-CAM)在宮頸癌的研究尚不多見,本研究通過對宮頸組織分類和分層進(jìn)行Ep-CAM聯(lián)合細(xì)胞增殖核抗原67(Ki67)檢測,以期在分子水平探索對宮頸癌有價(jià)值的標(biāo)志物。

        1 材料與方法

        1.1 研究對象 選取2017年2月~2018年12月在荊門市第一人民醫(yī)院和荊門市東寶區(qū)人民醫(yī)院進(jìn)行宮頸組織活檢的患者234例,均符合倫理委員會要求。年齡25~73歲,平均年齡46.3±8.6歲,其中宮頸癌94例(浸潤性鱗癌50例,腺癌44例),鱗狀上皮內(nèi)病變(squamous intraeithelral lesion,SiL)90例(其中LSiL 45例,HSiL 45例),正常宮頸組織50例。宮頸癌患者IA~ⅡA期49例,ⅡB~Ⅳ期45例。所有病例均經(jīng)病理科高級職稱醫(yī)師確診。

        納入標(biāo)準(zhǔn):所有研究對象均為初診,已婚女性,年齡25~75歲。宮頸原發(fā)性癌,LSiL和HSiL,正常宮頸組織(除外慢性宮頸炎)。研究對象均知情同意。

        排除標(biāo)準(zhǔn):年齡<25歲或>75歲,宮頸轉(zhuǎn)移性癌,病理診斷不夠明確者。

        1.2 試劑和儀器

        1.2.1 主要儀器:SHANDON PATHCENTRE全自動(dòng)密封式脫水機(jī),MICROM石蠟包埋機(jī)(EC300),MICROM HM340E切 片 機(jī),MICROM HMS760X染色機(jī),奧林巴斯BX43顯微鏡。

        1.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑:由AB公司提供的Ep-CAM試劑盒(批號2018091301);DAKO公司提供的 Ki67試劑盒(批號20058907);二抗選自德國Leica novocastra NovoLink聚合物檢測系統(tǒng)RE7280-K檢測試劑盒。

        1.3 方法

        1.3.1 操作步驟:每個(gè)病例切4張石蠟切片,其中1張進(jìn)行常規(guī)HE染色,核實(shí)診斷。另外3張進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色,具體操作:(1)福爾馬林固定組織;(2)脫水、包埋、切片3~4μm;(3)染色:脫蠟,抗原修復(fù),滴加抗體,顯色、襯染、封片。

        1.3.2 Ep-CAM陽性判斷[3]:觀察每高倍鏡視野下陽性細(xì)胞平均數(shù)的百分比,計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)為:0%~5%計(jì)0分,6%~25%計(jì)1分,25%~50%計(jì)2分,51%~75%計(jì)3分,>75%計(jì)4分;染色強(qiáng)度依據(jù)多數(shù)陽性細(xì)胞的顯色特征為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)分:無顯色計(jì)0分,顯淡黃色計(jì)1分,顯棕黃色計(jì)2分,顯棕褐色計(jì)3分。上述兩項(xiàng)分值相加得出結(jié)果,0~1分為陰性(-),2~3分為弱陽性(+),4~5分為中等陽性(++),6~7分為強(qiáng)陽性(+++)。其中(-)和(+)記為低表達(dá)組,(++)和(+++)記為高表達(dá)組。

        1.3.3 Ki67陽性判斷[4]:細(xì)胞胞核顯示棕黃色顆粒視為陽性細(xì)胞。每張切片選取一個(gè)高倍鏡視野,計(jì)算3張切片的平均陽性率。宮頸癌選取癌細(xì)胞浸潤區(qū)域。若陽性細(xì)胞數(shù)<6%為(-),陽性細(xì)胞數(shù)6%~28%為(+),陽性細(xì)胞數(shù)29%~78%為(++),陽性細(xì)胞數(shù)>78%為(+++),(++)和(+++)記為高表達(dá)組。

        1.3.4 宮頸癌的臨床分期:參照Figo2018宮頸癌分期。

        1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS21.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料用百分?jǐn)?shù)表示,采用卡方檢驗(yàn),計(jì)算χ2值和P值,P<0.05為差異有顯著性意義。

        2 結(jié)果

        2.1 不同狀態(tài)宮頸組織Ep-CAM,Ki67的陽性表達(dá) 見表1,圖1。Ep-CAM,Ki67在宮頸癌組織的陽性率與LSiL組織比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=139.000,121.473,P=0.000),與 正 常 宮頸組織比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=144.000,133.164,P=0.000);Ep-CAM在HSiL組 織 中的陽性率與宮頸癌組織比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.326,P=0.124),而Ki67組 織 與 宮 頸癌組織陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=13.099,P=0.000)。

        表1 不同狀態(tài)宮頸組織Ep-CAM,Ki67的陽性表達(dá)[n(%)]

        2.2 宮頸癌組織不同病理類型Ep-CAM,Ki67高表達(dá)率的比較 結(jié)果見表2,圖2。分別對宮頸癌組織中浸潤性鱗癌和腺癌兩種病理類型進(jìn)行Ep-CAM,Ki67高表達(dá)率的比較Ep-CAM差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而Ki67無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

        表2 宮頸浸潤性鱗癌和腺癌Ep-CAM,Ki67高表達(dá)率的比較[n(%)]

        2.3 宮頸癌不同臨床分期Ep-CAM,Ki67高表達(dá)率的比較 見表3。94例宮頸癌患者IA~ⅡA期49例,ⅡB~Ⅳ期45例。比較不同臨床分期宮頸組織Ep-CAM,Ki67表達(dá)率,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。

        圖1 宮頸鱗癌Ep-CAM,Ki67陽性表達(dá)

        圖2 宮頸腺癌Ep-CAM,Ki67陽性表達(dá)

        表3 宮頸癌不同臨床分期Ep-CAM,Ki67高表達(dá)率的比較[(n(%)]

        3 討論

        近年來學(xué)者不斷致力于腫瘤分子的研究,希望給腫瘤患者的診療帶來更多的益處。Ep-CAM,亦被稱為CD326,是一種I型跨膜糖蛋白分子,表達(dá)于部分正常組織和上皮組織源性的惡性腫瘤,通過對腫瘤干細(xì)胞、實(shí)質(zhì)與間質(zhì)黏附力、腫瘤信號傳導(dǎo)、腫瘤微環(huán)境等方面的影響促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖與擴(kuò)散[5-6]。目前國內(nèi)學(xué)者對于Ep-CAM在宮頸癌方面的研究非常少,國外學(xué)者報(bào)道Ep-CAM對宮頸癌的進(jìn)展及嚴(yán)重程度有預(yù)測作用[7]。Ki67是一種與細(xì)胞增殖有關(guān)的核內(nèi)蛋白,通過對細(xì)胞周期的影響促進(jìn)細(xì)胞的增殖,能夠協(xié)助判斷腫瘤細(xì)胞的增殖狀態(tài),從而判斷預(yù)后[8]。本研究對比其他宮頸組織,對宮頸癌組織進(jìn)行Ep-CAM和Ki67聯(lián)合檢測,一方面研究Ep-CAM在宮頸組織不同狀態(tài)的表達(dá)情況,另一方面在Ki67的陽性表達(dá)基礎(chǔ)上,通過Ep-CAM的表達(dá)分析腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為,并進(jìn)一步對不同病理類型、不同臨床分期進(jìn)行研究分析。

        首先對Ep-CAM和Ki67在宮頸癌中的表達(dá)進(jìn)行研究。結(jié)果顯示,Ep-CAM和Ki67在宮頸癌組織中的陽性率均為100%,在LSiL的陽性率分別為 0%和 9%,在HSiL的陽性率分別為91%和 87%,在正常宮頸組織的陽性率分別為 0%和6 %。對上述結(jié)果進(jìn)行分析,相比較Ep-CAM,Ki67在LSiL和正常宮頸組織低表達(dá),而在宮頸癌組織中高表達(dá),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。宮頸癌Ep-CAM的陽性率雖然高于HSiL,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,兩者Ki67的陽性率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。尤其是Ep-CAM值得一提,在正常宮頸組織和LSiL幾乎不表達(dá),但在HSiL與宮頸癌中明顯表達(dá),表明Ep-CAM能夠很好提示宮頸異型性細(xì)胞的存在,并與異型性程度呈正比,是宮頸癌敏感性很強(qiáng)的腫瘤分子。Ki67則能夠很好提示惡性腫瘤細(xì)胞的增殖。因此Ep-CAM和Ki67能反映宮頸癌細(xì)胞的分化程度,對臨床腫瘤診斷可起到輔助作用。

        本研究還進(jìn)一步對宮頸癌浸潤性鱗癌和腺癌兩種病理類型進(jìn)行研究,分析比較Ep-CAM,Ki67的高表達(dá)率,結(jié)果表明宮頸浸潤性鱗癌Ep-CAM的高表達(dá)高于腺癌,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Ki67的高表達(dá)率兩者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明Ep-CAM在鱗狀上皮中的表達(dá)強(qiáng)于腺上皮,可能不同腫瘤干細(xì)胞來源的細(xì)胞腫瘤分子的表達(dá)有差異。

        本研究還對宮頸癌患者不同的臨床分期進(jìn)行研究,比較早期宮頸癌與中晚期宮頸癌組織Ep-CAM,Ki67的高表達(dá)率。有研究表明,Ki67病變部位與陽性表達(dá)部位基本一致,并且病變部位級別越高陽性程度越高[9]。本研究結(jié)果表明,中晚期宮頸癌Ep-CAM和Ki67高表達(dá)率顯著高于早期,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。說明Ep-CAM和Ki67兩個(gè)標(biāo)志物通過各自不同的機(jī)制關(guān)聯(lián)宮頸癌細(xì)胞的浸潤與轉(zhuǎn)移。這一點(diǎn)不僅能夠幫助臨床從分子學(xué)角度進(jìn)行預(yù)后評價(jià),還可以為宮頸癌的分子治療提供理論依據(jù)。國外有學(xué)者[10]體外以Ep-CAM抗體為基礎(chǔ)進(jìn)行免疫治療,為多種侵襲性腫瘤的治療帶來曙光。Ep-CAM抗體對宮頸癌的作用也仍然值得期待。

        綜上所述, Ep-CAM和Ki67可作為宮頸癌的有效腫瘤標(biāo)志物,既能提供協(xié)助診斷依據(jù),還能評估癌細(xì)胞增殖狀態(tài),預(yù)測浸潤及轉(zhuǎn)移。希望研究結(jié)果還能進(jìn)一步為宮頸癌的抗體治療提供依據(jù)。本課題組還將繼續(xù)結(jié)合HPV的感染以及晚期患者的生存期進(jìn)行研究,以期進(jìn)一步明確Ep-CAM和Ki67在宮頸癌中的作用機(jī)制及臨床應(yīng)用價(jià)值。

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